无机及分析化学(第三版)第12章课件

第12章吸光光度法12.1概述12.2吸光光度法基本原理12.3分光光度计12.4显色反应及影响因素12.5光度分析法的设计12.6吸光光度法的误差12.7常用的吸光光度法12.8吸光光度法的应用第12章吸光光度法12.1概述吸光光度法：分子光谱分析法的一种，又称分光光度法(spectrophotometry)，属于分子吸收光谱分析方法基于外层电子跃迁12.1概述吸收光谱发射光谱散射光谱分子光谱原子光谱吸光光度法：分子光谱分析法的一种，又称分光光度法(spect12.2吸光光度法基本原理1吸收光谱产生的原因光:一种电磁波,波粒二象性

光谱名称波长范围X射线0.1~10nm远紫外光10~200nm近紫外光200~400nm可见光400~750nm近红外光0.75~2.5um中红外光2.5~5.0um远红外光5.0~1000um微波0.1~100cm无线电波1～1000m当光子的能量与分子的

E匹配时，就会吸收光子

E=hu=hc/l12.2吸光光度法基本原理1吸收光谱产生的原因光谱名称波a跃迁类型

价电子跃迁：σ→σ*,π→π*;n→σ*,n→π*

E(h

)顺序:n→π*<π→π*<n→σ*<σ→σ*

有机化合物的生色原理b生色团（chromophore)和助色团(auxochrome)

生色团:含有π→π*跃迁的不饱和基团助色团:含非键电子的杂原子基团,如-NH2,-OH,-CH3…

与生色团相连时，会使吸收峰红移(bathochromicshift)，吸收强度增强a跃迁类型有机化合物的生色原理b生色团（chromoph物质的颜色吸收光颜色波长范围(l,nm)黄绿黄橙红紫红紫蓝绿蓝蓝绿紫蓝绿蓝蓝绿绿黄绿黄橙红400-450450-480480-490490-500500-560560-580580-600600-650650-7502物质颜色和其吸收光关系互补色物质的颜色吸收光颜色波长范围(l,nm)黄绿紫400-吸收光谱曲线：物质在不同波长下吸收光的强度大小

A～l关系最大吸收波长lmax：光吸收最大处的波长3一些基本名词和概念lmax对比度(Δl):络合物最大吸收波长(lMRmax)与试剂最大吸收波(lRmax)之差Δl吸收光谱曲线：物质在不同波长下吸收光的强度大小3一些基本名原子光谱为线光谱分子光谱为带光谱电子跃迁能级分子振动能级分子转动能级原子光谱为线光谱电子跃迁能级4朗伯-比尔定律光吸收定律－朗伯-比尔(Lambert-Beer)定律吸光光度法的理论依据，研究光吸收的最基本定律I0=Ir+It+IaI0=It+IaI0IrItIa

T=It/I0,T:透射比或透光度

A=lg(I0/It)＝lg(1/T),A:吸光度朗伯定律：光吸收与溶液层厚度成正比比尔定律：光吸收与溶液浓度成正比4朗伯-比尔定律光吸收定律－朗伯-比尔(Lambert-B朗伯-比尔定律数学推导朗伯定律的数学表达式可以改写为：朗伯-比尔定律数学推导朗伯定律的数学表达式可以改写为：朗伯-比尔定律数学推导朗伯-比尔定律数学推导朗伯-比尔定律数学推导将合并得：

吸光度(absorbance)、透光率、百分透光率间的关系有：T=It/I0,T%=T×100，A=-lgT=2-lgT%朗伯-比尔定律数学推导将当一束平行单色光垂直照射到样品溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度及光程（溶液的厚度）成正比关系－－－朗伯比尔定律－－－光吸收定律数学表达：A＝lg(1/T)=Kbc其中，A:吸光度，T:透射比(transmitance)，K:比例常数，b:溶液厚度，c:溶液浓度注意：平行单色光均相介质无发射、散射或光化学反应当一束平行单色光垂直照射到样品溶液时，溶液的吸光摩尔吸光系数e灵敏度表示方法A=e

bcA=Kbcc:mol/Le

表示物质的浓度为1mol/L,液层厚度为1cm时溶液的吸光度。单位：

(L•mol-1•cm-1)c:g/LA=abca:吸光系数摩尔吸光系数e灵敏度表示方法A=ebcA=Kbc桑德尔(sandell)灵敏度：S当仪器检测吸光度为0.001时，单位截面积光程内所能检测到的吸光物质的最低含量。单位：mg/cm2

S=M/e

推导：根据定义0.001＝εbc故bc＝0.001/ε（1）c为浓度，单位为mol/1000cm3,b为cm,bc表示单位截面积光程内的摩尔数，即mol/1000cm2，如果bc乘以被测物质的分子量M,则得单位截面积光程内被测物质的量，即桑德尔灵敏度S。S=（bc/1000）×M×106=bcM×103（μg·cm-2），将（1）的bc＝0.001/ε代入，S＝(0.001/ε)×M×103，得：S=M/ε桑德尔(sandell)灵敏度：S推导：根据定义0.001氯磺酚S测定钢中的铌50ml容量瓶中有Nb30μg，用2cm比色池，在650nm测定光吸收，A＝0.43,求S.(Nb原子量92.91)。有两种做法：根据A=εbC,求ε＝3.3×104L·mol-1·cm-1

氯磺酚S测定钢中的铌＝3.3×104L·mol-1·cm吸光度的加和性A1=e1bc1A2=e2bc2A=e1bc1+e2bc2

根据吸光度的加和性可以进行多组分的测定以及某些化学反应平衡常数的测定在某一波长，溶液中含有对该波长的光产生吸收的多种物质，那么溶液的总吸光度等于溶液中各个吸光物质的吸光度之和吸光度的加和性A1=e1bc1根据吸光度的加和性可以进行练习题：1.在510nm波长处，2cm比色皿，测定0.0010％某一有色络合物溶液，测得透光率T为0.420，已知ε＝2.50×103L·mol-1·cm-1，试求该有色络合物的摩尔质量。练习题：1.在510nm波长处，2cm比色皿，测定0.001练习题：2.称取钢样0.500g，溶解后，转入100ml容量瓶中，定容。取出10.0ml试液于烧杯中，将其中的Mn2+氧化为MnO4-后，转入50ml容量瓶中，定容，摇匀，用2cm比色皿于525nm测量吸光度为0.50，求钢样中Mn的质量分数。已知：MMn=54.94,ε525＝2300L·mol-1·cm-1

练习题：2.称取钢样0.500g，溶解后，转入100ml容量1.解：已知T为0.420，根据A=－lgT计算吸光度

A=－lg0.420=0.377根据A=εbc计算有色络合物溶液浓度c=A/(εb)=0.377/(2.5×103×2)＝7.54×10-5(mol/L)根据有色络合物溶液0.0010％浓度，一升该有色络合物溶液中有色络合物质量为1000×0.0010％＝1.00×10-2（g）有色络合物摩尔质量为M＝m/c=(1.00×-2)/(7.54×10-5)＝132.6（g/mol）

1.解：已知T为0.420，根据A=－lgT计算吸光度2.解：(1)求50ml有色溶液中MnO4-的浓度，已知，b=2cm，A=0.50，ε525＝2300，根据A=εbc，c1=A/(bε)=0.50/(2×2300)＝1.1×10-4（mol/L）(2)求100ml试液中Mn2+的浓度c＝c1×50/10.0＝1.1×10-4×5＝5.5×10-4（mol/L）（3）求100ml试液中Mn的质量m=cVM=5.5×10-4×100×10-3×54.94＝3.0×10-3（g）(4）

钢样中锰的含量wMn=m/ms×100%=(3.0×10-3)/0.500×100％＝0.60％2.解：(1)求50ml有色溶液中MnO4-的浓度，已知，1分光光度计的组成光源单色器样品池检测器读出系统12.3分光光度计1分光光度计的组成光源单色器样品池检测器读出系统12.3常用光源光源波长范围(nm)适用于氢灯185~375紫外氘灯185~400紫外钨灯320~2500可见，近红外卤钨灯250~2000紫外，可见，近红外氙灯180~1000紫外、可见（荧光）能斯特灯1000~3500红外空心阴极灯特有原子光谱激光光源特有各种谱学手段常用光源光源波长范围(nm)适用于氢灯185~375紫外氘灯单色器作用:产生单色光常用的单色器：棱镜和光栅样品池（比色皿）

厚度(光程):0.5,1,2,3,5…cm

材质：玻璃比色皿－－可见光区石英比色皿－－可见、紫外光区单色器样品池（比色皿）检测器

作用：接收透射光，并将光信号转化为电信号常用检测器：光电管光电倍增管光二极管阵列光电管分为红敏和紫敏，阴极表面涂银和氧化铯为红敏，适用625－1000nm波长；阴极表面涂锑和铯为紫敏，适用200－625nm波长检测器光电管分为红敏和紫敏，阴极表面涂银和氧化铯为红敏，适用目视比色法—比色管光电比色法—光电比色计

光源、滤光片、比色池、硒光电池、检流计分光光度法与分光光度计722型分光光度计光学系统图1.光源；2.滤光片；3,8聚光镜4,7.狭缝；5.准直镜；6.光栅9.比色池；10.光电管目视比色法—比色管光电比色法—光电比色计分光光度法与分光光12.4显色反应及影响因素要求：a.选择性好b.灵敏度高(ε>104)c.产物的化学组成稳定d.化学性质稳定e.反应和产物有明显的颜色差别(

l>60nm)没有颜色的化合物，需要通过适当的反应定量生成有色化合物再测定－－显色反应1显色反应12.4显色反应及影响因素要求：没有颜色的化合物，需要通过络合反应氧化还原反应2显色反应类型络合反应氧化还原反应2显色反应类型离子缔合反应成盐反应离子缔合反应成盐反应褪色反应

Zr(IV)-偶氮胂III络合物测定草酸吸附显色反应

达旦黄测定Mg(II),Mg(OH)2吸附达旦黄呈红色褪色反应吸附显色反应3显色剂无机显色剂:过氧化氢，硫氰酸铵，碘化钾有机显色剂：偶氮类：偶氮胂III3显色剂无机显色剂:有机显色剂：三苯甲烷类三苯甲烷酸性染料铬天菁S三苯甲烷碱性染料结晶紫三苯甲烷类三苯甲烷碱性染料结晶紫邻菲罗啉类：新亚铜灵肟类：丁二肟邻菲罗啉类：新亚铜灵肟类：丁二肟4多元络合物混配化合物Nb-5-Br-PADAP-酒石酸V-PAR-H2O离子缔合物

AuCl4--罗丹明B金属离子-配体-表面活性剂体系Mo-水杨基荧光酮-CTMAB4多元络合物混配化合物5影响因素a溶液酸度（pH值及缓冲溶液）影响显色剂的平衡浓度及颜色，改变Δl影响待测离子的存在状态，防止沉淀影响络合物组成形式pHλmax(nm)形式pHλmax(nm)H4L+1.2462-465Sn4+1.0530H3L4.8-5.2462,490Ga3+5.0550H2L-8.4-9.0512HL2-11.4-12.0532-538pH对苯芴酮及其络合物的颜色影响5影响因素a溶液酸度（pH值及缓冲溶液）形式b显色剂的用量稍过量，处于平台区c显色反应时间针对不同显色反应确定显示时间显色反应快且稳定；显色反应快但不稳定；显色反应慢，稳定需时间；显色反应慢但不稳定d显色反应温度加热可加快反应速度，导致显色剂或产物分解b显色剂的用量稍过量，处于平台区c显色反应时间针对不同e溶剂f干扰离子有机溶剂，提高灵敏度、显色反应速率消除办法：提高酸度，加入隐蔽剂，改变价态选择合适参比

褪色空白(铬天菁S测Al，氟化铵褪色，消除锆、镍、钴干扰)选择适当波长e溶剂f干扰离子有机溶剂，提高灵敏度、显色反应速率消除12.5光度分析法的设计1.选择显色反应2.选择显色剂3.优化显色反应条件4.选择检测波长5.选择合适的浓度6.选择参比溶液7.建立标准曲线测量条件选择12.5光度分析法的设计1.选择显色反应测量条件选择1测定波长选择选择原则：“吸收最大，干扰最小”灵敏度选择性1测定波长选择选择原则：“吸收最大，干扰最小”灵敏度选择性2测定浓度控制控制浓度吸光度A：0.2～0.8减少测量误差2测定浓度控制控制浓度吸光度A：0.2～0.8减少3参比溶液选择仪器调零消除吸收池壁和溶液对入射光的反射扣除干扰试剂空白试样空白褪色空白3参比溶液选择仪器调零试剂空白4标准曲线制作理论基础：朗伯-比尔定律相同条件下测定不同浓度标准溶液的吸光度AA～c作图4标准曲线制作理论基础：朗伯-比尔定律相同条件下12.6吸光光度法的误差非单色光引起的偏移物理化学因素：非均匀介质及化学反应吸光度测量的误差

对朗伯-比尔定律的偏移12.6吸光光度法的误差非单色光引起的偏移对朗伯-比尔定律显色反应体系中的副反应影响M+nL=MLn显色反应*其它离子可能与显色剂反应：M´+nL=M´Ln,消耗显色剂；*L受酸效应影响，有L-、HL+等形态存在；被测离子有络合效应。表观稳定常数：显色反应体系中的副反应影响M+nL=MLn显色通常被测离子有99％以上络合时，可以认为反应完全，此时这个式子可以判断不同条件下显色反应的完全程度通常被测离子有99％以上络合时，可以认为反应完全，此时这个式1非单色光引起的偏移复合光由l1和l2组成，对于浓度不同的溶液a和b,引起的吸光度的偏差不一样，浓度大，复合光引起的误差大，故在高浓度时线性关系向下弯曲。1非单色光引起的偏移复合光由l1和l2组成，对于浓度不同的*其它光学方面的干扰

杂散光散射光反射光非平行光*被测物质溶液本身的化学、物理性质引起偏离朗伯比尔定律介质不均匀（胶体，悬浮、乳浊）；物质在溶液中发生化学反应（离解、缔合、异构等），重铬酸钾＝铬酸钾，Cr2O72-+H2O-=2HCrO4-=2H++2CrO42-；再如PAR的偶氮－醌腙式次甲基兰的单体－λmax660nm,二聚体λmax610nm*其它光学方面的干扰非均匀介质

胶体，悬浮、乳浊等对光产生散射，使实测吸光度增加，导致线性关系上弯2物理化学因素离解、缔合、异构等如：Cr2O72-+H2O-=2HCrO4-=2H++2CrO42-PAR的偶氮－醌腙式化学反应非均匀介质2物理化学因素离解、缔合、异构等化学反应吸光度标尺刻度不均匀3吸光度测量的误差A＝0.434

，T＝36.8%时，测量的相对误差最小A=0.2~0.8,T=15~65%，相对误差<4%

dc/c=dA/A=dT/TlnTEr=dc/c×100％=dA/A×100％=dT/TlnT×100％吸光度标尺刻度不均匀3吸光度测量的误差A＝0.434，T令ST=0.01,计算T不同值时的Sc/c，当TlnT对T进行微分时，其值为零时，Sc/c最小，此时T=0.368。令ST=0.01,计算T不同值时的Sc/c，当TlnT对T进无机及分析化学(第三版)第12章课件1.示差吸光光度法目的：提高光度分析的准确度和精密度解决高(低)浓度组分(i.e.A在0.2~0.8以外)问题分类：高吸光度差示法、低吸光度差示法、 精密差示吸光度法特点：以标准溶液作空白原理：A相对=

A=bcx-bc0=bc准确度：读数标尺扩展,相对误差减少,

c0愈接近cx,准确度提高愈显著12.7常用的吸光光度法1.示差吸光光度法12.7常用的吸光光度法例：硫脲还原－硫氰酸盐比色法测定钢铁中的钼。酸溶，硫酸－高氯酸介质中，硫脲还原铁（III）为铁(II),除干扰，还原钼（VI）为五价，2.00mg/100ml的钼标准溶液为参比溶液，用2.00-2.30mg/100ml的钼标准溶液，绘制工作曲线和测定样品溶液的吸光度,480nm测定A。例：硫脲还原－硫氰酸盐比色法测定钢铁中的钼。酸溶，硫酸－高氯2.双波长分光光度法(计算分光光度法）*光度加和性，溶液的总吸光度应等于各吸光物质的吸光度之和。A总=A1+A2+A3+……An.对多组分混合物的分别测定须解联立方程,有联立方程法Aλ1=ελ1bc1+ελ1bc2Aλ2=ελ2bc2+ελ2bc1定量分析2.双波长分光光度法(计算分光光度法）*光度加和性，溶液的例如测定呋喃唑酮和小檗碱复方片剂中这两种物质的含量1cm池，分别在365、342nm波长处测定吸光度（A1和A2),按下式计算两组分：Cx=A1/α1[(b-m)/(b-a)]Cy=A2/β2[b(m-a)/m(b-a)]Cx和Cy分别为呋喃唑酮和小檗碱的浓度；α1和α2分别为呋喃唑酮在365和342nm波长处的吸收系数（E）；β1和β2分别为硫酸小檗碱在365和342nm波长处的吸收系数（E）.m=A2/A1,a=α2/α1;b=β2/β1根据吸光度加和性得：A1=α1Cx+β1Cy(1);A2=α2Cx+β2Cy(2)m=A2/A1,a=α2/α1;b=β2/β1代入（2）得：例如测定呋喃唑酮和小檗碱复方片剂中这两种物质的含量1cm池，ma1=aα1Cx+bβ1Cy(3)(1)代入（3）得Cx=A1/α1[(b-m)/(b-a)]同理得到Cy=A2/β2[b(m-a)/m(b-a)]ma1=aα1Cx+bβ1Cy(3)2.双波长吸光光度法目的：解决浑浊样品光度分析消除背景吸收的干扰多组分同时检测原理：

A=Al1-Al2=（

l1-

l2）bc波长对的选择：a.等吸光度点法，b.系数倍率法3.导数吸光光度法2.双波长吸光光度法3.导数吸光光度法选l1为参比波长,l2为测量波长得Al1=

xl1bcx+

yl1bcyAl2=

xl2bcx+

yl2bcyΔA=Al2-Al1=(

xλ2bcx+

yl2bcy)-(

xl1bcx+

yl1bcy)在等吸光度的位置(G,F),

yl2＝

yl1，则上式成为

ΔA=(

xl2-

xl1）bcxΔA与cx成正比,可用于测定例,苯酚与2,4,6-三氯苯酚(y)混合物中苯酚(x)的双波长分光光度法测定。选l1为参比波长,l2为测量波长例,苯酚与2,4,6-三氯3.导数吸光光度法目的：提高分辨率去除背景干扰

原理：dnA/dln~l

3.导数吸光光度法目的：提高分辨率12.8吸光光度法的应用1测定弱酸和弱碱的离解常数

AHB和AB-分别为有机弱酸HB在强酸和强碱性时的吸光度，它们此时分别全部以[HB]或[B-]形式存在。HB＝H++B-[H+][B-]Ka

=[HB]pKa=pH+lg

[HB][B-]A=AHB+AB-pKa=pH+lg

AB--AA-AHBlg

AB--AA-AHB对pH作图即可求得pKa

12.8吸光光度法的应用1测定弱酸和弱碱的离解常数AH2络合物组成确定

饱和法（摩尔比法）制备一系列含钌3.0×10-5mol/L(固定不变)和不同浓度（小于12.0×10-5mol/L）的PDT溶液，按实验条件，485nm测定吸光度,作图。PDT:Ru=2:12络合物组成确定饱和法（摩尔比法）制备一系列含钌3.0×等摩尔连续变化法固定[M]+[L],改变[M],获得一系列吸光度值，吸光度最大的值所对应的[M]与[L]的比值，即获得M:L比值。Co(III)与3，5－二氯－PADAT的比值为1:2等摩尔连续变化法固定[M]+[L],改变[M],获得一系列吸平衡移动法固定[M],不断改变[L]，以lg[MLn]/[M]为纵坐标，lg[L]为横坐标，作图，斜率n即是络合物中L:M的比值；纵轴上的截距lgK是络合物的稳定常数。lgK+nlg[L]=lg([MLn]/[M])[MLn]K

=[M][L]nlgK+nlg[L]=lgA/(Amax-A)平衡移动法固定[M],不断改变[L]，以lg[MLn]/[Mc.平衡移动法（对数作图法）M+nL＝MLn固定[M],不断改变[L]，并以lg[MLn]/[M]为纵坐标，lg[L]为横坐标，（10）式为一直线方程，斜率n即是络合物中L:M的比值；纵轴上的截距lgK是络合物的稳定常数。c.平衡移动法（对数作图法）M+nL＝MLn固定[M],上式中，[M],[L]和[MLn]为平衡时各组分的摩尔浓度，[L]浓度由实验可知，由加入的L的总浓度减去形成络合物消耗的L浓度之差计算，一般形成络合物消耗的L与L总浓度相比不大，可忽略。[MLn]可由测得吸光度Ax计算，[M]可由Amax-Ax求得，上式变为：上式中，[M],[L]和[MLn]为平衡时各组分的摩尔浓度，Vx是由试剂L溶液某次所取的体积。[L]o是试剂原始浓度，VMK是实验时的容量瓶体积，故q为一常数。可以看出，由每次加入的试剂体积，并以lg[MLn]/[M]为纵坐标，lgVx为横坐标作图，斜率n表达了络合物的组成。Vx是由试剂L溶液某次所取的体积。[L]o是试剂原始浓度，V3分析应用

痕量金属分析临床分析食品分析3分析应用痕量金属分析1.血清总蛋白、清蛋白、及球蛋白测定－盐析双缩脲法540nm检测

蛋白质肽链540nm检测1.血清总蛋白、清蛋白、及球蛋白测定－盐析双缩脲法54血清中清蛋白几乎由肝细胞合成，含量变化反映肝脏和免疫系统疾病正常：总蛋白6-8g/dL；清蛋白：3.5-5g/dL;球蛋白1.5-3.0/dL。总蛋白高严重腹泻，呕吐，发烧；总蛋白低营养不良球蛋白增加：炎征；结核病；麻风；疟疾；多发生骨髓瘤清蛋白减低：肝、肾疾病；肝炎，肝功能衰竭、肾炎血清中清蛋白几乎由肝细胞合成，含量变化反映肝脏和免疫系统疾病2.血清转氨酶测定

丙氨酸

α－酮戊二酸

丙酮酸

谷氨酸

2.血清转氨酶测定丙氨酸α－酮戊二酸3.血清转氨酶测定

丙酮酸2，4-二硝基苯腙（红棕色，500nm）正常：40单位以下谷丙氨转氨酶以肝细胞中最多，心肌细胞中也较多，只有少量进入血液中，若血清中该酶含量高，肝有病或不正常3.血清转氨酶测定4.血清乳酸脱氢酶(LDH)测定

乳酸辅酶I丙酮酸还原性辅酶440nm检测4.血清乳酸脱氢酶(LDH)测定乳酸正常：血清，225-540单位；脑脊液，20-55单位乳酸脱氢酶广泛存在，肝、心肌、肾脏、胰腺、肺和骨骼肌最多。如果这些组织有病，血液中该酶偏高正常：血清，225-540单位；脑脊液，20-55单位5.血清碱性磷酸酶（AKP）测定

AKP在碱性环境下，作用于磷酸苯二钠，使之水解释出酚和磷酸，酚在碱性溶液中与4-氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化成红色与标准酚比较，测定AKP5.血清碱性磷酸酶（AKP）测定AKP在碱性环境下，作用于AKP存在各组织，肾脏、肝脏、牙齿和骨骼中较多，血液中如果该酶增高，说明肝胆系统有问题，如骨炎肝炎、肝癌；减低，肾炎贫血

有色化合物在520nm测定AKP存在各组织，肾脏、肝脏、牙齿和骨骼中较多，血液中如果该6.邻甲苯胺法测定血糖在热乙酸溶液中，葡萄糖与邻甲苯胺缩合生成蓝色(620nm)的schiff碱

正常：70-100mg/dl降低：肿瘤，腺垂体机能减退6.邻甲苯胺法测定血糖正常：70-100mg/dl7.血清γ-谷氨酰转肽酶（γ-GTP）测定

γ-L-谷氨酰-α-萘胺

γ-L-谷氨酰γ-L-谷氨酰-α-萘胺肽

7.血清γ-谷氨酰转肽酶（γ-GTP）测定γ-L-谷氨酰-正常：40单位以下。临床意义：此酶主要来自肝脏，肝胆系统疾病酶活力高，明显增高见于肝癌、阻塞性黄疸、胰头癌、胰腺炎、传染性肝炎、胆道癌等，食酒和长期服用苯巴比妥等

520nm正常：40单位以下。520nm8.血脂（甘油三酯）测定

1.甘油三酯皂化

8.血脂（甘油三酯）测定1.甘油三酯皂化2.甘油氧化

2.甘油氧化3.甲醛、乙酰丙酮和氨水缩合反应生成3，5-二乙酰-2，6-二甲基吡啶（棕色，420nm）

正常：30-150mg/dL.3.甲醛、乙酰丙酮和氨水缩合反应生成3，5-二乙酰-2，6-在510nm波长处，2cm比色皿，测定0.0010％（w/v）某一有色络合物溶液，测得透光率T为0.420，已知ε＝2.50×103L·mol-1·cm-1，试求该有色络合物的摩尔质量。

例题解：已知T为0.420，根据A=－lgT计算吸光度A=－lg0.420=0.377根据A=εbc计算有色络合物溶液浓度c=A/εb=0.377/(2.5×103×2)＝7.54×10-5(mol/L)根据有色络合物溶液0.0010％浓度，一升该有色络合物溶液中有色络合物质量为1000×0.0010％＝1.00×10-2（g）有色络合物摩尔质量为M＝m/c=(1.00×-2)/(7.54×10-5)＝132.6（g/mol）

在510nm波长处，2cm比色皿，测定0.0010％（w/v1.用双环己酮测定浓度为25.0微克/25ml的Cu2+溶液，波长600nm,吸收池2cm,测得T%=50.1，求摩尔吸光系数ε和桑德尔灵敏度S。

例题解：用百分透光率计算溶液吸光度A＝-lgT=-lg0.501＝0.300求Cu2+溶液浓度，c=(25.0×10-6×103)/25＝1.00×10-3（g·L-1）根据公式A=εbc求ε，ε＝A/bc=0.300/(2×1.00×10-3/63.55)=9600（L·mol-1·cm-1）S=M/ε=63.55/9600＝6.62×10-3（μg·cm-2）1.用双环己酮测定浓度为25.0微克/25ml的Cu2+溶液2.某钢含镍约0.12％，用丁二酮肟光度法测定。试样溶液转入100ml容量瓶中，在适宜条件下显色，定容，1cm比色皿，在470nm测定，要求测量误差最小，应该称取试样多少克？ε＝1.3×104（L·mol-1·cm-1），MNi=58.69解：根据光度测量误差公式可知：当吸光度A＝0.434时，误差最小，已知b=1,ε＝1.3×104，根据A=εbcc=A/εb＝0.434/（1.3×104×1）＝3.34×10-5(mol/L)100ml有色溶液中Ni的含量为m=cVM＝3.34×10-5×100×10-3×58.69＝1.96×10-4(g)已知某钢含镍约0.12％，则应称取试样质量为：(1.96×10-4/ms)×100=0.12ms=0.16g2.某钢含镍约0.12％，用丁二酮肟光度法测定。试3.用卟啉类显色剂光度法测定Cu2+，ε＝2.00×105L·mol-1·cm-1。试液中Cu2+浓度在5.0×10-7～5.0×10-6mol/L范围内，使用1cm比色皿进行测定，吸光度和透光率的范围如何？若光度计的透光率读数误差ΔT为0.005，可能引起的浓度测量相对误差为多少？解：已知ε＝2.00×10