旋覆花化学成分及其抗炎活性研究

旋覆花化学成分及其抗炎活性研究

《中国药典》2010年版中的花是蔷薇科植物的花，属于植物的花。i.brianin。作为一种传统的中药，它主要分布在欧洲、非洲和亚洲的中国、韩国和日本。1测定柱及试剂BrukerAV400核磁共振仪(TMS内标);液质联用色谱仪:Alliance2695QuattroMicroTMESI(Waters);半制备高效液相色谱仪:日本分光公司(JASCO),PU-2089(泵),RI-2031及UV-2075(检测器);制备HPLC色谱柱:GPC(凝胶渗透色谱柱)Shodex,AsahipakGS-20G(20mm×500mm),YMC-PackODS-ASH-343-5(20mm×250mm),YMC-PackSIL-06(20mm×250mm,5μm);凝胶柱色谱ToyopearlHW-40C(Tosoh);日本HitachiUV-3310型紫外-可见分光光度计;柱色谱和薄层色谱用硅胶均系青岛海洋化工厂生产,所用试剂均为分析纯;氘代试剂购自美国Sigma-Aldrich公司。小鼠单核巨噬细胞RAW264.7细胞(韩国细胞株银行);LTC旋覆花于2010年采集于河南,经天津医科大学药学院周晔教授鉴定为I.japonica,标本(D20110331)存放于天津医科大学药学院。2化合物的分离纯化2.1提取与分离旋覆花干燥头状花序8kg,用75%乙醇回流提取3次,每次2h,提取液减压浓缩,提取物(672g)以水混悬,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,分别得到石油醚提取物(36g)、乙酸乙酯提取物(117g)、正丁醇提取物(266g)。旋覆花乙酸乙酯提取物(117g),以硅胶柱色谱分离,分别用石油醚-乙酸乙酯(4∶1,3∶1,2∶1,1∶1,1∶2),乙酸乙酯,乙酸乙酯-甲醇(95∶5,9∶1,8∶2)梯度洗脱,TLC合并类似组分,得到组分XFH0101-0128。组分XFH0112经过凝胶(ToyopearlHW-40)柱色谱分离得到5个组分(12.1~12.5)。组分12.3经制备高效液相色谱ODS分离(甲醇-水,7∶3)和制备凝胶渗透色谱GPC(MeOH)纯化,得到化合物1(7.0mg),2(7.5mg),3(14.0mg)。组分12.4进一步经制备高效液相ODS(甲醇-水,6∶4)纯化,得到化合物10(13.5mg)。XHF0115经过凝胶(Toyo-pearlHW-40)柱色谱分离得到6个组分(15.1~15.6)。组分15.3和15.4分别经制备高效液相色谱(ODS-A,甲醇-水,6∶4;GPC,甲醇)分离纯化,得到化合物6(9.4mg),11(55.5mg)。XFH0111经过凝胶(ToyopearlHW-40)柱色谱分离,经制备高效液相色谱(GPC,甲醇)纯化得到化合物7(13.4mg),8(9.1mg),9(38.7mg),14(35.3mg)。组分XFH0114(2.8g)以凝胶(ToyopearlHW-40)柱色谱分离,进一步重结晶得到化合物12(300.0mg)。XFH0109(2.8g)经过凝胶(ToyopearlHW-40)柱色谱分离,进一步经制备高效液相色谱ODS(甲醇-水,8∶2)和GPC(甲醇)分离纯化得到化合物4(3.0mg),5(8.6mg),13(7.0mg)。XFH0113(2.2g)经过凝胶(ToyopearlHW-40)柱色谱分离,进一步经制备高效液相色谱GPC分离得到化合物15(5.0mg)。2.2NO生成的测定RAW264.7细胞培养于含10%FBS的DMEM培养基。取对数生长期的细胞(3×102.3LTC3ei-msm/z400m/h化合物结构表征化合物1无色油状物;ESI-MSm/z211[M-H]化合物2无色油状物;EI-MSm/z224(M化合物3无色油状物;EI-MSm/z208(M化合物4白色无定形粉末;EI-MSm/z442(M化合物5白色无定形粉末;EI-MSm/z468(M化合物6无色油状物;ESI-MSm/z199[M+H]化合物7浅黄色粉末;ESI-MSm/z305[M+H]化合物8黄色无定形粉末;ESI-MSm/z309[M+Na]化合物9淡黄色针状结晶(甲醇);ESI-MSm/z339[M+Na]化合物10黄色无定性粉末;ESI-MSm/z383[M+Na]化合物11黄色无定性粉末;ESI-MSm/z369[M+Na]化合物12黄色粉末;ESI-MSm/z303[M+H]化合物13白色粉末;ESI-MSm/z165[M+H]化合物14白色针晶;ESI-MSm/z203[M+Na]化合物15白色片状结晶(甲醇);ESI-MSm/z231[M+Na]4no释放活性的检测4.1各种化合物对LPS诱导的RAW264.7细胞释放NO的影响利用Griess法测定RAW264.7细胞NO的释放量,在非细胞毒浓度下检测各化合物对NO的释放的抑制活性。化合物8,12与其他化合物相比显示出较强的NO生成抑制作用,而且其活性呈剂量依赖性,IC4.2各种化合物对KL诱导的BMMCs生成LTC5植物基、化合物3,4,9,1