实验五. 细胞染色体制备_第1页
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文档简介

组织培养细胞染色体的制备实验五实验目的实验原理实验试剂与仪器实验步骤注意事项了解组织细胞的培养方法。掌握染色体标本的制备方法。一、实验目的二、实验原理二、实验原理处于指数生长期的细胞，经过短期培养后，用秋水仙素处理，可把细胞分裂阻截在中期，再经过低渗、固定、滴片和染色，就可获得大量中期分裂相的细胞，制片后可以清楚地对染色体进行观察。材料：具有很强生长分裂能力的细胞系（Hela细胞、白血病K562细胞、C2C12，BHK细胞等）仪器：恒温培养箱、离心机、显微镜培养瓶、移液管、载玻片试剂：培养液（RPMI1640、M199、DMEM等）、胎牛血清、双抗、NaHCO3、生理盐水、肝素、1.0g/L秋水仙素溶液（0.1%）、低渗液（0.075M/L

KCl）、固定液(甲醇：冰醋酸=3：1)、Giemsa染液三、实验试剂及仪器

1.秋水仙素①阻止微管组装，破坏纺锤体阻断细胞有丝分裂。②使染色体收缩成一定的形状。目的:获得大量的中期分裂相细胞。2.Carnoy固定液新配置的甲醇：冰醋酸混合液(3:1)。能迅速穿透细胞，将其固定并维持染色体结构的完整性，还能够增强染色体的嗜碱性，达到优良染色效果

3.低渗液（0.075M/L

KCl）低渗的目的是凭借反渗透作用使细胞膨胀（但不破裂）染色体铺展，同时可使粘附于染色体的核仁物质散开，以便能在一个平面上观察所有染色体形态

4.染料（Giemsa）不是一种单一染料，而是天青、伊红、甘油和甲醇的混合物，配制后原液储存，染色后，染色质呈红色，细胞核是蓝色。

四、实验步骤

培养液4ml胎牛血清1ml培养24小时每ml培养液加1ug继续培养3-5小时培养秋水仙素培养瓶取样

取1ml培养液于10ml离心管1.1000rpm离心5分钟弃上清离心2.加KCl8ml混匀37℃处理20分钟低渗3.预固定固定加3-4滴固定液，轻轻吹打后，离心去上清二次固定4.5.6.加3ml固定液，2min后轻轻吹打后，固定10min,离心去上清加3ml固定液，轻轻吹打后，固定10min后，离心去上清三次固定（同

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