禽肉中8种多溴联苯醚残留量的测定

禽肉中8种多溴联苯醚残留量的测定

[研究意义]多溴异苯醚是溴化合金（pbbs）的一种代阻塞阻滞剂。它通常用作电子、化工、木材、纺织、石油、采矿和其他领域的额外阻滞剂。1材料和方法1.1改性双溴双环[4-2,2]pbde仪器：高速粉碎机FW80（中国天津泰斯特仪器有限公司）；快速溶剂萃取仪ASE-300（美国戴安公司）；旋转蒸发仪R-300（瑞士Buchi）；涡旋混合器MX-S（中国东迈科技仪器有限公司）；氮吹仪N-EVAP-112（美国Organomation）；气相色谱仪6890N（美国安捷伦公司），配电子捕获检测器（ECD）；破壁料理机JYL-C022E（中国九阳股份有限公司）；真空冷冻干燥机Pilot2-4LD（中国北京博医康实验仪器有限公司）。试剂：正己烷、壬烷、二氯甲烷均为农残级，购于迪马科技有限公司；丙酮为农残级购自于上海安谱实验科技有限公司；硅胶（75～250µm）购于上海怀聪生物科技有限公司。PBDEs标准溶液，包括2,2’,4,4’-四溴二苯醚（BDE-47,CAS:5436-43-1,50.0mg/L;2,2’,4,4’,5-五溴二苯醚（BDE-99,CAS:60348-60-9,50.0mg/L);2,2’,4,4’,5,5’-六溴二苯醚（BDE-153,CAS:68631-49-2,50.0mg/L);2,2’,3,4’,4,5’,6’-七溴二苯醚（BDE-183,CAS:207122-16-5,50.0mg/L）；十溴二苯醚（BDE-209,CAS:1163-19-5,50.0mg/L);3-甲氧基-2,2’,4,4’-四溴二苯醚（3-MeO-BDE-47,CAS:N/A,50.0mg/L);5-甲氧基-2,2’,4,4’-四溴二苯醚（5-MeO-BDE-47,CAS:N/A,50.0mg/L);6-甲氧基-2,2’,4,4’-四溴二苯醚（6-MeO-BDE-47,CAS:N/A,10.0mg/L）均购自美国AccuStandard公司。混合标准工作液：将8种PBDEs的标准溶液用壬烷逐级稀释混合配制成1mg/L的8种PBDEs的标准工作液并保存于-20ºC冰箱内，有效期6个月。酸性硅胶柱的制备：取一定量100目～200目事先经550ºC活化12h并干燥保存的活性硅胶，将浓硫酸按照与硅胶质量比为11∶14和3∶7的比例逐滴与硅胶充分混合并振荡，直至获得均匀的混合物，分别制得44%酸性硅胶和30%酸性硅胶；取一定量无水硫酸钠660ºC干燥不少于6h保存；于内径为15mm的层析柱，依次装入1g活性硅胶、10g44%酸性硅胶、2g30%酸性硅胶、2g活性硅胶和6g无水硫酸钠，干法装柱。1.2方法1.2.1冷冻干燥禽肉样品用破壁料理机搅拌成浆状，置于真空冷冻干燥机中于-20ºC、真空度为1Pa条件下冷冻干燥72h，再用高速粉碎机将样品打碎成粉末，置于-20ºC冰箱中保存。1.2.2萃取条件及温度准确称取5.0g试样于烧杯中，与10.0g无水硫酸钠混合均匀，转移至加速溶剂萃取池中进行提取。提取条件为萃取溶剂，正己烷∶二氯甲烷=1∶1(v/v）；压力，10.3MPa(1500psi）；温度，100ºC；加热时间，5min；静态提取时间，8min；吹扫时间120s循环3次。样品提取液转移至平底烧瓶中，用少量正己烷分3次清洗接收瓶，并将提取液旋蒸浓缩至近干，加5mL正己烷复溶，待净化。1.2.3酸性硅胶柱洗脱用30mL正己烷预淋洗酸性硅胶柱后，将待净化液加入柱中，并用3mL正己烷清洗3次，清洗液一并加入柱中，当液面接近净化柱最上层，再用80mL正己烷∶二氯甲烷=1∶1(v/v）对酸性硅胶柱进行洗脱，收集上样液和洗脱液，旋蒸浓缩至3～5mL转移至试管，3mL正己烷清洗3次，氮气吹干，200µL壬烷复溶待测。1.2.4氮气检测条件色谱柱：HP-5(30m×320µm×0.25µm）。升温程序：初始柱温140℃，保持2min；再以25℃/min升至180℃，保持5min；再以5℃/min升至260℃，保持5min；最后以15℃/min升至310℃，保持10min。载气为高纯氮气，流速为2mL/min；检测器300℃；进样量1µL，进样口温度：265℃。进样模式：不分流进样。2结果与分析2.1机器条件优化本研究初始气相条件参考由宗政等2.2酸性硅胶柱的制备在PBDEs的检测方法中，生物样品中的大量油脂和杂质主要是通过浓硫酸、GPC和固相萃取柱来去除。样品中直接添加浓硫酸，除脂能力最强，但其可能会引起化合物的不稳定，且操作较为危险；GPC除脂效果显著，但是除脂能力有限，普通净化柱只能去除0.5g左右脂肪，超过这个脂肪量则会引起柱堵塞；固相萃取小柱重现性好且适合批量生产，但是普通规格的小柱除脂能力较难达到本研究的要求。因此本文结合浓硫酸和固相萃取柱的优点，参考EPA1614的复合硅胶柱的制作方法，制成酸性硅胶柱，为达到最佳的净化效果，本文对酸性硅胶柱的洗脱条件进行了摸索。以标准品配制含100µg/L的8种多溴联苯醚的提取液上净化柱，选用正己烷和正己烷∶二氯甲烷（1∶1,v/v）作为洗脱溶剂，分段收集洗脱液，每段收集20mL，测定洗脱液，结果见图3。结果采用正己烷洗脱时，80mL能将BDE-47、BDE-99、BDE-153、BDE-183基本洗脱下来，但MeO-BDE由于极性较弱无法洗脱，而以以正己烷∶二氯甲烷（1∶1）作为洗脱溶剂，60mL能够基本洗脱，80mL可以完全洗脱，因此本研究确定以正己烷∶二氯甲烷（1∶1）作为方法的洗脱溶剂，洗脱体积为80mL。2.3标准曲线的绘制移取1mg/L的PBDEs混合标液，壬烷逐级稀释，配制质量浓度分别为0.5,1,2,20,50,100,200,500µg/L的PBDEs标准工作液，气相色谱进行检测，标准品色谱图见图2，以横坐标作为质量浓度，纵坐标作为响应峰面积，作标准曲线，8种PBDEs具有良好的线性关系，结果见表1。采用优化的前处理方法和仪器条件，进行一系列低水平加标回收试验，以3倍和10倍信噪比（S/N）来确定检出限（LOD）和定量限（LOQ），结果，BDE-209的检出限（LOD）为0.125µg/kg其余7种PBDEs的检出限为0.025µg/kg;BDE-209的定量限（LOQ）为0.4µg/kg其余7种PBDEs的定量限为0.1µg/kg。目前国内外尚未规定食品中PBDEs的限量标准，但EPA规定商用十溴联苯醚每日可摄入计量为10µg/kg；商用八溴联苯醚每日可摄入计量为3µg/kg；商用五溴联苯醚每日可摄入计量为2µg/kg，按照可摄入量计量要求，本方法的检出限应能满足PBDEs的检测要求。且与一些相关的研究报道相比较，例如李敏洁2.4准确度和精密度以空白鸡肉样品为代表进行添加回收实验，设置方法定量限以及1.0µg/kg和10.0µg/kg3个水平，每个水平重复5次，同时设置空白对照，按照本研究建立的前处理方法和仪器方法进行检测，用基质标定量，计算回收率和精密度（RSD）。添加回收结果见表2。从表2中可以看出8种PBDEs在鸡肉中的平均加标回收率为66.0%～146.7%，相对标准偏差为2.8%～11.4%。本方法的准确度