血瘀证动物模型制作研究进展

血瘀证动物模型制作研究进展

中医证候动物模型发展迅速，发表了血瘀证候模型的制作现状和问题。1郁狂、有气目前,血瘀证动物模型研制方法大约有二种:一是根据血瘀的病因病机,如寒邪、外伤、郁怒、气虚等建立的动物模型。如《灵枢·贼风》“若有所堕坠,恶血在内而不去……则气血不去……则气凝结”;《素问·调经论》“寒邪独留则血凝,凝则脉不通”。二是根据血瘀证研究发现的病理生理异常,如血流变学异常,血液凝固性增高等制作的动物模型。1.1基于血液抑郁症的病因病机制的动物模型1.1.1实验结果分析将家兔固定在兔台上,用杠杆压其后腿内侧肌肉,加压7.5kg,持续1.5h。实验结果,压伤局部肿痛,血流减少。X线造影显示动脉萎缩狭窄,静脉扩张,病理检查显示局部肌肉水肿、缺血、坏死、血流变学指标明显异常,全身凝血机制失调处于高黏聚状态,病理组织学检查及电镜检查均提示脏器形态及超微结构发生不同程度变化。1.1.2热毒充盛的临床表现在家兔耳静脉注射大肠杆菌内毒素。实验结果:模型出现高热,眼结膜和耳部血管明显扩张充血,心跳加快,呼吸急促等热毒充盛的表现。病理学检查发现诸多瘀血、出血和广泛血栓存在,细胞变性坏死。另外,还有血流变学的异常和凝血功能亢进。1.1.3电针多次刺激家兔根据中医七情过度导致气郁、气滞,进而可导致血瘀的理论,采用电针刺激家兔引起恐、惊、怒,采用中药疗法,进行血流变学、微循环、SOD、5-HT生化测定及各脏器电镜光镜检查得出,电针连续刺激家兔,可造成气滞血瘀模型。1.1.4小鼠血液凝块手术中医认为,血液不循经脉,溢于脉外则为瘀血,采用雌性家兔10ml/kg体重抽取心脏血液,放置20min后,取20ml经无菌手术将血凝块置于结肠下,12天后处死。用排液法测定残留血凝块体积,将血凝块切片镜检,并观察血凝块周围巨噬细胞聚集情况。1.1.5胆固醇及柴油剂量g/只/d处理将家兔适应性喂养1个月后,统一喂饲胆固醇(剂量1g/只/d)猪油(剂量3g/只/d)每周6次。第8周后胆固醇及猪油剂量减半,第9周恢复原剂量,持续到第13周。实验结果见造模家兔出现少食稀便、皮毛欠光泽、少动及红细胞变形能力下降。1.1.6冷冻1.5h的模型测定在家兔两侧后腿足的周围放置冰袋(-15℃~-25℃),冷冻1.5h后模型出现微循环障碍、肢体血流下降、血流变学改变,凝血指标发生变化,SOD含量降低,电镜检查发现:重要脏器和受冻局部坏死、水肿、瘀血、出血等。1.1.7造模大鼠血小板计数实验将大鼠置于低温冰箱中,在-15℃环境中持续受冻4h,实验结果:造模大鼠畏寒喜暖、缩少动、反应迟钝、皮毛蓬松无光泽、便烂唇周发黑、爪尾部紫暗,耳廓循环严重障碍,血小板数量明显下降。1.1.8虚、实、瘀中医认为:“气为血之帅,血为气之母。”血虚可导致气虚,气虚可导致血瘀。采用放血方法制作家兔血瘀模型,通过血流变学、微循环等病理形态观察证明符合血瘀或脾虚的特点。1.1.9不同年龄大鼠血流变学的变化分别选取3月龄青年大鼠,18月龄中年大鼠,27~30月龄老年大鼠。观察随年龄增长,其血流变学的变化,老年大鼠在电刺激颈项动脉后,内皮受损易形成体内或体外血栓。红细胞变形能力下降,且压积增高,故老年大鼠可作为病性天然血瘀证模型。1.2家兔体内制定的“脑梗”模型在活血化瘀研究过程中,发现某些病理状态,具有典型血瘀证的症状和体征,如患者有血流变学异常,血液凝固性增高等病理生理异常,常见的有:1.2.1通过结扎动脉(冠状动脉或脑动脉)造成心梗或脑梗通过结扎冠状动脉或脑动脉造成心肌梗塞或脑梗塞作为局部血液循环的血瘀模型。此方法为现代医学中急性心梗或脑梗模型。由于气滞血瘀,血脉瘀滞,所造成心脑缺血模型也能体现出血瘀证的特点。1.2.2用高分子右旋糖苷制作的模型在家兔耳缘注入10%高分子右旋糖苷,每周静注两次,历时10周。其结果:眼球结膜微循环变化,微小静脉普遍扩张,血流速度变快,部分血流停止,微血管周围有渗出,血黏度升高,红细胞电泳时间延长等显著全身微循环障碍。1.2.3耳缘注入去甲肾上腺素或肾上腺素造成局部循环障碍在家兔耳注入肾上腺素或去甲肾小腺素,造模后发现全血黏度、血浆黏度、全血还原黏度均升高,红细胞压积明显降低,电泳时间明显延长,血浆TXB2含量明显升高,PGl2含量明显降低。1.2.4放射损伤动物模型用Co-60-r射线造模动物经过r射线或X射线照射后,可出现符合“血瘀证”变化的血流变学和微循环障碍。以射线照射家兔后观察眼球结膜循环,可观察毛细血管渗透变化。经活血化瘀治疗可缓解炎症反应。2中医证候动物模型的概念一般而言,成功的模型建立必须满足三个条件:①模型与原型之间有相似关系。②模型能够代替原型。③对模型的研究,应该能够得出原型的信息。就中医证候动物模型而言,所谓原型就是指中医证候以及具有中医特色病证结合的病理反应。最为重要的是模型要符合中医理论。因此,判断中医证候动物模型成功与否的依据或标准就是中医固有的理论及现代研究成熟的新理论。中医传统辨证的依据是症状、体征、脉象和舌象,而现代中医研究成果又使得中医证候的诊断标准包涵了一些实验室指标和特殊检查结果。因此,成功的中医证候模型应当在症状、体征(包括脉象、舌象等),实验室及特殊检查以及治疗反应等五方面。目前中医动物模型主要存在以下问题:2.1效证多为慢性过程所谓中医特色应着重体现在造模时所采用的病因和方法以及模型动物所表现出来的症状体征是否符合中医理论的本质内涵,如用“头尾法”采取肝郁血瘀的模型,时间仅为2天,中医理论认为“怒伤肝,久则郁”,肝郁则气滞,气滞则血瘀,因而瘀血是一个长期的过程。再如,目前制作血瘀证的模型多以急性结扎为主以及静脉注射肾上腺素、去甲肾上腺素、高分子右旋糖苷等方法。血瘀证是一个慢性过程,而两天时间造的模是否能代表血瘀证值得怀疑。目前血瘀证实验动物模型大部分是血瘀证某些病理表现如微循环障碍、高黏血症、结缔组织增生等复制,这些带有相当大的人为性。按中医传统的血瘀证有四大主症,即痛、肿块、瘀斑和出血,判断是否为血瘀四大主症必居其一。如果不对模型动物细致观察其外在表现,而仅以实验室指标,如血黏度、血流变学为依据,其说服力是不够的,因而中医特色不强。2.2原因一:单一因素造模难反映血药浓度计检测结果目前血瘀证动物模型多是单一因素造模,导致血瘀证的原因很多,如外邪、内伤、出血等原因,而且是各种因素长期相互作用的结果,故有“久病必瘀”之说,因此单一因素造模难以反映血瘀证的病因病机和病理、生理异常。因此应采用多种因素造模,才能较全面反映血瘀证的本质,从而可制出既反映中医证候的基本特点,又与现代医学的某些病症的基本病理过程相一致的动物模型。2.3病证结合,中证结合以活物模型为主应关注临床概念的理论依据和临床概念的理论依据,并注意病证结合和病证结合的模型的分由于证是中医学认知疾病特有的概念,大多数血瘀证的动物模型是根据中医血瘀证的病因病机或西医学的血瘀病理生理改变而建立的,缺乏病证结合的模型,而病证结合是中西医结合的重要环节,既辨证又辨病,取中西医所长,所以病证结合中西医结合动物模型将对临床有一定指导意义,同时对揭示中医证的本质,和加深西医学特定疾病的认识有一定价值。比较理想的病证结合的模型尚少见,一方面由于血瘀证兼挟证较多,如血虚血瘀、气虚血瘀等。另一方面一种疾病常在疾病不同阶段出现证型变化或疾病本身具有多种证的分类而难以找到比较明确而稳定的病证结合的血瘀模型。2.4对模型的确定因素不够中医实验起步较晚,积累方法和经验不多,在实验过程中往往忽略技术细节操作,随意性强,气候环境等以及被选动物生物学特性等诸多因素对模型制作、对模型有什么影响均未加以认真考虑。由于主客观因素,实验难以做到标准化、规范化,如疼痛所致血瘀模型时用电针做刺激,刺激引起血瘀,