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文档简介

第1页细胞组分分级分离试验九第2页经过细胞匀浆和离心方法分级分离细胞组分，了解其原理、过程及作用。试验目标第3页细胞内不一样结构比重和大小都不一样。在同一离心场内沉降速度也不相同。依据这一原理，用不一样转速离心法，可将细胞内各种组分分级分离出来。试验原理第4页速度逐步提升，样品按大小先后沉淀第5页试验内容细胞核分离提取高速离心分离提取线粒体第6页细胞核分离提取步骤：

1.椎脱臼法法处死小鼠，快速开腹取肝脏，剪成小块，置于盛有0.9％NaCl烧杯中，重复洗涤，除去血污，用滤纸吸去表面溶液。

2.将湿重约1g肝组织放在小平皿中，取8ml预冷0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液，先加入少许该溶液于平皿中，尽可能剪碎组织后，再全部加入。

3.将剪碎肝组织倒入匀浆管中，使匀浆器下端浸入盛有冰块器皿中，研磨3～5次，用8层湿纱布过滤匀浆于离心管中。然后制备一张涂片①，做好标识，自然干燥。第7页4.将装有滤液离心管配平后，放入离心机，2500r/min离心15分钟；⑴取上清液，移入高速离心管中，保留于有冰块烧杯中，待分离线粒体用;⑵同时涂一张上清液片②做好标识，自然干燥；⑶余下沉淀物进行以下步骤。5.用6ml0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液，悬浮沉淀物，以2500r/min离心15分钟弃上清，将残留液体用吸管吹打成悬液，滴一滴于洁净载玻片上，涂片③，自然干燥。6.将①、②、③涂片用1％甲苯胺兰染色后盖上盖片即可观察。第8页第9页高速离心分离提取线粒体步骤：1.将上述装有上清液高速离心管，从装有冰块烧杯中取出，配平后，以17000r/min离心20分钟，弃上清，留取沉淀物。2.加入0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙液1ml，用吸管吹打成悬液，以17000r/min离心20分钟。将上清吸入另一试管。留取沉淀物，加入0.1ml0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液混匀成悬液。3.取沉淀物上清液和悬液，分别滴一滴于洁净载玻片上（分别标识为④、⑤），涂片，各滴一滴0.02％詹纳斯绿B染液，盖上盖片染20分钟。

4.油镜下观察，颗粒状线粒体被詹纳斯绿B染成兰绿色。第10页

1．研磨时要在低温进行。

2．过滤前要先将纱布湿润。

3．离心前要注意配平。注意事项第11页1.简明说明分级分离细胞原理及其意义。

2.比较一下分离细胞核时涂片①、②、③有什么不

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