自身抗体检测及应用课件

自身抗体的检测及意义自身抗体的检测及意义自身免疫(autoimmunity)

免疫系统针对自身成分发生免疫应答反应出现自身抗体或致敏淋巴细胞的现象自身抗体(autoantibody)针对自身组织、器官、细胞及其成分的抗体。自身免疫性疾病(autoimmunedisease，AID)自身免疫反应导致组织器官损伤或功能障碍所致疾病。免疫系统紊乱

几个概念自身免疫(autoimmunity)几个概念

自身抗体自身免疫性疾病的重要标志高滴度存在于自身免疫性疾病患者与疾病的活动性相关性参与免疫病理性改变损伤自身抗体自身免疫性疾病的重要标志常用的检测方法间接免疫荧光法（IIF）ELISA免疫印迹法（Western-blot）酶免疫斑点法常用的检测方法间接免疫荧光法（IIF）常检测的自身抗体类风湿因子（RF）抗核抗体（ANA）抗可提取性核抗原抗体（ENA）抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）抗环瓜氨酸抗体（CCP）抗心磷脂抗体（ACA）常检测的自身抗体类风湿因子（RF）类风湿因子

（RHEUMATOIDFACTOR,RF）

抗变性IgGFc的自身抗体，主要类型是IgM型

检测方法：

1.胶乳颗粒凝集实验定性、半定量，敏感性和特异性不高，测定IgM-RF

2.速率散射比浊法（ARRAY、IMAGE）定量、准确、快速，测定IgM-RF

3.ELISA定量、准确，可测定不同类型的RF类风湿因子

（RHEUMATOIDFACTOR,临床应用：

（1）RF在多种自身免疫性疾病患者中均可被检出。疾病阳性率%RA79SLE30SS95Sclerosis80PM80MCTD25（2）RF滴度与RA患者临床表现呈正相关，IgM-RF效价>80IU/ml并伴有严重关节功能障碍时通常提示患者预后不良。临床应用：（1）RF在多种自身免疫性疾病患者中均可被检抗核抗体

（ANTINUCLEARANTIBODY，ANA）真核细胞（如HEp-2细胞、肝细胞）的各种细胞核成分为靶抗原检测的自身抗体的总称。抗核抗体

（ANTINUCLEARANTIBODY，ANAANA概念指抗细胞核成分（DNA，RNA，蛋白质和酶）的抗体。广义：抗核酸（Nucleicacid）和核蛋白（Nucleoprotein）抗体的总称某些核抗原成分在核仁和胞浆内比核质内更丰富ANA概念指抗细胞核成分（DNA，RNA，蛋白质和酶）的抗体ANA中性粒细胞DNP(DNA-Histone)+抗DNP+补体均质体LE细胞LE细胞：并非SLE特有，PM、SD、RA、SS等结缔组织病，药物过敏，慢活肝等亦可阳性。抗DNP取代LE细胞的检测+ANA中性粒细胞DNP(DNA-Histone)均质体LE细间接免疫荧光法++抗原HEp-2细胞肝组织切片待检抗体（血清）抗原—抗体第二抗体间接免疫荧光法++抗原HEp-2细胞肝组织切片待检抗体（血清间接免疫荧光法HEp-2细胞肝组织切片荧光标记抗体病人血清（待检抗体）间接免疫荧光法HEp-2细胞肝组织切片荧光标记抗体病人血清（分类和命名以首先检出该抗体的患者名字命名，如抗Sm、抗Sa抗体等；以相关疾病命名，如抗Scl-70、抗SS-A、抗SS-B抗体等；以抗原的部位命名，如抗核仁抗体、抗线粒体抗体、抗核膜抗体、抗细胞浆抗体等；以抗原的化学性质进行分类命名，如抗DNA、抗RNP、抗组蛋白抗体等。分类和命名以首先检出该抗体的患者名字命名，如抗Sm、抗Sa抗核抗体检测方法间接免疫荧光法（indirectimmunofluorescence,IIF）酶免疫斑点法ELISA免疫印迹法

（Western-blot）

抗核抗体检测方法间接免疫荧光法ANA谱条法ENA斑点法ANA谱条法ENA斑点法

细胞核细胞浆细胞骨架细胞周期

均质型核糖体型肌蛋白型中心体型斑点型线粒体型波形纤维蛋白型纺缍体型核仁型高尔基体型细胞角蛋白型纺缍丝型着丝点型溶酶体型原肌球蛋白型中间体型周边型颗粒型纽带蛋白型PCNA型核点型(dots)结蛋白(桥粒)型

IIF检测ANA荧光染色模型细胞核细胞浆细胞骨架斑点型（nRNP/Sm）

高滴度的抗U1-nRNP为MCTD的特征。抗Sm抗体对SLE具有高度特异性。斑点型（SSA/SSB）

抗SSA最常出现于SS及新生儿红斑狼疮（100%）。抗SSB抗体几乎仅见于女性，可出现于SS和SLE。斑点型（nRNP/Sm）高滴度的抗U1-nRNP为M均质型

抗dsDNA抗体抗组蛋白抗体(histone)抗ssDNA抗体抗核小体抗体(nucleosome)均质型抗dsDNA抗体抗组蛋白抗体

抗dsDNA抗体SLE特异性抗体，与病情活动度相关。

抗dsDNA抗体SLE特异性抗体，与病情活动度相关。周边型

可见于胶原病、PBC、CAH等患者

周边型核点型（DOTS）

见于SLE、SS、PBC、风湿病。

抗着丝点型

PSS局限型标志抗体。核点型（DOTS）见于SLE、SS、PBC、风抗PM-Scl（PM-1）抗体

见于重叠综合征（多发性肌炎PM/皮肌炎DM/弥漫性PSS）

抗PM-Scl（PM-1）抗体见于重叠综合征（多发性肌炎P抗核糖体P蛋白（rib-P）抗体抗线粒体抗体（AMA）SLE标志抗体原发性胆汁性肝硬化标志抗体抗核糖体P蛋白（rib-P）抗体抗线粒体抗体（AMA）SLE抗Jo-1抗体抗高尔基体抗体多发性肌炎（PM）标志抗体偶见于SLE和SS抗Jo-1抗体抗高尔基体抗体多发性肌炎（PM）标志抗体偶见于抗肌动蛋白抗体见于自身免疫性慢性活动型肝炎

抗肌动蛋白抗体见于自身免疫性慢性活动型肝炎

抗ENA抗体谱ENA(extractablenuclearantigen)：可提取核抗原的总称临床常检测的抗ENA抗体谱主要包括：抗Sm抗U1-RNP抗SSA抗SSB抗Jo-1抗Scl-70抗rib-P蛋白抗ENA抗体谱ENA(extractablenucl

检测方法

双向免疫扩散（ID）对流免疫电泳（CIE）免疫印迹法（Western-blot）

ELISA酶免疫斑点法

检测方法双向免疫扩散（ID）免疫印迹法

SDS电泳转移电泳酶免疫检测免疫印迹法SDS电泳转移是一组以人中性粒细胞胞浆成分为靶抗原，与临床多种小血管炎性疾病密切相关的自身抗体，对系统性血管炎、炎症性肠病等疾病的诊断与鉴别诊断具有重要意义。

抗中性粒细胞胞浆抗体（anti-neutrophilcytoplasmicautoantibodies,ANCA）是一组以人中性粒细胞胞浆成分为靶抗原，与临床多种小

荧光染色型

靶抗原

胞浆型(cANCA)

蛋白酶3（PR3）杀菌/通透性增高蛋白（BPI）

核周型(pANCA)

髓过氧化物酶（MPO）组织蛋白酶G（Cath-G）乳铁蛋白（LF）白细胞弹性蛋白酶（HLE）

非典型型(aANCA)兼有两种特性

ANCA荧光染色型与靶抗原荧光染色型靶抗原

胞浆型(c周边型抗中性粒细胞胞浆抗体（pANCA）主要见于炎症性肠病（溃疡性结肠炎和克罗恩病）周边型抗中性粒细胞胞浆抗体主要见于炎症性肠病（溃疡性结肠炎和胞浆型抗中性粒细胞胞浆抗体(cANCA)主要见于Wegener’s肉芽肿及微小多动脉炎胞浆型抗中性粒细胞胞浆抗体主要见于Wegener’s肉芽肿及

ANCA临床应用

髓过氧化物酶（MPO）与显微镜下多血管炎、坏死性新月体型肾小球肾炎、过敏性肉芽肿性血管炎相关、杀菌/通透性增高蛋白（BPI）主要见于肺部炎症性疾病并与长期慢性绿脓杆菌感染有一定关系

蛋白酶3（PR3）与Wegener’s肉芽肿（WG）密切相关。仅cANCA诊断WG的特异性大于90%，联合PR3可超过95%，活动期几乎100%阳性。

组织蛋白酶G(Cath-G)白细胞弹性蛋白酶(HLE)乳铁蛋白(LF)可见于SLE、IBD、PBC、PSC等

ANCA临床应用髓过氧化物酶（MPO）与显微镜下多血管

AKA主要见于RA，阳性率36%~59%，特异性95%~99%，其出现可以先于临床表现；高滴度可预示较严重的RA类型。抗角蛋白抗体（AKA）AKA主要见于RA，阳性率36%~59%，特异性9

一组针对含有磷脂结构抗原物质的自身抗体，主要包括抗心磷脂抗体、抗磷脂酸抗体和抗磷脂酰丝氨酸抗体。类型：IgG、A、M型，IgG型最常见，其次是IgM型，IgA型与自身免疫性疾病的关系较小。抗磷脂抗体（anti-phospholipidantibody,APLA）一组针对含有磷脂结构抗原物质的自身抗体，主要包括抗检测方法：

常用ELISA临床应用：在SLE中总阳性检出率达70%~80%，与病情活动显著相关；ACA阳性者发生血管炎、溶血性贫血、心脏及中枢神经精神系统损伤的几率明显。在RA患者阳性率为33%~49%。ACA阳性是脑出血及脑梗塞的危险因素。与反复自然流产和胎儿发育迟缓有一定的相关性检测方法：常用ELISA

部分自身免疫性疾病中自身抗体的检出率部分自身免疫性疾病中自身免疫性疾病ANA阳性率（%）SLE80~100MCTD95~100RA20~40PSS85~95PM/DM30~50SS70~80溃疡性结肠炎26慢性活动性肝炎30~40其它风湿病20~50ANA在自身免疫性疾病中的检出率

自身免疫性疾病ANA阳性率（%）SLE80~100MCTD9疾病类型

抗原类型阳性率%SLE

dsDNA

30~90

U1-nRNP15~40

Sm5~30

SSA20~60

SSB10~20PCNA3

核糖体（rib）5~20

心磷脂20~40

新生儿LE

SSA

100药物诱导LE

组蛋白

95

单链DNA80系统性红斑狼疮

(SLE)SLE抗原类型阳性率（%)

U1-nRNP

95~100

单链DNA

20~50混合性结缔组织病（MCTD）

抗原类型阳性率（%)U1-nRNP9抗原类型

阳性率（%）

IgM-RF

65~90抗角蛋白抗体（AKA）

36~59

单链DNA

8

组蛋白

少见类风湿性关节炎（RA）抗原类型阳性率（%）IgM-RF抗原类型阳性率（%）

SSA

40~95SSB40~95

ssDNA

30~60

唾液腺流出道

40~60

RF

60~80原发性干燥综合征（SS）抗原类型阳性率（%）SSA40~95SSB4PSS类型相对应的抗原

阳性率（%）弥漫型原纤维蛋白

5~10PM-Scl（PM-1）3Scl-7025~75RNA多聚酶Ⅰ4局限型

着丝点

80~95进行性系统性硬化症（PSS）PSS类型相对应的抗原阳性率（%）弥漫型原纤维蛋白

抗原类型阳性率（%）

PM-Scl（PM-1）

8

Jo-1

25~35

Mi-1

10

Mi-2

5

Ku（重叠综合征）

30~55

单链DNA

40~50

PL-7

4

PL-12

3多发性肌炎/皮肌炎(PM/DM)抗原类型阳性率（%）PM-Scl（PM-1）自身免疫性慢性活动性肝炎(AIH)抗原类型阳性率（%）肌动蛋白（Actin）40~90ANA(板层素，SSA等)

30~40

肝肾微粒体（LKM-1）

7可溶性肝抗原（SLA）

100线粒体2型（AMA-M2）

5~10

线粒体9型（AMA-M9）

10自身免疫性慢性活动性肝炎(AIH)抗原类型阳性率（%）肌动原发性胆汁性肝硬化(PBC)抗原类型阳性率（%）线粒体2型（M2）95线粒体4型（M4