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文档简介
实验原理细胞内各种结构的比重和大小等都不相同，在同一离心场内其沉降速度也不同，所以利用各细胞器在一定介质中的沉降速度的差异，可采取离心的方法，将细胞器分离出来。细胞器沉降先后顺序先后是细胞核、线粒体、溶酶体和其他微细胞核糖体和大分子。细胞核的比重和大小与其他组分不同，可将组织制成匀浆，在均匀的悬浮介质用特定的离心、分离，然后进一步分析鉴定。匀浆：是指在低温下，将组织块放入匀浆器，加入等渗匀浆介质进行研磨，破碎细胞，使之成为各种细胞器及其包含物的匀浆液。甲苯胺蓝：碱性染料，甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用，可使细胞核呈蓝色。操作流程断头处死小白鼠，手提尾部使腹内血液尽量流出匀浆、过滤离心；2500r/min离心15min取材迅速开腹取肝，在盛有生理盐水的小烧杯中洗涤，称取约1g的肝组织放入烧杯加入8ml预冷的0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液与烧杯中，将剪碎的肝组织倒入玻璃匀浆器，匀浆。用8层纱布过滤匀浆液与离心管中。涂片染色洗涤镜检取上清液制一张（标记1）。将原离心管中剩余上清液吹打沉淀成悬液，另制一张涂片（标记2）分别在涂片1、2上滴加甲苯胺蓝染液，染色5～7min（即滴染）冲去染液，吹干实验试剂表名称规格用量说明
小白鼠肝脏
1g
生理盐水
蔗糖-氯化钙溶液0.25mol/L蔗糖0.003mol/L氯化钙溶液
甲苯胺蓝染液1％
注意事项开腹取出肝后要用生理盐水反复冲洗，避免血细胞对实验的影响。尽可能充分剪碎肝组织，缩短匀浆时间，整个分离过程不宜过长，以保持组分生理活性。匀浆置于蔗糖溶液上层时要沿管壁小心加入，及时离心，防止浆液中的颗粒自然下沉过快，影响离心分层效果。染色后洗涤时间不宜过长，水流不宜过大，以免影响观察效果。实验思考1.为什么要用肝组织
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