天然药物化学成分的分离精制和鉴定的方法与技术

吸附柱色谱法

原理、装柱、分离样品（一）柱色谱分离特点•利用欲分离的混合物中各组分分配在固定相和洗脱剂之间，被吸附的性质不同，而相互得以分离。•化合物被吸附作用越强，该化合物溶解在洗脱剂中越少，沿洗脱剂移动的距离则越小。反之，越多。（二）吸附柱色谱分离原理柱色谱分离与薄层色谱类似，是靠洗脱剂把分离的各组分逐个洗脱下来的过程，故也称洗脱色谱。由于色谱柱填充的吸附剂的量远远大于薄层板，因而柱色谱可用于分离量比较大（克数量级）的物质。所以作为较大量样品的制备分离，柱色谱优于薄层色谱。（三）操作技术装柱上样洗脱合并（四）装柱、分离样品•所用吸附固定相一般为硅胶，氧化铝，粒度要求100-160目或160目以上。•吸附剂粒度越小，分离度越大，但洗脱速度越慢。•Rf值相差较大时，应用硅胶100-160目，可上样30mg/g硅胶，更多的情况下硅胶量为10mg/g硅胶（即分离1g样品需要100g硅胶）。•应用氧化铝时，粒度要求100－150目，分离1g样品需要20－50g氧化铝。（四）装柱、分离样品1、装柱(1)干法装柱在柱子上端放一漏斗，直接加入硅胶。轻轻敲打层析柱，或上下震动层析柱，使填装均匀，再加一层石英砂，然后加入洗脱剂，使硅胶润湿。必要时加压或减压以除去气泡，加速溶剂化速度。（四）装柱、分离样品(2)湿法装柱将吸附剂硅胶与一定量溶剂调成悬浆状，快速倒入柱管中，打开活塞，使溶剂慢慢流出，吸附剂慢慢下降而均匀沉入色谱柱底。吸附剂填料完毕,一般再覆盖0.5cm厚的石英砂。（四）装柱、分离样品2.上样（1）样品能被流动相溶解•将其中极性溶剂尽可能的用旋转蒸发仪去除后，加入少许流动相稀释。•待将吸附剂上面的多余洗脱剂放出，直到柱内液体表面降至石英砂表面时，停止放出洗脱剂。•将样品用滴管或漏斗沿柱子内壁直接加入柱中。•样品稀释要尽可能用少的洗脱剂，然后用最少量洗脱剂洗涤器皿与层析柱内壁，洗涤完毕，开放活塞，使液体渐渐放出，液面降至石英砂下端时，再加入流动相洗脱。（四）装柱、分离样品（2）样品不能被流动相溶解•可选择极性大的溶剂溶解。如氯仿，丙酮，乙醇，甲醇，四氢呋喃，吡啶，免用DMSO,DMF沸点较高溶剂。•再加入适量的硅胶于溶剂中（一份样品+约5份柱填料），用旋转蒸发仪减压蒸去溶剂至干，让样品均匀地涂布在固定相表面上，然后通过漏斗装于柱子上端。旋转蒸发时，一定要加防爆球，以防样品硅胶爆沸。（四）装柱、分离样品3.洗脱（1）洗脱剂的选择应以TLC检测为依据。被分离物质的最佳Rf值应在0.2-0.5内。被分离的2个点之间△Rf值应尽可能的大，越大越好。（2）洗脱剂应不断加入，保持一定高度。（3）洗脱液收集洗脱液采用等份法收集。（4）控制洗脱液流出速度。不能太快，一般以1-2滴/秒为宜。（四）装柱、分离样品4.合并洗脱液按编号TLC点样展开，将Rf值相同者合并，浓缩，最后进一步纯化。结晶与重结晶原理及操作什么是结晶？溶解度：在一定温度下，某固态物质在100g溶剂中达到饱和状态时所溶解的溶质的质量。结晶：热的饱和溶液冷却后，溶质以晶体形式析出的过程。重结晶：晶体溶于溶剂或熔融后，又重新从溶液或熔体中结晶的过程。提纯固体有机物常用的方法之一。结晶及重结晶原理溶液中同时存在着组成物质的微粒在溶液中溶解与结晶的两种可逆的运动。通过改变温度或减少溶剂的办法，可以使某一温度下溶质微粒的结晶速率大于溶解的速率，这样溶质便会从溶液中结晶析出。重结晶主要是利用混合物中多组份在某种溶剂中的溶解度不同，或在同一溶剂中不同温度时的溶解度不同，而使它们相互分离。一般适合于纯化杂质含量小于5％的固体有机化合物。重结晶步骤1.选择适宜的溶剂2.将固体加热溶解3.趁热过滤以除去不溶物质和有色杂质（加活性炭煮沸脱色)；4.将滤液冷却，使晶体从过饱和溶液里析出，而可溶性杂质仍留在溶液中；5.然后进行减压过滤，把晶体从母液中分离出来；并洗涤晶体除去吸咐在晶体表面上的母液。6.将晶体烘干选择溶剂溶解固体去除杂质晶体析出晶体的收集与洗涤晶体的干燥溶剂的选择溶剂的选择关系到纯化质量和回收率。选择适宜的溶剂时应注意以下几个问题：不与重结晶的物质发生化学反应；高温时重结晶物质在溶剂中的溶解度较大，低温则反之；杂质的溶解度或是很大或是很小；容易和重结晶物质分离。最好选择对主要化合物是可溶性的，对杂质是微溶或不溶的溶剂，滤去杂质后，将溶液浓缩、冷却，即得纯制的物质。混合在一起的两种盐类，如果它们在一种溶剂中的溶解度随温度的变化差别很大，例如硝酸钾和氯化钠的混合物，硝酸钾的溶解度随温度上升而急剧增加，而温度升高对氯化钠溶解度影响很小。则可在较高温度下将混合物溶液蒸发、浓缩，首先析出的是氯化钠晶体，除去氯化钠以后的母液在浓缩和冷却后，可得纯硝酸钾。重结晶往往需要进行多次，才能获得较好的纯化效果。重结晶法提纯粗品乙酰苯胺仪器与试剂电炉、石棉网、250mL三角烧杯、热滤漏斗、酒精灯、滤纸、抽滤瓶、布氏漏斗、循环水真空泵、

表面皿、乙酰苯胺、活性炭装置图

实验步骤粗乙酰苯胺5g母液（可溶性杂质和部分乙酰苯胺）乙酰苯胺滤饼滤液溶于纯水，制成