大白鼠心肌缺血模型的制备及评价

大白鼠心肌缺血模型的制备及评价

动脉左前降支是左心供血的主要血管。如果血管阻塞，可能会导致室间隔和左室前壁坏死。左前降支连接动脉左后节是心脏病变形成最好的血管。因为老鼠在进化方面接近人类，价格低、饲养方便。冠状动脉侧支循环少，心肌坏死快，心率异常，发病率高，重复性好、稳定性好，成为心脏肌腱缺血模型的首选。然而，对大鼠解剖的研究信息很少，实验过程复杂，耗时长，成功率低。如果方法不当，很容易死亡，也无法达到预期的实验目的。因此，我们研究了模型的准备，观察了模型前后心电图的变化，并对准备过程中的相关问题进行了评估。1药品及器械1.1动物及分组SD大鼠60只,体重200～250g,由成都中医药大学实验动物研究中心提供,动物质量合格证号:川实动质第11号.雌雄不拘.2.药品及器械:20%乌拉坦,即时配制,生理盐水,SC—3型人工电动呼吸机(上海医疗器械四厂产品),CardimaxFX——101B心电图仪(日本琴岛福田公司产品),眼科手术剪,弯头无齿镊,小持针器,自制小拉构,小圆弯针,三角直针,0号缝线.2呼吸频率及呼吸参数控制以20%乌拉坦按0.5ml/100g腹腔注射.颈部去毛,作正中纵向切口约1cm长,顿性分离皮下喉部肌肉,暴露气管,横向切开气管插管接呼吸机,按1～1.5ml/100g潮气量,70～80次/分的频率给予呼气末持续正压呼吸,呼吸比为2:1,根据呼吸频率及深度调整呼吸参数.胸部去毛,正中线左边约0.5cm处作约2cm长的纵向切口,钝性分离胸大肌,暴露肋骨,用止血棉完全止血.小心剪断3-5肋,安放小拉钩牵拉胸壁,使心脏(主要是心底部)得到充分暴露.用小圆弯镊剥脱心包,使左心耳与动脉圆锥之间的静脉清晰可见,以此为标志进行结扎.结扎完毕逐层缝合胸壁之前,置入一根小塑料管,待胸壁关闭之后抽气恢复胸腔内负压.待稳定一段时间后拔出气管导管,可恢复自主呼吸.四肢皮下插入针形电极,记录I,II,III导联心电图,观察手术前后的心电图变化.3对大鼠急性心肌缺血模型的评价3.1大鼠急性心肌缺血模型成功的因素大鼠心肌缺血模型制备需要气管插管、呼吸机给氧.结扎冠状动脉在胸腔内进行,视野小,心脏不好固定,结扎冠状动脉时很难把握进针位置及深度.并且由于损伤较严重、出血多、耗时长,许多模型由于气管插管、失血多及操作不善即造成大鼠死亡,从而影响造模成功率.为了保证大鼠急性心肌缺血模型的成功,需要注意下面几个环节:3.1.1麻醉大鼠操作要点传统的麻醉药多采用戊巴比妥钠,因其呼吸抑制作用明显,手术后宜引起大鼠呼吸衰竭而死亡,并且对心脏有一定抑制作用,特别是当静脉注射快时,可加快心率,使S-T段移位,T波倒置.乙醚有安全度大,苏醒快的优点,但乙醚麻醉往往呼吸道分泌物较多,容易引起呼吸道阻塞和窒息.乌拉坦和水合氯醛麻醉对呼吸抑制较少,对心脏毒性小,且安全范围广,剂量易掌握.因此在我们的实验中采用乌拉坦或水合氯醛进行麻醉,大鼠麻醉后心律失常发生率不高,且大鼠术后苏醒快,呼吸道分泌物少,减少麻醉意外,死亡率低.为了避免麻醉引起的死亡现象,在操作上需要注意下面几点:①每一只动物均严格称重,精确计算麻醉药量.对衰弱和过重动物,将单位体重所需剂量适当调小.②动物在麻醉期间予以保温,一般使用40w灯泡照射.②因各种原因将部分麻醉药注射到大鼠体外的,不应补量再注射,改换其他大鼠麻醉.④尽量做到麻醉药现用现配,或配少量短期内使用,防止日久变质.3.1.2急性肺水肿的发病率开胸后的手术步骤多数文献报道是:将心脏挤出胸腔,翻开左心耳,结扎冠脉主干.挤出心脏容易导致心脏与大血管牵扯挤压,增加严重心律失常、急性肺水肿的发病率.本实验采用拉钩法暴露心脏,有操作容易,暴露充分,损伤小的优点.另外开胸时最易伤及充气的肺组织,因此应在短时间内将潮气量调小,从而使手术伤及肺的机率大为减少.大鼠右肺四叶,左肺一叶,呈海绵状,尤其左肺,有时将心脏大部分覆盖.因而结扎冠脉时需拉开肺组织,稍有不慎,手术器械或拉钩就可能损伤肺.使用棉球或纱布将肺组织推开,拉钩亦用纱布缠起,避免硬物接触肺,可以大大降低肺的损伤.3.1.3不同的静脉入路,选择合适的左冠状静脉东南角小如何准确结扎冠脉是本模型最为关键的地方.结扎部位离冠状动脉起源处愈远,所结扎的血管愈细,肉眼难分辨,手术操作因难,造成心肌缺血损伤面积较小,但能降低实验动物的死亡率.本研究参照有关文献,以左冠状静脉主干为标志,选择左心耳下缘1.5mm处进针,在肺动脉圆锥旁出针,使操作简便易行,并且结扎成功率高,动物死亡率低.3.1.4开腹前后主动脉穿线时间的选择大鼠急性心肌缺血模型,造模死亡率在30%左右,为提高模型成功率,在开胸后,冠脉穿线前,最好留一段时间以平衡手术创伤,这段时间以5～15分钟之间为宜,外文文献通过统计得出,留平衡时间,可以显著增加鼠存活的几率,冠脉穿线与结扎之间也宜留5分钟左右平衡期.3.2心律失常标志冠脉结扎后,血压一过性下降,心率先略增快,后随时间延长渐减慢.心电图表现主要有S—T段拾高,并渐与QRS波融合,QRS波增宽、增高、心律失常等.QRS波幅随着时间的延长可逐渐变小,心律失常以一过