动物血液学检查-血涂片制作及检查

1.掌握血涂片的制备和染色方法2.熟悉血涂片正常细胞的形态特点3.了解疾病引起的细胞变化目的一、制作血涂片二、红细胞检查三、白细胞检查四、血小板检查五、血液寄生检查1、推出一张好的血涂片；2、掌握显微镜血涂片的三个分区；3、掌握不同动物血小板的特征；4、能够观察判断血小板凝集。一、血涂片制作及质量判断抗凝剂选择样品处理：抗凝（哺乳动物最好用EDTA，且可以保持细胞的形状，到细胞超出保质期为止；一部分非哺乳动物可以用肝素抗凝，EDTA可能引起红细胞裂解；哺乳动物和大部分非哺乳动物可以用EDTA抗凝，使用肝素抗凝可能遗留在细胞上）NOTE:EDTAistherecommendedanticoagulantforroutineCBCsamplesEthylenediaminetetraaceticacid(EDTA)isthebestanticoagulanttopreservecelldetail.Heparincancausepoorstainingwithadiffusebluebackground.FormalinorformalinfumescausepoorstainingofWright-stainedbloodsmears,resultinginabluebackgroundEDTA抗凝至少要收集1ml血液，否则会影响检查。However,prominenterrorsarenotexpectedifatleast1mlofbloodiscollectedintoa4-mlEDTAtube如果不能在2-3小时内检查，最好放4度冰箱保存。红细胞储存6-24小时会使PCV升高，平均血红蛋白浓度降低。Ifnotanalyzedwithin2to3hours,EDTAbloodshouldberefrigerated(4°C).RBCswellingafter6to24hoursofstorageraisesPCVandMCVandlowersmeancorpuscularhemoglobinconcentration(MCHC).采血后应尽快做血涂片，风干尽量避免细胞受抗凝剂的影响，避免储存和运输对细胞的影响。Bloodsmearsshouldbepreparedimmediatelyandair-driedtoavoidartifactscausedbyexposureofcellstoanticoagulantsandcelldeteriorationduringstorageandshipment.新鲜的耳尖血液寄生虫浓度较高，如果需要检查血液寄生虫，可以使用耳尖血体高检出率。取耳检血后立即进行检查。Freshcapillaryblood(earprick)providesahigherconcentrationofparasitizedRBCsifbloodparasiteexaminationisneeded.ONLY血涂片你知道血涂片检查在临床中有哪些应用吗？是否能够制作出质量合格的血涂片呢？临床上传统的血液学检测技术有哪些？哪些技术已经被检测仪器替代？哪些技术仪器无法替代，还经常使用？1、血涂片的制作1）将载玻片用酒精棉球擦洗干净，再用吸水纸擦干，选边缘光滑整齐干净，平直的载玻片备用；引自书籍2）做标记：实验日期，动物名称，ID号，采样日期3)滴加血样；引自书籍30-45度引自书籍将血液滴在载玻片上用另一个载玻片作推片推出均匀的血膜窍门：将载玻片的一端垫起，有助于推出均匀血膜。引自书籍智慧职教上有微课，大家可以随时，仔细观看学习微课2、血涂片染色3）水冲洗（切勿先倒掉染液）4）涂片经水洗干燥后用油镜分类（计数）1）涂片干燥后加瑞氏染液，覆盖整个血膜0.5-1分钟（甲液）2）加与染液等量的磷酸盐缓冲液（或稍多）乙液，轻轻晃动混合，作用5-10分钟防治染色液直接进入下水道，污染环境，对冲洗液和染色收集，回收处理，保护环境。

2、Diff-Quik染色法

Diff-Quik染色法待涂片干燥后，放入固定液A中10-20秒从固定液中取出，直接放入B液中5-10秒从红色染液中取出，放入C液中5-10秒将涂片取出后放入清水中洗去残留染液，自然风干。防治染色液直接进入下水道，污染环境，对冲洗液和染色收集，回收处理，保护环境。制片结束后48小时内染色，否则失效。片子保存运输，要远离福尔马林，否则影响染色结果。血涂片的观察低倍镜观察1.染色情况2.细胞形态油镜下观察：体尾交界处。油镜分类时应按一定走向（计数）。引自书籍引自书籍羽尾区计数区主体区主体区计数区羽尾区精确的读懂血涂片：1、需要系统的检查程序2、有专门识别正常细胞，不正常形态和外来物的专业技能。血涂片分区血涂片分为三个区域：主体区（BodyRegion)：是最大的区域，从血滴到计数区，中间的区域都是主体区。这个区域血涂片比较厚，血细胞堆积在一起，辨认细胞形态及识别单个细胞比较困难。计数区(CountingRegion)：位于羽状区和主体区之间，这个区域血涂片明显变薄，细胞呈单层，能够清楚的识别红细胞，白细胞，血小板，可以用来检查细胞的形态，大部分血涂片都是使用使用计数区进行检查的。羽状区(FeatheredRegion)：是血涂片的最远区域，离血滴最远，这个区域很多细胞都已经破碎，不平，红细胞失去了中心区域的形态。不能在这个区域观察细胞形态。好片子标准：薄、长、舌型；关键是镜检细胞匀、好。反复练习！练好推片关键是达到标准要求：血量合适，推片稳、准、轻、匀，较高悟性，较好手感推片考核实验要点

考核项目评分标准得分血液涂片制作血液选择（抗凝血与非抗凝血）10分

抗凝试剂名称（管子颜色）5分

滴加血液的量与位置（取血前是否混匀）5分

推片方法10分

推片结果10分

是否风干5分

染色方法（步骤及时间）10分

冲洗位置及水流5分

风干方法5分

油镜使用正确10分

找到正常的细胞计数区10分

能够找到嗜中性粒细胞10分

做出初步的结果判断5分

总评

二、血涂片检查红细胞1、熟悉计数区红细胞典型形态；2、红细胞形态变化与疾病之间关系；3、通过血涂片帮助疾病诊断。Poikilocytesinbloodfromanormalgoat.Notethesmallsizeoftheerythrocytescomparedwiththeneutrophilintheleftpartoftheimage.Wright-Giemsastain异形红细胞，变形红细胞Markedpoikilocytosisandhypochromasiainbloodfroma6-week-oldlambwithmicrocytichypochromiciron-deficiencyanemia.Wright-Giemsastain。淡然，低血红蛋白；小细胞低色素缺铁性贫血牛红细胞Plateletaggregateinbloodfromacow.Wright-Giemsastain.Markedpoikilocytosisandhypochromasiainbloodfromapigletwithmicrocytichypochromiciron-deficiencyanemiaresultingfromafailuretoprovideironinjectionsthatarepartofthehusbandryrequiredinraisingpigletsonslatedfloors（石板）.Wright-Giemsastain.犬红细胞禽类红细胞马正常是串钱状红细胞，Elliptocytesinbloodfromanormalllama.Wright-Giemsastain.卵形红细胞，美洲驼红细胞的形态与物种有关（12-10）。犬的红细胞是典型的双凹面的圆盘状，而猫，马，羊的红细胞就没有那么典型。骆驼的红细胞为椭圆形。鸟类和爬行类红细胞是椭圆形的，有椭圆形的核。牛与其他物种比有红细胞有大小不等症。但是狗的红细胞大小不等是很少。不同动物的红细胞特点显微镜检查首先使用10╳物镜检查，主体区来评价红细胞是否形成串钱状（Rouleaux)或者形成凝剂团（Agglutination)。猫和马的血液发生这种情况是正常的，不过狗的血涂片检查到细胞呈成串钱状，就是炎症诱导的（血浆蛋白升高导致的），或者有可能使血涂片制作的问题。三、血涂片检查白细胞1、掌握白细胞的分类；2、掌握白细胞不同分类的变化的意义；3、能够识别血涂片计数区白细胞的形态；①中性粒细胞数量：61%，是数量最多的白细胞。结构：胞体呈球形，胞质中有许多细小而分布均匀的淡紫红色中性颗粒。细胞核呈蓝紫色，形状分为杆状核和分叶核，升高。

核左移：1-2叶核增多-细菌感染。 核右移：4-5叶核增多--衰老。功能：具有很强的变形运动和吞噬能力，能吞噬进入血中的细菌、异物和衰老死亡的细胞，对机体起保护作用。总血细胞的中性粒细胞体积略大于红细胞，细胞核被染成紫色分叶状，可分1-5叶。核左移：当杆状核的数量大于10/100（杆状核与总白细胞比）为核左移。②嗜酸性粒细胞数量：6%，较少。结构：细胞呈球形，胞核多分为2叶，呈“八”字形，细胞质内充满粗大而均匀的圆形嗜酸性颗粒，一般染成橘红色。功能：能以变形运动穿出毛细血管进入结缔组织，在过敏性疾病或某些寄生虫疾病时明显增多、嗜酸性肉芽肿。嗜酸性粒细胞(LM)Eosinophilicgranulocyte略大于中性粒细胞，细胞核染成紫色，通常为2叶，胞质充满嗜酸性大圆颗粒，被染成鲜红色。③嗜碱性粒细胞数量：1%，最少。结构：细胞呈球形，细胞核常呈S形，细胞质内含有大小不等、分布不均的嗜碱性颗粒，被染成深紫色，胞核常被颗粒掩盖。功能：颗粒内有肝素、组织胺。组织胺对局部炎症区域的小血管有舒张作用，能加大毛细血管的通透性，有利于其他白细胞的游走和吞噬活动。嗜碱性粒细胞LMBasophilicgranulocyte

体积略小于嗜酸性粒细胞，细胞质中有大小不等被染成紫色的颗粒，核1-2叶，染成淡蓝色。箭头所指是碱性粒细胞④单核细胞数量：7%结构：是白细胞中体积最大的细胞，呈圆形或椭圆形。细胞核呈肾形、马蹄形或不规则形，着色较浅，呈淡紫色。细胞质呈弱嗜碱性，内有散在的嗜天青颗粒，常被染成浅灰蓝色。功能：能吞噬较大的异物和细菌。

单核细胞（LM）Monocyte白细胞中体积最大的细胞，呈圆形或椭圆形。细胞核呈肾形、马蹄形或不规则形，着色较浅，呈淡紫色。细胞质呈弱嗜碱性，内有散在的嗜天青颗粒，常被染成浅灰蓝色。数量：25%，较多。结构：呈球形，一般按直径大小分为大、中、小三种。健康犬血液中，大淋巴细胞极少，小淋巴细胞较多。细胞核较大，呈圆形或肾形，呈深蓝或蓝紫色。胞质很少，仅在核周围形成蓝色的薄层。功能：参与免疫，为主要的免疫细胞。⑤淋巴细胞淋巴细胞（LM）Lymphocyte呈球形，一般按直径大小分为大、中、小三种。血液中，大淋巴细胞极少，小淋巴细胞较多。细胞核较大，呈圆形或肾形，呈深蓝或蓝紫色。胞质很少，仅在核周围形成蓝色的薄层。四、血小板检查哺乳动物的血小板是来自骨髓巨核细胞产生的无核胞质碎片。大部分的哺乳动物血小板的都小于红细胞，胞质被染成淡蓝色，包含有淡紫色的小颗粒（12-9）。马血小板染色不好，美洲驼，羊驼的血小板跟其他物种比要小很多。鸟类和其他的爬行动物的血小板有核（12-9）。血小板（LM）Bloodplatelet一般情况下，血涂片血小板计数没有血小板自动计数准确。平均一个油镜下视野内，大概能看到6-15个血小板，平均大概等于15,000~20,000/μL.如果减少，看羽状区是否有血小板堆集。血小板减少称为血小板减少症，如果是一种标志，说明与机体有不正常的出血。血小板当血小板的大小跟红细胞差不多时成为巨大血小板。在一些物种出现巨大细红细胞。骑士查理王猎犬计数比自动血小板计数要准确。显示是血小板的产生增加。骑士查理王猎犬与猫血液中出现巨大血小板是正常的。该犬血涂片计数比自动计数准。箭头所指为，A为狗的血小板，B为鸟类血小板禽类血小板红色圈内为禽类血小板A为羽尾区血小板凝剂；B为羽尾区微丝蚴五、血涂片寄生虫检查血液寄生虫检查，嗜血支原体检查；红细胞寄生检查。Markedpoikilocytosis(primarilydacryocytes)andhypochromasiainbloodfromagoatwithmicrocytichypochromiciron-deficiencyanemiasecondarytochronicbloodlossresultingfromHaemonchusgastrointestinalparasites.Wright-Giemsastain.胃肠道寄生虫朱氏血蜱引起的

TwoBabesiabigeminaorganismsinanerythrocytefromacow.Wright-Giemsastain牛巴贝斯虫E,Twopear-shapedBabesiacaballiorganismsinahorseerythrocyte.Wright-Giemsastain.F,AsingleBabesiaequiorganisminoneerythrocyte(top)马巴贝斯虫Trypanosomatheileriinbloodfroma3-day-oldfemaleAnguscalf.Wrightstain安格斯小肉牛泰氏锥虫E,Mycoplasmasuisorganismsonthesurfaceoferythrocytesandbetweenerythrocytesinbloodfromasplenectomizedpig.猪嗜血支原体F,Mycoplasmaovisorganismsbetweenerythrocytesinbloodfromasheep.绵羊嗜血支原体

G,M