忍冬根化学成分研究

忍冬根化学成分研究

忍冬根是忍冬科慈冬植物的干燥根。金银花与忍冬藤是忍冬的常用入药部位,具有抗菌消炎化合物结构鉴定本研究从忍冬根分离得到17个化合物,分别为1-oxo-(1H)-cyclopenta[b]benzofuran-7-carbaldehyde(1)、4-羟基桂皮酸(4-hydroxycinnamicacid,2)、绿原酸(chlorogenicacid,3)、loganinaglycone(4)、咖啡酸(caffeicacid,5)、裂环马钱素二甲基乙缩醛(secologanindimethylacetal,6)、korolkoside(7)、松柏苷(coniferin,8)、獐牙菜苷(sweroside,9)、断氧化马钱子苷(secoxyloganin,10)、5-O-咖啡酰奎宁酸(5-O-caffeoylquinicacid,11)、3-O-咖啡酰奎宁酸甲酯(chlorogenicacidmethylester,12)、3-O-咖啡酰奎宁酸乙酯(chlorogenicacidethylester,13)、3,5-O-二咖啡酰奎宁酸(3,5-O-dicaffeoylquinicacid,14)、4,5-O-二咖啡酰奎宁酸(4,5-O-dicaffeoylquinicacid,15)、grandifloroside(16)和3,4-O-二咖啡酰奎宁酸(3,4-O-dicaffeoylquinicacid,17)。其中化合物1为新化合物(图1),化合物8为首次从该植物中分离得到,其他成分均为首次从忍冬根中分离得到。化合物1棕色油状物,ESI-MSm/z198.0,(-)HR-ESI-MS给出准分子离子峰197.0305[M-H]HNMR(400MHz,DMSO-d采用斑马鱼抗炎模型测定了化合物1~5、9、10、12、14~17的抗炎活性。荧光显微镜下观察巨噬细胞炎症反应,计算炎症细胞数量,统计样品对炎症反应的影响,并观察胚胎死亡或畸形情况。结果表明,化合物1、3、16、17在100μg·mL仪器、试药与设备薄层硅胶GF254、柱色谱硅胶(200~300目,青岛海洋化工厂);分析型色谱柱:YMC-PEAKODS-Acolumn(250mm×4.6mm,i.d.5μm);旋转蒸发器R-3(瑞士BUCHI公司);普源L-3000系列(北京普源精电科技有限公司)高效液相色谱仪;Waters600型(美国Waters公司)高效液相色谱仪;Bruker-400核磁共振波谱仪(瑞士布鲁克公司);Agilent1200RRLC-6410QQQ-MS/MS质谱仪;Nicolet710傅里叶变换红外光谱仪;斑马鱼养殖饲养设备(北京爱生科技公司);Forma3111型水套式CO实验用忍冬根药材采购于山东省平邑县,经山东中医药大学李佳教授鉴定为忍冬科忍冬属植物忍冬(LonicerajaponicaThunb.)的干燥根,标本(No.20130910)收藏于山东省分析测试中心标本室。1乙醇提取物的制备干燥忍冬根18kg,粉碎,95%乙醇回流提取3次,分别提取2、2和1h,提取液合并、浓缩,得乙醇提取物;依次用等体积石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取4次,合并萃取液,分别合并每部分萃取液,减压浓缩干燥得乙酸乙酯浸膏(460g)。乙酸乙酯浸膏通过硅胶柱色谱(CH2化合物结构鉴定化合物1,棕色油状物。(-)HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z197.0305[M-H]化合物2,淡黄色粉末,ESI-MS:m/z163.8[M-H]化合物3,白色粉末,ESI-MS:m/z353.3[M-H]化合物4,白色粉末,ESI-MS:m/z229.1[M+H]化合物5,淡黄色粉末,ESI-MS:m/z178.9[M-H]化合物6,白色无定形粉末,ESI-MS:m/z457.3[M+Na]化合物7,淡黄色粉末,ESI-MS:m/z827.3[M+Na]化合物8,白色粉末,ESI-MS:m/z341.2[M-H]化合物9,淡黄色粉末,ESI-MS:m/z357.3[M-H]化合物10,淡黄色粉末,ESI-MS:m/z405.1[M+H]化合物11,白色粉末,ESI-MS:m/z353.2[M-H]化合物12,淡黄色粉末,ESI-MS:m/z367.0[M-H]化合物13,淡黄色粉末,ESI-MS:m/z381.1[M-H]化合物14,白色粉末,ESI-MS:m/z515.4[M-H]化合物15,淡黄色粉末,ESI-MS:m/z539.3[M+Na]化合物16,白色粉末,ESI-MS:m/z537.4[M-H]化合物17,白色粉末,ESI-MS:m/z539.0[M+Na]3斑马鱼胚胎的诱导发育JS7系巨噬细胞荧光转基因斑马鱼,雌雄斑马鱼分开喂养,照明14h,黑暗10h交替进行,以人工颗粒状饵料和刚孵出的卤虫无节幼体定时喂养。取健康性成熟的斑马鱼按雌雄比例1∶1放入交配缸内,次日9~10h收集受精卵,取卵后对受精卵进行消毒和洗涤,最终将受精卵移至斑马鱼胚胎培养用水(含5.0mmol·L受精卵发育3dpf(dayspostfertilizati