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文档简介

教学对象：强化班学生实验课时：3学时课程类型：专业实验课课程要求：必修每组人数：4人实验目的与要求掌握单向琼脂扩散试验的原理、结果分析及应用实验原理：将适量的抗体均匀混入琼脂内制成琼脂板，打孔，在孔中加入一定量的待测抗原，抗原向四周呈辐射状扩散，与抗体相遇，在比例合适时形成白色沉淀环。沉淀环直径的大小与抗原含量成正比，用标准抗原或国际参考蛋白制成标准曲线，从标准曲线上，可以查出待检样品中抗原的含量。本试验主要用于检测标本中各种免疫球蛋白和血清中各种补体成分的含量，敏感性很高。

单向琼脂扩散试验实验方法标准曲线的制备5．用PBS缓冲液稀释不同浓度的标准参考蛋白：浓度分别为800mg/L、400mg/L、200mg/L、100mg/L。6．加样：将已稀释的不同浓度的工作标准蛋白依次用微量加样器每孔加入10ul。（注意：每一稀释度均应更换塑料吸头）。7．将加样的琼脂板放湿盒中，置37℃温箱，24小时后观察结果。8．用尺子测量并记录沉淀环直径，然后以沉淀环直径为纵座标，以标准参考蛋白量（单位/ml）为横座标，绘制成标准曲线。单向琼脂扩散试验实验方法人血清中IgG正常值的测定：1．将已制备好的抗体琼脂板置于打孔模板上，每一琼脂板可打孔2个。2．取正常人血清，用PBS做1:4稀释。3.用微量加样器分别取稀释后人血清标本10µl加入孔中，每份各加两孔。4.作好标记放湿盒中，置37℃温箱，24小时后观察结果。单向琼脂扩散试验结果计算分别量取各孔样品沉淀环的直径，根据提供的参考标准曲线，计算待检血清中各种免疫球蛋白的含量成人血清中IgG范围700~1660mg/L单向琼脂扩散试验实验结果单向琼脂扩散试验实验结果单向琼脂扩散试验注意事项：制备抗体琼脂板时，琼脂温度必须严格控制，温度太低琼脂会凝固，太高则会影响抗体的活性；加样孔内的琼脂应挑干净，切不可损坏孔的边缘，确保每孔的液面基本一致；加样量一定要精确，并且不能逸出孔外，否则结果不好观察；加样时，吸取每份标本均应更换塑料吸头；实际检测过程中，标准曲线必须与样品测定同时制备；孵育时间应

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