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文档简介

一、试验目标了解细胞融合原理初步掌握聚乙二醇法诱导细胞融合试验方法。细胞融合专业知识讲座第1页二、试验内容㈠试验原理细胞融合是指在自然条件或利用人工方法（生物、物理，化学），使两个或两个以上细胞合并成一个含有双核或多核细胞过程。利用人工诱导方法，不但能够使同种细胞发生融合，而且能够使不一样种间细胞发生融合。

人工诱导方法很多，如：聚乙二醇（PEG）法、灭活仙台病毒诱导法、电场融正当等。细胞融合专业知识讲座第2页聚乙二醇（polyethyleneglycol,PEG）法原理：PEG分子能改变各类细胞膜结构，使两细胞接触点处质膜脂类分子发生疏散和重组，因为两细胞接口处双分子层质膜相互亲合以及彼此表面张力作用，使细胞发生融合。细胞融合专业知识讲座第3页㈡试验方法1.处死蟾蜍。2.取血：注射器内吸收1mlAlsver液，再吸收1ml蛙血，加入已盛有8mlAlsver液玻璃离心管。3.分别取1ml细胞悬液移入塑料离心管中，加入0.85%生理盐水4ml混匀，1200r/min，离心5min。4.弃去上清液，再加入0.85%生理盐水至5ml，混匀，离心。5.重复步骤4。细胞融合专业知识讲座第4页6．搜集最终一次离心沉淀血细胞，加入1mlGKN液混匀。（按压积红细胞体积配成10%红细胞悬液）7．再加入0.5ml预热50%PEG混匀，室温下分别于2min、15min取一滴该悬液于洁净载玻片上，盖上盖玻片显微镜下观

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