曲克芦丁片体外溶出度的考察

曲克芦丁片体外溶出度的考察

特洛伊木丁是羟乙基丙烯酸酯的半合成产物。它主要由三羟乙基丙烯酸酯组成。同时，它含有单一羟乙基丙烯酸酯、二羟乙基丙烯酸酯和四羟乙基丙烯酸酯等许多成分。这是治疗心脑血管疾病的基本药物。目前,《英国药典》(BP)2011年版及《欧洲药典》(EP7.0)只收载了曲克芦丁原料的质量标准,没有收载相关制剂的质量标准。《中国药典》2010年版、《美国药典》(USP34)以及日本药局方则没有收载该品种。我国《国家药品标准》第八册收载了曲克芦丁片剂和胶囊剂的质量标准,但是未规定溶出度的检查项。本文参考《欧洲药典》7.0版中曲克芦丁原料标准“组分测定”的色谱条件,考察了5个厂家生产的曲克芦丁片在不同溶出介质的溶出曲线,建立了曲克芦丁片的体外溶出度方法,为评价曲克芦丁制剂的内在质量和临床用药提供参考。1仪器和试剂盒1.1dfc-400rp标准Agilent1200四元低压梯度液相色谱仪(美国安捷伦公司);DFC-310RP半自动溶出度仪(德国Pharma-test公司);UV-2401PC紫外-可见光分光光度计(日本岛津公司);ZKT-18真空脱气仪(天大天发科技有限公司)。1.2曲克芦丁片规格为60.曲克芦丁对照品(中国食品药品检定研究院,批号:100416-201004,质量分数:95.2%);芦丁对照品(中国食品药品检定研究院,批号:100080-200707,质量分数:90.5%);市售5个厂家的曲克芦丁片(规格均为60mg/片),分别为A厂(3批糖衣片,批号:090314、100412、100415,代号分别为A1、A2、A3)、B厂(3批薄膜衣片,批号:2100315、2090251、2100146,代号分别为B1、B2、B3)、C厂(3批糖衣片,批号:20080801、20080802、20080803,代号分别为C1、C2、C3)、D厂(1批糖衣片,批号:1005196,代号D)、E厂(1批糖衣片,批号:100521,代号E);乙腈(色谱纯,默克公司);NaH2PO4(分析纯,广州化学试剂厂)。2方法和结果2.1测定波长的确定精密称取曲克芦丁对照品适量,用NaH2PO4溶液(取NaH2PO415.6g,加水至1000mL,并用稀H3PO4或NaOH调pH值至4.4)-乙腈(体积比为80∶20)体系溶解并制成质量浓度约为15μg/mL的溶液,在220～400nm波长范围进行扫描,结果见图1。图1表明:曲克芦丁在254nm和350nm波长处均有最大吸收,但是在254nm波长处的吸光度明显大于350nm的吸光度,因此,选择254nm作为测定波长。取按片剂处方制成的辅料溶液在220～400nm波长范围进行扫描,结果几乎无紫外吸收,表明对测定无干扰。2.2柱5.4%参考《欧洲药典》7.0版曲克芦丁原料标准“组分测定”的色谱条件:色谱柱为Kromasil-C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相为NaH2PO4溶液(取NaH2PO415.6g,加水至1000mL,并用稀H3PO4或NaOH调pH值至4.4)-乙腈(体积比为80∶20);检测波长为254nm;流速为0.5mL/min;柱温为35℃;进样量为10μL。2.3样品溶液和辅料溶液的配制取曲克芦丁对照品和芦丁对照品用流动相制成质量浓度分别为1mg/mL和0.1mg/mL的混合溶液作为系统适用性溶液;取曲克芦丁片样品(A1)和处方量的辅料按“2.7.3”项下方法制备,45min取样,得样品溶液和辅料溶液。分别取上述3种溶液进样10μL,色谱图见图2。图2的A中,曲克芦丁色谱峰与芦丁色谱峰、二羟乙基芦丁色谱峰(根据《欧洲药典》中曲克芦丁原料的标准,其色谱峰根据相对保留时间为1.1来定位)的分离度分别为4.2和2.3,曲克芦丁色谱峰的理论板数为11478。2.4对照品溶液的制备精密称取曲克芦丁化学对照品适量,用流动相溶解并制成质量浓度为1.0mg/mL的对照品储备液。分别精密量取对照品储备液适量,用流动相稀释成质量浓度范围为0.99～119.26μg/mL的系列对照品溶液,分别进样10μL,记录峰面积。以对照品溶液质量浓度(ρ)为横坐标,峰面积(A)为纵坐标,绘制工作曲线,得线性方程为A=29.12ρ-4.78,r=0.9999,表明曲克芦丁质量浓度在1～120μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。2.5加辅料回收率测定采用加样回收的方法,分别以曲克芦丁80%、100%、120%的比例,按片剂处方加辅料配制成混合物,每个浓度制备3份供试品,测定回收率。结果测得低、中、高质量浓度溶液的平均回收率分别为100.0%、99.5%、99.8%,RSD分别为0.7%、0.4%、0.6%(n=3)。2.6溶液ph的测定取曲克芦丁片的细粉适量,分别用0.1mol/LHCl、水、pH6.8磷酸盐缓冲液溶解稀释制成约1mg/mL的溶液,摇匀,置37℃恒温水浴。分别于0、30、60、90、120、150、180、210、240min时取溶液适量,滤过,取续滤液10μL,注入液相色谱仪,记录色谱图。结果主峰和其他各组分峰面积、个数均无明显变化,其中主峰面积的RSD分别为0.6%、0.9%、1.1%,表明曲克芦丁在上述3种溶出介质中稳定性良好。2.7溶解度测定2.7.1转速对溶出度的影响参考《中国药典》2010年版,片剂通常采用桨法测定。取“1.2”项下的5个厂家样品各1批(分别为A1、B1、C1、D和E),以水为溶剂,分别以转速50r/min和75r/min进行试验,45min时取样测定,考察不同转速对溶出度的影响,结果见表1。从表1可见,随着转速增加,在4批糖衣片中,有2批样品(A1、D)的溶出度有所提高,其余2批(C1、E)溶出度无明显变化且45min时包衣层亦均未崩解,片芯无法溶出。薄膜衣片(B1)在45min时均已溶出完全,所以不同转速下的溶出度结果基本一致。曲克芦丁易溶于水,包衣层的崩解决定了曲克芦丁溶出速率的快慢,为了加快包衣层的崩解,转速选择75r/min。2.7.2曲克芦丁片溶出度测定取“2.7.1”项下的5个厂家样品分别以水、0.1mol/LHCl溶液、pH6.8的磷酸盐缓冲液为溶出介质,按照《中国药典》2010年版二部附录ⅩC第二法的溶出度测定法,溶出介质为900mL,转速为75r/min,依法操作,分别在10、20、30、45、60、90、120min取样5mL,用0.45μm微孔滤膜滤过,并即时补充同温度的溶出介质5mL,取续滤液10μL,注入高效液相色谱仪,记录色谱图。另取曲克芦丁对照品适量,用流动相溶解并制成约67μg/mL的溶液,同法测定,按外标法以峰面积计算每片的溶出度。在不同溶出介质中的溶出曲线见图3。由图3可见:薄膜衣片(B1)在3种不同介质中20min时已基本溶出完全,溶出度均大于90%;糖衣片(A1、C1、D和E)由于包衣层的崩解过程影响了片芯的溶出,在前10min均有明显的溶出时滞,同时由于各个厂家包衣处方的不同导致包衣层崩解的速度也不同,从而在上述3种溶出介质中溶出曲线有较大差异。以上结果表明,不论薄膜衣片还是糖衣片,一旦包衣层崩解,样品在上述3种溶出介质中均能较好溶出,为简化试验条件,采用水为溶出介质。2.7.3样品溶出度测定以水为溶出介质,取“1.2”项下的所有样品,按“2.7.2”项下条件试验,分别在30、45min时取样测定,结果见表2。由表2可见:30min时8批糖衣片中平均溶出度大于80%的样品仅有1批,45min时则只有2批,且片间差异较大。为了提升产品质量,同时结合市售样品的实际生产情况,溶出度检查取样时间确定为45min,限度不得低于标示量的80%。3曲克芦丁片的溶出度3.1在实验条件摸索过程中发现,采用紫外分光光度法测定的溶出度结果明显高于高效液相色谱法的测定结果,差值在30%～40%。目前,国内用于生产口服制剂的曲克芦丁原料中三羟乙基芦丁的纯度较低,只有70%左右,其他组分约30%,因此在生产中以三羟乙基芦丁为指标100%投料时,其他组分对紫外测定的影响较大,而样品的紫外吸收值为各组分吸收值的总和,导致紫外测定的溶出度结果偏高。高效液相法可将主成分与各组分分开,测定结果准确可靠,因此采用了高效液相法测定曲克芦丁片的溶出度。3.2《欧洲药典》7.0版中曲克芦丁原料标准“组分测定”方法采用曲克芦丁系统适用性对照品配制的溶液作系统适用性溶液,以主峰(即曲克芦丁色谱峰)的保留时间为1,按相对保留时间为1.1的色谱峰来定位二羟乙基芦丁,用最难分离的二羟乙基芦丁色谱峰和曲克芦丁色谱峰之间的峰高峰谷比来衡量系统适用性。经液相色谱考察,按《欧洲药典》7.0版的色谱条件以相对保留时间定位,国产的曲克芦丁对照品色谱图中也含有较大的二羟乙基芦丁色谱峰。因此,本文的系统适用性溶液的配制采用了国产的曲克芦丁对照品,并且加入合成曲克芦丁的前体化合物——芦丁,增强了系统适用性试验的操作性和有效性。在本文的液相色谱条件下,芦丁、曲克芦丁和二羟乙基芦丁色谱峰三者均能达到基线分离。分别选用Inertsil、Kromas