清肠温中方对dss诱导uc模型小鼠h1h2平衡的干预作用

清肠温中方对dss诱导uc模型小鼠h1h2平衡的干预作用

溃疡性胃炎（iu）是一种非特异性炎症疾病，可于结节直肠粘膜和粘膜下层。这是炎症最重要的类型之一。临床上以腹泻、黏液脓血便、里急后重等肠道表现为主,同时可能伴有营养不良、焦虑抑郁或多系统不同的肠外表现,病情严重者甚至出现威胁生命的情况。UC的发病机制目前尚不明确,多数观点认为是由于环境、感染等因素刺激,引起遗传易感的宿主发生不恰当的免疫炎症反应从而发病1材料和方法1.1实验动物与设备SPF级健康雄性BALB/c小鼠90只,体质量(20±2)g,购自北京维通利华实验动物技术有限公司,许可证号:SCXK(京)2016-0011,饲养于北京中医药大学SPF级动物房,12h光照/12h黑夜循环,温度(22±2)℃,湿度50%~60%,自由饮食饮水。1.2试剂及试剂清肠温中浸膏方(黄连6g,炮姜10g,三七6g,木香6g,炙甘草6g等)由北京中医药大学中药学院提供;阳性对照药美沙拉嗪缓释颗粒(艾迪莎,国药准字H20143164)购自北京中医药大学东方医院外购药房;葡聚糖硫酸钠(DDS,160110,相对分子质量36000~50000)购自美国MPBio公司;便潜血试剂盒(中国珠海,BA-0202B)、4%多聚甲醛(SL1830)购自中农博信(北京)科技有限公司;小鼠IL-1β(EK0394)、IL-4(EK0405)、IL-5(EK0408)、IL-6(EK0411)、TNF-α(EK0527)酶联免疫吸附ELISA试剂盒均购于武汉博士德生物工程有限公司;抗NF-κBp50(ab28849)抗体购自美国Abcam公司。1.3给药剂量及给药剂量BALB/c小鼠适应性饲养1周,采用随机数字表法将90只小鼠随机分为空白组、模型组、清肠温中方高剂量组(3.2g浸膏/kg,临床患者2倍用药量)、清肠温中方中剂量组(1.6g浸膏/kg,临床患者正常用药量)、清肠温中低剂量组(0.8g浸膏/kg,临床患者0.5倍用药量)和美沙拉嗪组(606.7mg/kg,临床患者正常用药量)共6组,每组15只,结合文献[3]和临床患者用药量确定给药剂量。采用改良的自由饮用3%(w/v)DSS方法复制慢性UC模型1.4样品的采集和检测1)疾病活动指数(DAI)1.5统计学处理方法应用SPSS22.0统计软件。符合正态分布的计量资料用(ue0af±s)描述,用单因素方差分析进行检验,方差齐用LSD检验,不齐用T2结果2.1小鼠一般情况见表1。随着饮用DSS溶液时间的延长,小鼠出现腹泻、黏液脓便、甚至肉眼血便的症状加重,同时伴有体质量逐渐减轻,且症状在饮用药物3d后明显加重。在造模第1周期内小鼠症状表现明显,病情严重,每组均有死亡现象发生,后2个周期的症状表现较前均有所减轻,死亡数量也较前减少。药物干预后除模型组外,各组小鼠便血、腹泻症状有不同程度减轻,体质量逐渐恢复并增加,实验终点DAI评分结果提示模型组疾病程度明显重于空白组(P<0.01),清肠温中方和美沙拉嗪干预后的评分均有所降低(P<0.05)。2.2il-4和il-5的情况见表2。与空白组比较,模型组小鼠血清TNF-α、IL-6和IL-1β明显升高(P<0.01),IL-4和IL-5明显减少(P<0.01)。药物干预后各组与模型组相比,清肠温中方各剂量和美沙拉嗪均能降低TNF-α、IL-6和IL-1β(P<0.05)并增加IL-4和IL-5(P<0.05),其中以清肠温中方中剂量组和美沙拉嗪组作用最明显。2.3肠道结构紊乱的表达见表3,图1。小鼠结肠组织免疫组化染色后发现,空白组结肠组织表达极少量NF-κBp50蛋白,且表达位置主要位于细胞质;模型组在肠道结构紊乱消失的基础上,与空白组比较表达明显增多(P<0.01),且表达位置主要位于细胞核。药物干预后,与模型组相比,清肠温中方高、中剂量和美沙拉嗪组均能减少NF-κBp50蛋白表达(P<0.05),表达位置在细胞质中为主,其中以中剂量组和美沙拉嗪组的效果最为明显。3不同的细胞因子本研究采用反复饮用DSS溶液复制慢性UC模型,其中DSS诱导的化学性结肠炎肠上皮损伤与人类UC的表现相似,其机理是溶于水后的硫酸化多糖作为一种化学毒素可以直接作用于肠上皮细胞并产生破坏人类肠道具有复杂的免疫系统,可以减轻消除病原体的感染,同时保持上皮细胞对食物抗原和非致病菌的耐受性在接受来自上皮细胞的损伤信号后,树突状细胞驱使幼稚T细胞分化成Th1和Th2不同表型,并分泌关键细胞因子IFN-γ、TGF-β、IL-4、IL-5和IL-13等,这些不同的细胞因子负责炎症发展、持续的组织损伤和病理改变,包括异常的黏液分泌、纤维化、组织重塑,平滑肌细胞增生和高反应性等清肠温中方是北京中医药大学东方医院消化科李军祥教授总结多年临床经验而创,他认为UC病位在肠,与脾胃关系密切,病机多属脾阳不足、湿热夹瘀,当以健脾温中、清热化瘀法则治疗,已在临床UC治疗中收获确切疗效。有学者对于慢性UC小鼠,清肠温中方不仅可以降