气相色谱-质谱法同时测定肉制品中12种多环芳烃化合物

气相色谱-质谱法同时测定肉制品中12种多环芳烃化合物

多环芳烃（pahs）是一种含有2或2个以上苯环的碳氢化合物。这些苯环是线性的、角状的或团块的。1材料和方法1.1质谱过滤器和固相萃取装置7890A气相色谱仪、7683自动进样器、5975C质谱检测器(美国Agilent公司);固相萃取装置(美国Supelco);芘、萘、蒽、苯并(a)蒽、菲、芴,1.2方法1.2.1提取有机相、离心有机相将肉制品于粉粹机中粉碎,制成匀浆,用千分之一天平准确称取匀浆样品3.0g于研钵中,加入3g无水硫酸钠,充分研磨至粉末状,转移到50ml具塞离心管中,用10ml正己烷-丙酮(体积比1∶1)溶液分2次冲洗研钵并转移到离心管中,闭塞,在漩涡器上漩涡1min,分别超声提取2次,每次20min,再以5000r/min离心5min,将有机相转入30ml氮吹管中,再分2次加入5ml正己烷-丙酮溶液(体积比1∶1)重复提取、离心后,将有机相全部转移入氮吹管中。然后将氮吹管中提取液用氮气流吹至溶液约0.5ml时,加入1ml正己烷,通过经正己烷-二氯甲烷(体积比1∶1)溶液活化的中性氧化铝柱滤入另一氮吹管中,再用5ml正己烷-二氯甲烷(体积比1∶1)溶液清洗氮吹管,转入氧化铝柱,后用10ml正己烷-二氯甲烷溶液分2次进行淋洗,每次5ml,淋洗液并入氮吹管中,弱氮气流吹至近干,将氮吹管放于冰浴上,用1ml正己烷溶解残渣,(必要时离心)转入进样瓶中待测。1.2.2混合标准液分别称取一定量的标准品用正己烷溶解,配制成1.00mg/ml的标准储备液,难溶于正己烷的用苯溶解。分别吸取各标准储备液100μl于10ml含有正己烷的容量瓶中,用正己烷稀释至刻度,即为10μg/ml混合标准液。吸取此混合标准液0.10ml、0.30ml、0.50ml、1.00ml、2.00ml、5.00ml分别于10ml容量瓶中,正己烷定容至10ml,混匀,各PAH的浓度分别为0.10μg/ml、0.30μg/ml、0.50μg/ml、1.00μg/ml、2.00μg/ml、5.00μg/ml,分别进样色谱-质谱分析,以PAH的浓度(μg/ml)为横坐标,各化合物的峰面积为纵坐标进行线性回归,建立各PAH的线性回归方程。1.2.3脉冲场水质条件色谱柱:DB-1701MS(30m×0.25mm,0.25μm);载气:高纯氦气(纯度99.999%),流速为1.0ml/min;柱温程序:初始温度为80℃,保持1min,再以5℃/min升至110℃,保持1min,再以10℃/min升至200℃,保持5min,最后以5℃/min升至260℃,保持16min;进样口温度为320℃,脉冲不分流进样;接口温度为280℃,溶剂延迟时间5min;离子源温度为230℃,四级杆温度为150℃,电子轰击能量为70eV;进样量为2μl;全扫描测定方式(扫描范围为50amu~500amu)或选择离子监测方式。图1为总离子流图。表1为12种PAHs的保留时间,定性与定量离子。2结果2.1提取方法的选择样品中多环芳烃的提取方法很多,如索氏提取法2.2品中避免黏连肉制品中含有一定量的水分,影响提取液的提取效率,加入一定量的无水硫酸钠(加入比例视含水量的多少而定),既可脱水,又可使组织松散,避免样品黏连。本实验分别将2份样品同时加入1.0ml5.0μg/ml的PAH标准混合液,1份加3g无水硫酸钠,1份不加,进行结果比较,发现未加无水硫酸钠的回收率只有17%~43%,均低于50%,加无水硫酸钠的样品回收率为78.1%~101.2%,回收率均>70%。2.3净化柱的选择由于肉类样品基体复杂,存在脂肪、蛋白质等众多干扰因素,因此需经混合有机溶剂提取后再进行净化处理,以消除共存物对目标化合物测定的干扰。本实验比较了4种实验室常用的净化柱,分别是中性氧化铝、弗罗里硅土、碳氨柱、XTR。将4份平行加标(1ml5.0μg/ml)样品经提取液提取浓缩后,正己烷溶解,分别过经正己烷-二氯甲烷溶液(体积比1∶1)活化的净化柱,最后进行全扫描模式分析测定,结果除中性氧化铝柱外,其他萃取柱所净化的样品在25min~30min有一段很大的未知峰。故本实验选用中性氧化铝柱净化样品提取液。2.4方法的线性范围、检出限和定量限分别吸取10μg/ml混合标准液0.10ml、0.30ml、0.50ml、1.00ml、2.00ml、5.00ml于10ml容量瓶中,正己烷定容,浓度分别为0.10μg/ml、0.30μg/ml、0.50μg/ml、1.00μg/ml、2.00μg/ml、5.00μg/ml,在优化好的色谱-质谱条件下,各进样2μl,以PAHs的浓度为横坐标,记录各PAHs的保留时间和峰面积,以各PAH的峰面积为纵坐标对各自的浓度进行线性回归,建立各PAHs的线性回归方程。以3倍信噪比对应的浓度(μg/ml)作为仪器的检出限,以10倍信噪比为方法的定量限,如取样量为3.0g,定容体积为1.0ml,则可计算得到方法的定量限。结果表明,仪器检出限为0.04ng/ml~45ng/ml,按本法称样量计算,除二苯并(a,h)蒽的定量限为49μg/kg外,其余PAHs的定量限为0.04μg/kg~3.9μg/kg(表2)。2.5方法的精密度和准确度在空白样品中添加10μg/ml混合标准液1.00ml,按样品处理后,平行测定6次以计算方法精密度,本法相对标准差(RSD)为2.48%~9.60%,精密度满足食品分析要求(表3)。2.6加标回收率称取烟熏腊肉类样品3.0g分别加入0.50μg/ml、1.00μg/ml、5.00μg/ml标准混合液1.0ml,并作平行样分析,按本法进行样品处理和测定,计算方法回收率。烟熏腊肉类样品回收率在72.9%~101.7%,平均回收率为87.9%。回收率均符合食品分析要求(表4)。2.7实际猪肉和新鲜牛肉的pahs测定随机在宜宾市区的超市、农贸市场、小商贩处采集烟熏腊肉类10份,并采集了2份市售新鲜猪肉和新鲜牛肉,对其进行PAHs的测定,发现2个苯环及3个苯环的PAHs检出率高,特别是萘的检出率最高,而且其含量也高,在烟熏腊肉最