组培指导课件

植物组培实验操作指导北京川布兰生物技术开发有限公司技术部植物组培实验操作指导北京川布兰生物技术开发有限公司1一、培养基制备配制培养基需要的仪器设备电子天平、烧杯、电磁炉或微波炉、不锈钢盆、移液器、吸头和吸头盒、高压蒸汽灭菌锅、组培瓶、量筒、药勺、玻璃棒、植物组织培养试剂盒。（见下图）一、培养基制备配制培养基需要的仪器设备2培养基制备所需仪器设备及耗材培养基制备所需仪器设备及耗材3组培指导课件4组培指导课件52、加热煮沸将溶解的培养基用电磁炉加热煮沸至琼脂全部溶解，溶液呈澄清态。少量的培养基可用烧杯放于微波炉加热。煮沸溶解后添加蒸馏水补充加热损失的水分。（图4）（图4）2、加热煮沸将溶解的培养基用电磁炉加热煮沸至琼脂全部溶解，溶63、添加激素调节pH按照培养的不同植物以及不同外植体添加合适的激素（图5）（矮牵牛腋芽转接不需加激素），调节pH值至6.0。（图6、7）（图6）（图7）3、添加激素调节pH按照培养的不同植物以及不同外植体添加合适74、分装待培养基冷却至50℃～60℃时，分装到组培瓶中，每瓶25～30mL，拧上盖子。（图8，10，11）

注：瓶盖上的固定滤膜装置要拧紧，防止滤膜脱落。（图9）（图8）（图9）4、分装待培养基冷却至50℃～60℃时，分装到组培瓶中，每瓶8（图10）（图11）（图10）（图11）95、灭菌及冷却把分装好的组培瓶和培养皿放于高压蒸汽灭菌锅中121℃灭菌20分钟。（图12，13，14）灭菌结束后取出放置室温冷却凝固备用。（图12）5、灭菌及冷却把分装好的组培瓶和培养皿放于高压蒸汽灭菌锅中110（图13）（图14）（图13）（图14）11二、无菌苗接种培养超净工作台、光照培养架或恒温光照培养箱、解剖剪、镊子、两面板（试管架）、酒精灯、火柴（打火机）、酒精棉球、无菌培养皿、废液缸。二、无菌苗接种培养超净工作台、光照培养架或恒温光照培养箱、解12接种培养需要的仪器设备接种培养需要的仪器设备131、超净台灭菌打开超净工作台内的紫外灯和风机（开到低速档），把实验用到的相关器械放进超净工作台紫外照射灭菌20～30min。灭菌结束后关闭紫外灯，继续吹风5min去除臭氧的味道。（图15）（图15）1、超净台灭菌打开超净工作台内的紫外灯和风机（开到低速档），142、双手消毒点燃酒精灯，使用酒精棉球擦拭双手，尽量擦拭到手指缝和指甲盖位置。（图16，17）注：如果用火柴点酒精灯一定要让火柴熄灭后方可放入废液缸，以免点燃使用过的酒精棉球引起火灾。（图16）（图17）2、双手消毒点燃酒精灯，使用酒精棉球擦拭双手，尽量擦拭到手指153、接种器械消毒先使用酒精棉球对解剖剪（解剖刀）和镊子进行擦拭，然后放于酒精灯火焰进行灼烧，剪刀的交叉部位需张开活动以便充分灼烧。灼烧灭菌后放于两面板或试管架上冷却。（图17，18，19，20）（图17）（图18）3、接种器械消毒先使用酒精棉球对解剖剪（解剖刀）和镊子进行擦16（图19）（图20）（图19）（图20）174、修剪无菌苗把装有无菌苗的组培瓶口在酒精灯火焰周围灭菌几秒钟，打开瓶盖，用镊子夹出无菌苗放于无菌培养皿中，盖好培养皿盖子。（图21，22，23，24）（注：瓶口灭菌时间不宜过长，以免烧坏瓶口）剪去无菌苗的叶子，只留下茎段和叶柄。把无菌苗按芽剪成“丫”字型，只留一个腋芽和叶柄。（图25，26，27）4、修剪无菌苗把装有无菌苗的组培瓶口在酒精灯火焰周围灭菌几秒18（图21、22、23、24）（图21、22、23、24）19修剪叶片时先四周剪平，剪出伤口，叶子较大的话再剪开，最后剪成边长0.5cm大小即可。修剪茎段即剪取两个腋芽之间的部分。注意：使用叶片为材料时，挑选叶片较大植株；使用茎段为材料时挑选茎段较长的植株，方便修剪。修剪叶片时先四周剪平，剪出伤口，叶子较大的话再剪开，最后剪成20（图25、26、27）（图25、26、27）215、接种培养把未接种培养基瓶口在酒精灯火焰灭菌2～3秒后打开瓶盖，用镊子夹取腋芽或叶片接种于培养瓶内。叶片平铺在培养基上，页面朝上，腋芽直接插入培养基即可。（图28，29）（图28）（图29）5、接种培养把未接种培养基瓶口在酒精灯火焰灭菌2～3秒后打22接种结束后把瓶口和瓶盖在酒精灯火焰灭菌2～3秒后盖上瓶盖，放在光照培养架或者恒温光照培养箱内培养。（图30，31）培养条件：25℃室温光照培养12h，黑暗培养12h。（图30）（图31）接种结束后把瓶口和瓶盖在酒精灯火焰灭菌2～3秒后盖上瓶盖，23三、移栽移栽到花盆或花圃、也可移栽至小型无土栽培系统。三、移栽移栽到花盆或花圃、也可移栽至小型无土栽培系统。241、炼苗挑选长势较好而且长出根系的无菌苗，在移栽培养的环境中先闭瓶放置3天，再打开瓶盖放置3天，让无菌苗适应室内的温度和湿度。（图32）（图32）1、炼苗挑选长势较好而且长出根系的无菌苗，在移栽培养的环境中252、移栽到花盆炼苗结束后把无菌苗从组培瓶中取出，去净培养基，把组培苗移栽到蛭石和草炭土的混合基质中。（图33，34，35，36）（图33）（图34）2、移栽到花盆炼苗结束后把无菌苗从组培瓶中取出，去净培养基，26（图35）（图36）（图35）（图36）273、成苗开花在培养的过程中要经常浇水