食品中常见有毒有害物质的测定-兽药残留的测定

食品中常见有毒有害物质的测定动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测方法概述一残留危害二检测方法三前处理四检测分析五结果计算六一概述氟喹诺酮类(fluoroquinolones,FQs)药物是第三代喹诺酮类(quinolones,QNs)药物，其主要作用机制是抑制细菌的DNA螺旋酶，因其抗菌谱广、抗菌力强、组织穿透力强、不良反应少而且价格较低而被广泛的应用于人类及动物感染性疾病的预防和治疗。常见氟喹诺酮类药物举例二残留危害431265潜在的致癌性软骨损伤过敏反应肝毒性和肾毒性耐药性破坏消化道微生物的群落结构三残留检测结果计算检测分析前处理123样品前处理采样提取净化提取：1.准确移取20.0ml磷酸盐缓冲液在每份已称好的牛肉样品中。样品前处理采样提取净化提取：2.将离心管置于漩涡振荡器上，中速振荡5min。样品前处理采样提取净化提取：3.用空离心管和纯化水在托盘天平上配平，高速离心（10000r，5min）检测分析——HPLCC18250mm×4.6mm(i.d)，粒径5μm色谱柱0.05mol/L磷酸溶液/三乙胺——乙腈（82+18，v/v）流动相0.8ml/min流速室温柱温20

μl进样量结果计算氟喹诺酮类药物的残留量：X：样品中氟喹诺酮类药物的残留量（ng/g）A：样品溶液中相应药物的峰面积As：对照溶液中相应药物的峰面积Cs：对照溶液中相应药物的浓度（ng/ml）V1：提取磷酸盐缓冲液的总体积（ml）V2：过C18固相萃取柱所用备用液体体积（ml）V3：洗脱用流动相体积（ml）M：样品的质量（g）氟喹诺酮类药物残留测定方法农业部1025号公告-14-2008《动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测高效液相色谱法》喹诺酮类药物残留检测方法

概述一

常见检测方法二

高效液相色谱法（HPLC）三

液相色谱串联质谱法(LC/MS/MS)四

目录页

一、概述1.1喹诺酮类药物的分类1.2氟喹诺酮类药物的结构1.3喹诺酮类药物的性质1.4喹诺酮类药物的代谢与残留

一、概述

1.1喹诺酮类药物的分类喹诺酮类（quinolones,QNs）抗菌药是指人工合成的含有吡酮酸（1,4-二氢-4-氧吡啶-3-羧酸）基本结构的一类抗菌药物。按母环的差异可分为喹啉类、萘啶类、吡啶并嘧啶类和噌啉类；按其发展历史，目前可分为三代药物。

一、概述

1.1喹诺酮类药物的分类第一代：萘啶酸、恶喹酸和吡咯酸，由于抗菌谱窄、半衰期短、毒副作用强和细菌耐药性等原因，现已很少应用；第二代：吡哌酸和氟甲喹；第三代：沙拉沙星、单诺沙星、恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、二氟沙星、麻保沙星等氟喹诺酮类（fluoroquinolones，FQs），由于抗菌谱广、抗菌作用强，已逐渐成为该类药物的主流。

—2—

一、概述

1.2氟喹诺酮类药物的结构氟喹诺酮类药物的共同特点是喹啉环（个别为萘啶环）的C-6位上有氟原子，C-7位上连接哌嗪基或吡咯基，又称为6-氟喹诺酮类。

—2—

一、概述

1.3喹诺酮类药物的性质QNs均为白色或淡黄色晶型粉末，游离酸形式一般易溶于稀碱、稀酸溶液和冰醋酸，在pH6-8的水中溶解度最小，在多数有机溶剂中难溶或不溶。QNs在C-3位含有羧基，在C-7位连接哌嗪等含氮碱性基团，因此属酸碱两性化合物，这也是设计提取、净化和分离方法的主要依据。QNs结构中含有苯并杂环或并杂环骨架和羰基、羧基、杂原子等组成的共轭系统，在紫外区具有特征性和强的吸收；在酸性介质中具有较强的稳定荧光性质；对光照、温度和酸/碱具有较好的稳定性。

一、概述

1.3喹诺酮类药物的药理学与毒理学QNs对革兰氏阴性菌、支原体和一些革兰氏阳性菌具有强大的杀灭作用，组织渗透能力强，毒副作用低。可用于呼吸道、肠道、泌尿、皮肤和深部组织感染或败血症的治疗。

一、概述

1.3喹诺酮类药物的药理学与毒理学但QNs同时也是人类最有效的抗菌药之一，由于细菌对喹诺酮类药物耐药性的产生和某些喹诺酮类药物的潜在致癌性质，其残留问题已引起广泛关注。2003年我国的鳗鱼产品就曾因氟喹诺酮类药物残留问题出口日本受阻。包括我国在内的许多国家和地区都对喹诺酮类药物的使用范围和最大残留限量做出规定，根据不同动物品种和药物种类，MRL在30～1900g/kg之间。

一、概述

1.4喹诺酮类药物的代谢与残留QNs在动物体内分布很广，一般肝、肾组织中浓度最高，肌肉、血浆中浓度最低。QNs主要经肾和胆管排泄，故尿液或胆汁中药物浓度较高；另外QNs可以代谢进入毛发而长期存在，氟甲喹和恶喹酸可进入骨骼组织而蓄积。组织中QNs残留物主要是原形药物，一般选择原形药物作为残留标示物；但恩诺沙星的残留标示物为恩诺沙星及其主要代谢产物环丙沙星。

二、

常见测定方法微生物抑制法酶联免疫法放射免疫法HPLC法LC/MS/MS法12345

三、

高效液相色谱法（HPLC）

3.1

原理及适用范围3.2

检测流程3.3色谱条件3.4色谱图3.5方法的性能指标

三、高效液相色谱法（HPLC）

3.1原理及适用范围将均质样品以1%醋酸-乙腈溶液提取喹诺酮类药物残留，提取液用正已烷净化。用配有荧光检测器的高效液相色谱仪测定。适用于畜、禽、水产品组织中氧氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、丹诺沙星、沙拉沙星、氟甲喹的同时检测。

三、高效液相色谱法（HPLC）

3.2检测流程

三、高效液相色谱法（HPLC）

3.2检测流程

三、高效液相色谱法（HPLC）

3.2检测流程

三、高效液相色谱法（HPLC）

3.2检测流程

三、高效液相色谱法（HPLC）

3.2检测流程

三、高效液相色谱法（HPLC）

3.2检测流程

三、高效液相色谱法（HPLC）

3.3色谱条件色谱柱：4.0mm×250mm×5µm，HyprsilODS柱温：30℃；进样量：20µLA.-0.01mol/L磷酸盐/三乙胺缓冲液（80+20）（pH3.0）B-乙腈；流速：0.8ml/min

三、高效液相色谱法（HPLC）

3.3色谱条件检测波长：

三、高效液相色谱法（HPLC）

3.4色谱图

三、高效液相色谱法（HPLC）

3.5方法的性能指标６种喹诺酮类药物的测定低限(LOQ)均为15µg/kg。６种喹诺酮类药物的线性范围均为：10~50µg/kg。６种喹诺酮类药物的回收率为64%-106.3%；相对标准偏差为1.3%-9.5%。

4.1原理及适用范围4.3仪器条件4.4重构离子色谱图4.2检测流程4.5方法的性能指标四、液相色谱串联质谱法（LC/MS/MS）

四、液相色谱串联质谱法（LC/MS/MS）

4.3仪器条件液相色谱条件色谱柱：InertsilC8-3，5μm，150mm×2.1mmi.d.或相当者；流动相：0.1%甲酸的乙腈溶液+0.1%甲酸的水溶液，梯度洗脱（梯度时间表见表1）；流速：300L/min；柱温：30℃；进样量：30L。

四、液相色谱串联质谱法（LC/MS/MS）

4.3仪器条件液相色谱条件：

四、液相色谱串联质谱法（LC/MS/MS）

4.3仪器条件质谱条件：离子化模式：ESI+；质谱扫描方式：MRM；分辨率：单位分辨率；雾化气（NEB）：6.00L/min；气帘气（CUR）：12.00L/min；喷雾电压（IS）：5000V；去溶剂温度（TEM）：500℃；去溶剂气流7.00L/min；碰撞气（CAD）：6.00mL/min（氮气）。其它质谱参数见表2。

四、液相色谱串联质谱法（LC/MS/MS）

4.3仪器条件质谱条件：

四、液相色谱串联质谱法（LC/MS/MS）

4.4重构离子色谱图

四、液相色谱串联质谱法（LC/MS/MS）

4.4重构离子色谱图

四、液相色谱串联质谱法（LC/MS/MS

4.5方法的性能指标16种喹诺酮类药物残留的测定低限均为10.0g/kg。本方法的平均回收率为：鸡肉71.9%-102%、鸡肝66.4%-102%、鱼肉62.4%-89.6%、牛奶68.7%-104%，相对标准偏差为：鸡肉1.5%11.9%、鸡肝2.7%-9.1%、鱼肉1.4%-11.4%、牛奶4.1%-12.7%。

感谢指导期待合作兽药残留

兽药对食品的污染一动物性食品中的兽药残留二兽药残留对人体的危害三兽药残留检测过程四我国近年来兽药残留状况五

目录页控制动物性食品中兽药残留措施六我国兽药残留监管状况七

食物中兽药的残留

兽药用于预防和治疗兽禽疾病的药物。种类：抗生素类药、磺胺类、呋喃类、抗寄生虫药、激素类兽药残留：指给动物用药后，残存于肉、蛋、奶等动物性食品中的兽药及其代谢物。兽药残留的来源：1）使用禁药；2）不按规定执行休药期；3）超标使用药物；4）加工过程中受到污染;5）用药方法错误;6）屠宰前使用兽药.

一、兽药对食品的污染

一、兽药对食品的污染兽药残留主要包括抗生素类、合成抗菌素类、激素类、β-兴奋剂（一)兽药进入动物体的主要途径1．预防和治疗畜禽疾病用药2．饲料添加剂中兽药的使用3．食品保鲜中引入药物4、人为无意带入的污染

(二)兽药残留污染的主要原因1．不遵守休药期有关规定2．不正确使用兽药和滥用兽药，使用未经批准的药物3．饲料加工过程受到兽药污染或运送出现错误4．按错误的用药方法用药，或未做用药记录5．屠宰前使用兽药

二、动物性食品中的兽药残留

二、动物性食品中的兽药残留

兽药在动物体内的分布与残留是和兽药投入时动物的状态、给药方式和兽药种类有很大关系。兽药在食用动物中不同的器官和组织含量是不同的。

食物中常见的兽药残留1.抗生素类用途：预防和治疗动物临床疾病；残留食品中常见种类：四环素、土霉素、金霉素等。危害：生态环境、食用动物及人群中细菌的耐药性造成影响。2.磺胺类药物用途：广谱抗菌活性的化学药物；残留食品中常见种类：磺胺嘧啶、磺胺醋酰；危害：增强细菌的耐药性，人体肠道菌群失调。

食物中常见的兽药残留3.激素类药物用途：促进动物生长、提高饲料转化率残留食品中常见种类：种类较多，固醇或类固醇类、多肽或多肽衍生物等。如：盐酸克伦特罗（俗称“瘦肉精”）是一种激素类药物，在饲料中禁用。危害：激素的副作用。4.抗寄生虫类药物用途：驱除动物体内的寄生虫、促进动物生长。残留食品中常见种类：苯并咪唑类（丙硫咪唑、丙氧咪唑、噻苯咪唑、甲苯咪唑和丁苯咪唑）危害：持久残留于肝内，对动物有致畸性与致突变性

三、兽药残留对人体的危害

三、兽药残留对人体的危害(一)毒性作用人长期摄入含兽药残留的动物性食品后，药物不断在体内蓄积，当浓度达到一定量后，就会对人体产生毒性作用。如磺胺类药物可引起肾损害。

(二)过敏反应和变态反应

经常食用一些含低剂量抗菌药物残留的食品能使易感的个体出现过敏反应，这些药物包括青霉素、四环素、磺胺类药物及某些氨基糖苷类抗生素等。它们具有抗原性，刺激机体内抗体的形成，造成过敏反应，严重者可引起休克，短时间内出现血压下降、呼吸困难等严重症状。

(三)细菌耐药性

细菌耐药性是指有些细菌菌株对通常能抑制其生长繁殖的某种浓度的抗菌药物产生了耐受性。经常食用低剂量药物残留的食品可使细菌产生耐药性。动物在经常反复接触某一种抗菌药物后，其体内的敏感菌株将受到选择性的抑制，从而使耐药菌株大量繁殖。

在某些情况下，经常食用含药物残留的动物性食品，动物体内的耐药菌株可通过动物性食品传播给人体，当人体发生疾病时，就给临床上感染性疾病的治疗带来一定的困难，耐药菌株感染往往会延误正常的治疗过程。已发现长期食用低剂量的抗生素能导致金黄色葡萄球菌耐药菌株的出现，也能引起大肠杆菌耐药菌株的产生。

(四)菌群失调

在正常条件下，人体肠道内的菌群由于在多年共同进化过程中与人体能相互适应，如某些菌群能抑制其他菌群的过度繁殖，某些菌群能合成B族维生求和维生素K以供机体使用。过多应用药物会使这种平衡发生紊乱，造成一些非致病菌的死亡，使菌群的平衡失调，从而导致长期的腹泻或引起维生素的缺乏等反应，造成对人体的危害。

(五)致畸、致癌、致突变作用

在妊娠关键时期对胚胎或胎儿产生毒性作用造成先天畸形的药物质或化学药品称为致畸物。致突变作用又称诱变作用。诱变剂是指损害细胞或机体遗传成分的化学物质。另外，残留于食品中的克球酚、雌激素具有致癌作用。

(六)激素作用

人们通过食用含低剂量激素的动物性食品，不断接触和摄入动物体内的内源性激素可能干扰消费者的激素机能，比如甲状腺素、肾上腺，能引起人体内分泌系统的不正常。

四、兽药残留检测过程

选择分析对象掌握药物新陈代谢机理，明确以何种组织作为分析对象。样品预处理检测步骤筛选分析成本低廉，分析速度快定性或半定量结果确证分析检测限低，精密度和准确度较高，样品处理和分析过程较复杂定性和定量结果四、兽药残留检测过程

五、我国近年来兽药残留状况

红心鸭蛋事件多宝鱼事件瘦肉精事件五、我国近年来兽药残留状况

兽药残留案例-

红心蛋事件2006年11月,央视《每周质量报告》揭露:一些色泽鲜艳、卖相好的红心鸭蛋,含有有毒工业染料“苏丹红四号”。

兽药残留案例-多宝鱼事件2006年11月17日，上海食品药品监督管理局查出沪西水产市场销售的多宝鱼，药物残留严重超标”。

兽药残留案例-瘦肉精事件2009年2月18日起，广州发生多起疑似“瘦肉精”中毒事件，导致70人发病。瘦肉精是盐酸克伦特罗的俗称，它既不是兽药，也不是饲料添加剂，而是治疗气喘的药物。

六、控制动物性食品中兽药残留措施

六、控制动物性食品中兽药残留措施加强药物的合理使用规范严格规定休药期和制定动物性食品药物的最大残留限量加强监督检测工作合适的食品食用方式开发安全的饲料添加剂

七、我国兽药残留监管状况

《中华人民共和国食品安全法》，2009年6月1日起施行，有八大亮点。七、我国兽药残留监管状况

《食品安全法》亮点亮点一：加强了国家对食品安全工作的领导，明确了地方政府负总责的原则。亮点二：国家建立食品安全风险评估和监测制度。亮点三：制定统一的食品安全标准。亮点四：强化了食品添加剂的管理。亮点五：明星代言问题食品要负连带责任。亮点六：保健食品管理有说法。亮点七：明确食品生产经营者是第一责任人。亮点八：对食品违法行为加大了处理力度。

国务院发布中华人民共和国食品安全法实施条例，2009年7月20日起实施。

我国兽药残留监管存在问题检测能力有待提高。开发高效、快速、专属性好的检测方法。与国际标准有一定差距。制定动物性食品生产、检验、安全评价等一系列标准方法和工艺流程，缩短与国际兽药残留限量标准、检验分析方法和数据处理准则等方面的差距，以利于产品的国际贸易。

感谢指导期待合作食品中常见有毒有害物质的测定兽药残留的测定概述一兽药残留的种类二兽药残留的危害三四兽药残留检测方法五小结六兽药残留限量标准和检验一概述典型的兽药：是指用于预防和治疗畜禽疾病的药物。动物保健品或饲料添加剂，也属于兽药的范畴。兽药的主要用途：防病治病、促进生长、提高生产性能、改善动物性食品的品质等。兽药残留及来源兽药残留：是指食品动物用药后，动物性食品中含有的某种兽药的原形或其代谢物以及与兽药相关的杂质的残留。兽药残留概述兽药残留的来源：治病用药饲料中加入的添加剂动物性食品保鲜二兽药残留的种类抗生素类药物12磺胺类药物3硝基呋喃类药物5激素类药物兽药残留4抗寄生虫类药物1.抗生素类药物这类药物多为天然发酵产物，是临床应用最多的一类抗菌药物。如青霉素类、氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类、螺旋霉素、链霉素、土霉素、金霉素等。2.磺胺类药物主要用于抗菌消炎，如磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺眯、菌得清、新诺明等。近年来，磺胺类药物在动物性食品中的残留超标现象，在所有兽药当中是最严重的。3.硝基呋喃类药物主要用于抗菌消炎，如呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因等。4.抗寄生虫类药物主要用于驱虫或杀虫，如苯并咪唑、左旋咪唑、克球酚、吡喹酮等。5.激素类药物主要用于提高动物的繁殖和加快生长发育速度，使用于动物的激素有性激素和皮质激素，而以性激素最常用，如孕酮、睾酮、雌二醇等。三兽药残留的危害12345毒性作用耐药性过敏反应激素作用污染环境影响生态四兽药残留限量标准和检验兽药最高残留限量(MRLVD)是指某种兽药在食物中或食物表面产生的最高允许兽药残留量(单位μg／kg，以鲜重计)。兽药最高残留限量标准2002年农业部颁布最新《动物性食品中最高残留限量》五兽药残留的检测检测原理1常用检测方法2采样与样品制备（样品预处理）提取净化浓缩衍生化分辨检测样品处理测定分离残留分析原理兽残检测原理1气相色谱法（GC):常规分析法2高效液相色谱法（HPLC)：常规分析法，最多采用3酶联免疫法（ELISA)：选择性强、灵敏度高、简单、快速4仪器联用法（GC-MS,LC-MS,TLC-MS等)常见检测方法小结1概述2兽药残留的种类3兽药残留的危害4兽药残留限量标准和检验5兽药残留的检测兽药残留分析技术

兽药残留分析技术的特点一残留标示物的选择二兽药残留分析方法的要求三分析方法的总体思路四色谱分析技术进展五

目录页警惕残留检测发展的误区六

待测物质浓度低样品基质复杂，干扰物质多兽药残留代谢产物多样或不明动物种类多样，对药物代谢存在差异兽药残留分析技术的特点

用药后体内存在多个残留成分，则需要监控总残留物。总残留物在体内的各组分比例相对稳定，选择总残留物中1种或2种组分作为“参照物”，称为“残留标示物”。通过测定残留标示物的含量表示样品残留量和MRLs。选择残留标示物的原则

--消除慢、含量高、稳定、毒性大残留标示物的选择

快速高通量定量准确度和精确度确证法定要求质控要求兽药残留分析方法的要求

ELISALC/MS/MS准确度定量精确度法定要求确证质控要求高通量快速LCorGC兽药残留分析方法的要求

高水平(LevelⅠ)方法

--确证和定量被分析物质中等水平(LevelⅡ)方法

--定量但不需要确证被分析物质低水平(LevelⅢ)方法

--筛选分析方法的总体思路

定性定量饲料产品尿样动物组织三级方法二级方法一级方法定性为主定量为主定性为辅GC/MSLC/MSLC/MS/MSGC/MS/MSGCHPLC“筛选”到“确证”的方法体系

用于残留分析的样本制备技术样品的前处理技术残留检测方法的选择兽药残留分析技术

可食性组织及产品

肝、肾、肌肉、脂肪、皮肤、血液奶、蛋其他加工食品其他

--毛发、尿、粪便等样本的范围

取样方法

代表性原则、随机采样

各种标准规定活体检测

一般采集毛发、血液、尿液和粪便屠宰场取样

药物的靶组织

其他高浓度的样本：肝、肾、胆汁、注射部位

排泄物：尿液样本的收集

容器材料

一般为玻璃或塑料预处理

匀化、缩分、过筛、离心、过滤、防腐、抑制降解等贮存温度要求样本的贮存

提取方法

组织捣碎法

振荡法净化方法

液—液萃取

液—固萃取浓缩与富集

旋转蒸发器浓缩

气流吹蒸法：氮气、空气样品前处理技术

提取化合物特性基质组成提取剂选择沉淀剂选择设计顺序效率试验配比试验干扰试验影响净化样品的前处理技术——提取

净化液液萃取SPE纯化相似相溶小柱选择效率试验配比试验上样洗涤洗脱样品的前处理技术——净化浓缩富集

快速筛选方法

--酶免疫测定(EIA)--ELISA--放射免疫测定法(RIA)

--金标试纸条(Dipstick)--生物传感器

--微生物抑制测定法：抗菌药

--TLC残留检测方法简介

化学定量方法

--气相色谱法（GC）

--高效液相色谱法（HPLC）

--原子荧光(AF)--原子吸收(AA)残留检测方法简介

仪器确证方法

--HPLC-PDA--GC-MS--GC-MS-MS--HPLC-MS

--LC-MS-MS残留检测方法简介

SPE的应用与自动化膜分离技术免疫亲和色谱(IAC)凝胶渗透色谱（GPC）分子印迹技术其他技术（自动索氏提取法、超声波辅助提取、超临界流体萃取、强化溶剂萃取、微波辅助萃取、加速溶剂萃取法）样品处理技术进展