药食两用信号检测的研究进展

药食两用信号检测的研究进展

一、关于东南角充液型培育中脂质糖的检测氨基葡萄糖碱（1-3，4-二甲基苯基）-6，7-二甲基异羟色胺）是自然界存在的重要异羟色胺碱，含量高于氨基丙烯酸和未经处理的植物。1848年,Merck成功地从植物中分离得到了罂粟碱并提出了其正确的经验分子式C20H21NO4。Goldschmiedt等于1883年通过研究罂粟碱的氧化产物提出了其分子结构,并于1888年确定了其准确的异喹啉环的核心结构(见右图)。由于具有抗痉挛作用和对血管、心脏或其它平滑肌的直接非特异性松弛作用,罂粟碱被广泛地应用于脑、心和外周血管痉挛引起的缺血以及肾、胆和胃肠道等内脏痉挛的临床治疗中。但植物中罂粟碱含量通常很低(低于1%),不能满足对其消耗的需求,因而Pictet和Gams于1909年提出了罂粟碱的人工合成方法,从而使其大规模的工业化生产成为可能。罂粟碱在用于临床给药时,一般是以盐酸盐的形式进行肌内和静脉注射,或是口服给药。但是服用罂粟碱也存在一定的副作用,由于其对松弛平滑肌缺乏选择性,因而有可能因肠道的松弛导致血压的持续降低。在大剂量给药时,能抑制房室和室内传导,从而导致严重的心律失常,对人的致死剂量是100—500mg/kg。中药罂粟壳是罂粟科植物PapaversomniferumL.的干燥成熟果壳,主要生物活性成分为吗啡、可待因、蒂巴因、罂粟碱和那可汀等,随产地和批次的不同,各种成分的含量变化较大。罂粟壳的主要功能为敛肺、涩肠和止痛,因此被用于治疗久咳、久泻、脱肛和脘腹疼痛等,但久服易成瘾。由于罂粟壳的易成瘾性,国内有些不法商贩将其作为食品添加剂加入到食品中,例如火锅底料、方便面调料等,以达到吸引顾客的目的。为此,国家药品监督管理局将罂粟碱列入麻醉药品管制品种,通过检测罂粟壳中含有的吗啡和罂粟碱等主要成分以实现对罂粟壳使用情况的监督。罂粟碱作为4种主要的具有药用价值的生物碱之一,并未如吗啡、可待因和蒂巴因一样被列入国际毒品管制的范围。国外目前对于罂粟碱检测方法的报道主要集中在产品控制和药理研究方面,涉及到各种生物样品(尿样、血液、分泌液和身体组织)和非生物样品(植物、药物制剂和食品等)。罂粟碱口服易吸收,但个体差异较大,生物利用度约为54%。蛋白结合率较高,接近90%,半衰期约为0.5—2h,经24h在体内完全代谢消除。主要在肝脏内选择性代谢为4-羟基罂粟碱,并以葡萄糖醛酸盐形式经肾脏排出体外。因此罂粟碱的定量检测不仅对药物生产过程控制和食品安全保障十分必要,而且对个体给药研究也具有重要的意义。二、分析与罂粟碱法根据中华人民共和国药典规定,盐酸罂粟碱药品和中药罂粟壳的定性和定量鉴别方法如下:1.其它阿片类氧化物盐酸罂粟碱样品溶解后,在稀盐酸条件下与铁氰化钾溶液反应,立即生成黄色沉淀。利用此反应可区别罂粟碱与其它阿片类生物碱。另外,盐酸罂粟碱样品与甲醛硫酸溶液作用,可使反应溶液从无色或淡黄色逐渐变成深玫瑰红色,最后变成紫色。利用非水滴定方法可对盐酸罂粟碱药品进行定量测定,样品以冰醋酸和醋酸汞(5∶3)溶液溶解,结晶紫为指示剂,用0.1mol/L的高氯酸滴定至溶液显绿色,并经空白实验校正滴定结果后定量。2.碘化汞钾试液法罂粟壳粉末经5%盐酸乙醇溶液温浸提取,滤液蒸干,残渣以5%盐酸溶液溶解后,与碘化铋钾试液作用立即生成橙红色沉淀,与碘化汞钾试液作用后生成灰白色沉淀。三、光谱分析员注释昆虫血浆1.与铜绿假单元的配合性检测分光光度法主要是基于罂粟碱自身或是与其它指示剂和配对剂结合物的紫外可见光谱实现对罂粟碱检测的。Abdel-Ghani等提出了一种简单、准确、高灵敏的光度法用于快速检测药物制剂中含有的盐酸美其敏和盐酸罂粟碱成分。该方法以chromotrope2B(C2B)和chromotrope2R(C2R)为离子配对剂,分别用氯仿和二氯甲烷萃取盐酸美其敏和盐酸罂粟碱与离子配对剂形成的复合物,然后分别在两种复合物各自的最大吸收波长处检测吸光度值(C2B复合物分别为536和524nm,C2R复合物分别为540和528nm)。充分考察了酸度、试剂浓度、时间、溶剂和加入的离子配对剂用量等条件的影响。该方法对于药物制剂中盐酸罂粟碱的平均回收率为99.8%—100.1%。El-Zeany等提出了存在心气宁干扰物的情况下,药物制剂中罂粟碱的光度检测方法。罂粟碱的检测波长为310nm,心气宁检测波长为287nm。对于两种物质在紫外光谱区的峰重叠问题,通过Vierordt方程予以扣除。该方法对于罂粟碱回收率接近100%。唐勇等探讨了以紫外分光光度法测量血液及皮肤组织中盐酸罂粟碱含量及外用罂粟碱后局部皮肤组织中药物含量的方法。将含量为2%的盐酸罂粟碱霜外用于实验猪上,定时切取标本,经粉碎、萃取、离心、溶解和过滤等一系列样品处理后,以紫外分光光度法测定其皮肤组织中的药物含量。萃取物的吸收光谱呈典型的盐酸罂粟碱吸收光谱,无杂峰出现。血液中盐酸罂粟碱萃取率达92%以上,皮肤组织萃取率达87%以上。Mirzaeva等利用Dimedrol(迪米德罗尔)和罂粟碱与Sulfonazo含氮试剂的离子配对结合作用,将两者从复杂的基体中提取分离出来,进而结合光度法对其进行了定量检测。以丁醇为萃取剂,可将离子配对化合物和未反应试剂完全分离。通过测量离子对化合物在波长580nm处的吸光度实现了对Dimedrol和罂粟碱的定量检测。该方法回收率为96.5%—97.5%。光度法相对简单、仪器设备易得、成本消耗低、应用较为广泛。该方法的缺点主要在于难于区分各种不同的生物碱。2.荧光增敏剂的应用罂粟碱分子自身的荧光强度较弱,经质子化处理后,荧光强度可明显增强。颜承农等研究了经过浓硫酸酸化处理后的盐酸罂粟碱的荧光光谱特征,并探讨了β-环糊精和Tris-HCl缓冲溶液对罂粟碱的荧光增敏作用。质子化后的罂粟碱在252nm激发波长下,在发射波长大于500nm处荧光信号显著增强。他们考察了不同离子型表面活性剂对荧光信号增敏的影响,确定了酸化时间、酸化温度和荧光增敏试剂用量的最佳条件;提出了β-环糊精荧光增敏的作用机理为罂粟碱分子在疏水力作用下,被β-环糊精的空腔部分包络,同时,罂粟碱分子中的OH基团与β-环糊精分子空腔边缘通过氢键作用形成具有一定结构的超分子化合物,从而限制了罂粟碱分子的活动自由度,保护其荧光强度不受非辐射跃迁的影响,从而增强荧光强度。用该方法测定了盐酸罂粟碱与β-环糊精的包络反应常数和热力学参数,提出了在β-环糊精介质体系中测定盐酸罂粟碱含量的新方法,线性范围为1.06×10-7—3.18×10-6mol/L,检测限可达12.0ng/mL。此外,颜承农等还用荧光光谱法研究了盐酸罂粟碱与牛血清白蛋白(BSA)的结合反应特征,发现盐酸罂粟碱对BSA有较强的荧光猝灭作用。他们研究了在模拟人体生理条件下,盐酸罂粟碱与BSA结合作用的结合常数、结合位置和结合过程的基本热力学参数,为阐明盐酸罂粟碱在人体内的储存、传输机制和药理作用等提供了重要信息。Baudot等研究了罂粟碱、那可汀和可待因3种吗啡同系物的激发荧光光谱特征,可作为一种快速直接确认吗啡同系物的检测方法。3.流动注射技术化学发光技术是近二三十年来发展起来的一种测定方式。其原理是利用化学反应释放的自由能激发中间体,使其从激发态回到基态,当中间体从激发态回到基态时会释放等能级的光子,对光子进行测定而实现定量分析。化学发光具有荧光的特异性,同时不需要激发光,可避免荧光分析中激发光杂散光的影响,因而具有很高的灵敏度。将化学发光(CL)和流动注射技术相结合的分析方法具有快速、简单、灵敏等优点,在许多领域都有应用。近年来该技术也已用于罂粟碱的检测。Zhuang等将流动注射技术与罂粟碱对亚硫酸盐与酸性高锰酸钾弱化学发光反应的强烈增敏作用相结合,提出了一种检测罂粟碱的新方法。根据荧光和化学发光光谱推测出化学发光反应的机理如下:HSO3−+MnO4−→HSO3⋅+MnO42−2HSO3⋅→S2O62−+2H+S2O62−→SO42−+SO2∗SO2∗→SO2+hνΗSΟ3-+ΜnΟ4-→ΗSΟ3⋅+ΜnΟ42-2ΗSΟ3⋅→S2Ο62-+2Η+S2Ο62-→SΟ42-+SΟ2*SΟ2*→SΟ2+hν该方法的化学发光光密度值与罂粟碱浓度在0.2—10μmol/L的范围内成正比,检测限可达1.0μmol/L(3S),RSD值为2.0%。同时考察了其它生物碱对罂粟碱检测的干扰,其中吗啡和可待因的干扰可忽略不计,而那可汀有一定的影响。该方法已成功用于检测罂粟碱注射液和复方甘草片中的罂粟碱含量。Zhang等利用罂粟碱对亚硫酸盐与酸性铈(Ⅳ)弱化学发光反应的增敏作用,建立了用于检测罂粟碱的流动注射化学发光分析法。实验表明在罂粟碱与酸性铈(Ⅳ)的混合溶液中,随着时间的增加可以观察到铈(Ⅲ)在360nm处荧光强度的增加,说明酸性铈(Ⅳ)对罂粟碱存在缓慢的氧化作用。正是这一作用的结果,形成中间激发态的罂粟碱分子,从而增强了亚硫酸盐与酸性铈(Ⅳ)体系的化学发光发射。该方法的化学发光光密度值与罂粟碱浓度在0.1—10μmol/L的范围内成正比,线性相关系数0.9991,RSD值为2.0%,检测限可达87nmol/L(3倍信噪比)。应用该方法检测了药物制剂和体液中的罂粟碱。4.re采盐+不锈钢滤过体系Eisman等提出了一种结合在线沉淀系统的原子吸收光谱法(AAS)用以检测盐酸罂粟碱和盐酸可卡因。该方法以Reinecke盐在含有生物碱载体上的沉淀为基础,在不锈钢滤网上被保留,再结合火焰原子化AAS实现对盐酸罂粟碱和盐酸可卡因的检测。该方法取样周期为150h-1,对盐酸罂粟碱和盐酸可卡因的检测范围分别为5—85mg/mL和50—850mg/mL,RSD分别为1.3%和3.2%,可应用于药物制剂中两种生物碱的检测。四、不同药物主体间质竞争行为的检测电化学法在罂粟碱的检测中应用也十分广泛,包括吸附伏安法和各种膜电极检测方法等。曾泳淮等详细研究了罂粟碱在汞电极上的吸附特性。在NH3-NH4Cl底液中,罂粟碱在汞电极上有一线性扫描还原峰,且该峰有明显吸附性。当罂粟碱浓度较低、扫描速度较快、搅拌富集时间较长时,电极反应完全为吸附态的罂粟碱的还原所控制,吸附粒子为罂粟碱中性分子。罂粟碱在悬汞电极上的吸附符合Frumkin等温式,电子转移数为2,不可逆吸附的转移数为0.86。推测的机理为:并在机理研究的基础上,建立了测定罂粟碱的吸附溶出伏安法,检测线性范围为8.0×10-9—1.0×10-7mol/L,最低检测限可达1.0×10-9mol/L。Yegorov等采用PVC膜离子选择性电极实现了对复杂药物制剂中的迪米德罗尔和罂粟碱成分的检测。对离子的选择性是通过改变膜组成和待测溶液的pH值而实现的。吕太平等研究了以四苯硼钠为电活性物、邻苯二甲酸二壬酯为增塑剂的涂碳罂粟碱敏感膜电极。该电极对罂粟碱的线性响应范围为2.82×10-3—1.00×10-6mol/L,检测限为3.30×10-7mol/L。用格氏作图法测定盐酸罂粟碱注射液,回收率为99.0%—101.0%。杨红芸等通过对21种膜配方进行筛选,研制了以中性载体冠醚A1为电活性物、酯化合物B1为增塑剂、PVC为基质、大阴离子为添加剂的膜配方的涂碳罂粟碱敏感膜电极。该方法线性范围为1.00×10-2—1.00×10-5mol/L,检测限为1.99×10-6mol/L。该电极具有响应时间短、寿命长、稳定和重现性良好的优点,对自制火锅汤料测定加标回收率为98%—103%,RSD为3.4%。五、铬碱的色度和电泳分离分析方法1.tlc-hplp-ms法TLC和HPTLC法是利用不同生物碱在固定相上不同的展开能力,达到分离复杂样品的目的,经与标准品谱图进行对照后,可以定性检测罂粟碱。也可根据需要配合薄层扫描仪对色谱斑点直接扫描定量,或是将分离后的罂粟碱以适当溶剂洗脱后再利用紫外光度法或荧光光度法等进行定量检测。TLC法是药典规定的定性检测罂粟碱和罂粟壳的标准方法之一。Rajananda等对阿片碱类物质的TLC分离检测方法进行了系统总结,评价了从1975—1985年10年间发展的用于检测14种阿片碱类物质的38种不同的TLC体系,检测样品涉及尿样和植物样品等。对不同TLC体系的成本消耗、适用范围、标准对照谱图以及固定相涂渍方法等都进行了总结和评价。李兆琳等利用岛津GS-910薄层色谱扫描仪和硅胶GF254薄层预制板,以环己烷-乙二胺(4∶1)为展开剂对罂粟籽和罂粟壳中5种主要生物碱进行了分离和定量检测,经测定罂粟碱含量为壳中0.007%,籽中0.004%。Szabo等提出了一种快速简单的TLC和HPTLC方法,可实现对罂粟壳中6种重要生物碱那碎因、吗啡、可待因、蒂巴因、罂粟碱和那可汀的分离和定量。该方法首先采用甲苯-丙酮-乙酸乙酯-25%氨水(20∶20∶3∶1,v/v)为展开剂在硅胶板上浓缩样品;再以甲苯-丙酮-乙醇-氨水(20∶20∶3∶1,v/v)为展开剂对样品进行展开分离;最后以Dragendorff或Marquis试剂显色,分别在600nm和520nm测量其吸光度值进行定量。张朝云等采用氯仿-无水乙醇(9∶1,v/v)为展开剂,以硅胶G为吸附剂,改进的碘化铋钾-亚硝酸钠-乙醇溶液为显色剂,分离鉴定了添加罂粟壳的火锅汤料、底料中的罂粟碱,其检测限可达4μg/L(即0.5g罂粟壳/L汤)。TLC和HPTLC具有快速、样品消耗量少、检测和运行维护成本低、仪器简单、对操作人员专业技能要求低和高通量(一块薄层板上最多可同时点样15个样品)等优点,适于在基层单位推广,用于常规快速筛查过程并为进一步的确证提供指导。2.测量病料的线性范围和检出限GC方法一般要求被分析物或其衍生物容易气化,研究表明罂粟碱无需衍生化就可直接进行GC分析。到目前为止,在罂粟碱的GC分离技术上从填充柱、石英毛细管柱到大口径毛细管柱均有文献报道,氢火焰检测器(FID)是应用最多的检测器。季申等以1.5%OV-17为色谱柱固定液,采用程序升温,FID检测器同时检测了罂粟壳中的吗啡、可待因和罂粟碱。该方法对罂粟碱在0.444—11.1μg/mL浓度范围内呈现良好的线性关系和重现性。经测定几种不同产地的罂粟壳中罂粟碱含量约为0.010%—0.033%。许庆琴等以0.53mm大口径毛细管柱(HP-1色谱柱),采用二阶程序升温、FID检测器,不经衍生化处理,建立了一种同时测定3类毒品——大麻、海洛因和阿片中8种物质(包括罂粟碱)的快速气相色谱检测方法。该方法对罂粟碱的线性范围为4—160μg/mL,检测限为0.50μg/mL。宋家铨等用GC-FID方法分离检测出罂粟中4种主要生物碱成分——吗啡、可待因、蒂巴因和罂粟碱,用来判断食品中是否添加有罂粟壳(籽)。牛肉汤样品在经除脂肪、去除蛋白和生物碱沉淀等步骤处理后,采用HP-5大口径毛细管柱、程序升温,测定了生物碱成分。经与标准色谱图保留时间对照,可确认食品样品中是否含有罂粟成分。Paul等采用高灵敏的质谱作为GC的检测器,实现了对罂粟籽中可待因、吗啡、蒂巴因、那可汀和罂粟碱的定性和定量检测。对于罂粟碱其检测限可低至0.4ng/mL,经测定罂粟碱在印度罂粟籽中的含量为67μg/g,而在荷兰罂粟籽中的含量仅为0.17μg/g。该方法还被成功地用于尿样的检测。3.种国之间化合物同时分离和定性定量检测随着二极管阵列检测器、荧光检测器、电化学检测器和质谱检测器等多种检测器在HPLC技术中应用的不断发展,近10多年来,HPLC技术的应用得到了迅速的推广。人们探讨了各种不同模式的HPLC方法用于检测包括罂粟碱在内的各种生物碱,如正相色谱法、反相色谱法[29,30,31,32,33,34]、离子交换色谱法、离子对反相色谱法等。其中反相色谱法适用范围广、条件限制少,成为应用最广泛的HPLC方法。目前常用的检测器是紫外和荧光检测器,质谱检测器和电化学检测器也有一定的应用。王越等采用C18柱,以CH3OH-25mmol/LKH2PO4(90∶10,v/v)为流动相,紫外检测器(254nm检测波长),同时测定了火锅底料中的吗啡、可待因和罂粟碱。3种物质可达到完全分离,其检测限为0.1μg/mL。BorojevičBorojevič等建立了利用C18柱-双通道可变波长紫外检测器,用于检测治疗哮喘类药物中含有的盐酸麻黄素、茶碱、盐酸罂粟碱和盐酸羟嗪的质量控制方法。该方法对于盐酸罂粟碱线性范围为2.66×10-4—7.98×10-4mol/L(0.1—0.3mg/mL,R=0.9972),检测限可达50ng(3倍S/N)。使用质谱检测器,可以实现对多种生物碱的同时分离和定性定量检测。Kikura-Hanajiri等采用大气压化学电离质谱(APCI-MS)检测器检测了服食阿片后的小鼠在72h内尿样排泄物中的吗啡3位代谢物M3G、吗啡、袂康宁、可待因、诺司卡品和罂粟碱等的含量。该方法以ODS-3为色谱柱,采用梯度变化流动相,实现了对几种生物碱的同时检测,测得尿样中罂粟碱的含量为0.01—0.04μg。Bakkali等则利用半自动化的固相萃取装置(SPE)首先对尿样进行纯化,然后采用C18柱,紫外检测器(检测波长212nm)实现了对样品中的罂粟碱、地尔硫、去甲丙咪嗪和尼卡地平4种物质的同时检测。该方法对尿样的加标回收率大于80%。Doner等利用氨基液相色谱柱,采用阴离子交换模式,分离检测了罂粟壳中多种生物碱成分。HPLC流动相为乙腈-0.025mol/LKH2PO4(75∶25,v/v),紫外检测器检测波长为286nm,以酪氨酸为内标物,在16min内实现了对罂粟壳中罂粟碱、那碎因、蒂巴因、可待因和吗啡的良好分离。由于罂粟碱等生物碱的碱性强、极性大,因此在采用HPLC方法分析时,对色谱柱吸附强,易造成峰型较差、拖尾等问题。一般需通过添加离子对试剂等方法来改善峰形和分离效果。总的来说,GC和HPLC方法在定量检测和选择性方面明显优于TLC和HPTLC方法。它们是到目前为止最佳也是应用最为广泛的罂粟碱的仪器检测方法。而HPLC法由于只要求样品能够制成溶液,就能对较大范围不同分子量的化合物进行分离,因而适用范围比GC方法更加广泛。HPLC法目前已被我国卫生部列为测定食品中生物碱的标准检测方法。4.治疗阿片类植物和药物制剂分离度的测定毛细管电泳法(CE)是20世纪80年代初发展起来的一种高效快速的分离检测方法,已广泛用于蛋白质、氨基酸、核苷酸、无机离子、有机化合物和药物等的分离分析。目前该方法也被越来越多地引入到生物碱的检测领域中,并发展了多种检测模式,包括区带电泳(CZE)、胶束电动色谱(MEKC)等,检测物质涉及多种常见的生物碱。余兆楼等采用MEKC模式分离检测了常见阿片制品中海洛因、吗啡、6-单乙酰吗啡、可待因、乙酰可待因、咖啡因、罂粟碱及可卡因等8种组分;探讨了在不同电泳体系中各种组分的电泳行为和分离效果,最佳分离条件为含10mmol硼砂、25mmolSDS和10%(v/v)甲醇的缓冲溶液(pH9.15—9.40)。在选定条件下,8种物质可达到基线分离,检测限可达0.8—1.5mg/L。Bj《rnsdottir等提出了采用非水模式CE检测阿片类植物和药物制剂中吗啡、可待因、蒂巴因、那可汀和罂粟碱的方法。该方法考察了甲醇、乙腈、DMF、DMSO等常见有机溶剂、缓冲溶液和温度等因素对分离度的影响,电泳缓冲液为含有乙酸铵(25mmol/L)-乙酸(1mol/L)的有机溶剂。综合考虑检测限和分离度,确定25%甲醇-乙腈是最佳的有机溶剂条件,最佳柱温为25℃,采用二极管阵列检测器(DAD),检测波长214nm。在确定的最佳电泳条件下,几种生物碱可达到完全分离。另外,他们还研究了MEKC方法对吗啡、去甲基吗啡、可待因、罂粟碱和那可汀5种生物碱的分离检测,特别考察了在6-氨基己酸缓冲溶液中(0.05mol/L,pH=4.0)添加不同表面活性剂(吐温-20和SDS)和5种不同环糊精(CD)对分离度的影响。结果表明:采用混合表面活性剂(25mmol/L吐温-20和12mmol/LSDS)对去甲基吗啡、甲基和可待因分离效果较好;如考虑到罂粟碱和那可汀的分离效果,则应加入阳离子表面活性剂以达到改变电渗流方向的目的;对于添加环糊精体系,不同的CD表现出了不同的选择性,其中30mmol/L的DM-β-CD可以提供最佳的分离效果。Reddy等采用CZE模式定性和定量检测了5种主要的阿片类生物碱,包括蒂巴因、可待因、吗啡、罂粟碱和那可汀等;研究了缓冲溶液组成、pH值和电压对分离度的影响。样品处理方法简单,仅需用2.5%乙酸溶液定量萃取3次就可进行检测。该方法对几种生物碱的检测限(信噪比=3)分别为450ng/mL(蒂巴因)、500ng/mL(可待因)、550ng/mL(罂粟碱)和500ng/mL(那可汀),峰面积RSD和迁移时间RSD分别为1.03%—3.56%和0.34%—0.69%,经测定样品中罂粟碱含量为0.92%—2.37%。该方法适用于检测毒品等样品中主要的生物碱成分。王实强等采用HPCE法,用外标峰面积测定了中药罂粟壳中罂粟碱、吗啡和可待因3种生物碱的含量:缓冲溶液为50mmol/mL的磷酸缓冲液(pH=7.0);在实验条件下,9min内3种生物碱得到良好的分离;经测定样品中罂粟碱的含量约为0.033%。与HPLC法相比,CE法具有分析时间短、分离效率高、适应性广、检测限低、进样量小、溶剂消耗少、自动化程度高等优点。尽管毛细管电泳由于重现性差等自身原因的限制,未被列入药典认可的标准检测方法;但作为一种相对简单、快速、高效的检测方法,它可以与其它检测技术形成良好的补充,并在某些领域发挥其优势。六、基于elisa方法的活性成分检测免疫分析方法是利用抗体与抗原间的高特异性免疫反应实现对目标物定性和定量检测的方法。对于阿片类其它生物碱,如吗啡、海洛因和可卡因等的免疫分析方法研究报道较多,但是关于罂粟碱免疫检测方法的研究报道相对较少。Yeremenko等在1992年首次报道了罂粟碱多克隆抗体的制备方法,并利用获得的多抗建立了用于检测罂粟碱的酶联免疫吸附分析法(ELISA)。在该研究中,全抗原是通过将3-氨基-罂粟碱羧化,然后与牛血清白蛋白(BSA)偶联获得的。ELISA方法采用竞争模式,即将抗体固定于固相载体上,辣根过氧化物酶(HRP)标记的罂粟碱与待测样品中的罂粟碱竞争有限量的抗体,从而实现对样品中罂粟碱的定量检测。该方法灵敏度较低,检测限为1μ