微生物的实验室培养课件

微生物的实验室培养课件微生物原核:真核非细胞类：细菌、放线菌、支原体、蓝藻等酵母菌、霉菌等真菌：原生生物病毒、类病毒、朊病毒等①种类多；②分布广；③易培养；④个体微小；⑤构造简朴；⑥繁殖快；⑦代谢强；⑧易变异。微生物的类群显微藻类：衣藻、小球藻等原生动物：草履虫、变形虫等微生物的特征（一）球菌（二）杆菌（三）螺旋菌肺炎双球菌金黄色葡萄球菌乳酸链球菌大肠杆菌苏云金芽孢杆菌枯草芽孢杆菌霍乱弧菌幽门螺旋菌齿垢密螺旋体细菌的形态细菌的芽孢有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一种椭圆形的休眠体（不是繁殖体），叫做芽孢。

芽孢的壁很厚，含水量极低，抗逆性极强（对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力）。细菌芽孢的结构模式图环境合适时，芽孢能够萌发，形成一种细菌。

菌落具有大小、形状、光泽度、颜色、透明度等基本特征。菌落是鉴定菌种的主要根据。菌落菌落由单个细菌（或其他微生物）细胞或少数同种细胞在合适固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度，形成肉眼可见的子细胞群落。课题1微生物的试验室培养专题2微生物的培养与应用1.提供营养和条件2.预防污染6（一）培养基

（1）按物理状态分：固体培养基和液体培养基、半固体培养基。（2）按功能分：选择培养基和鉴别培养基。（3）按成份分：天然培养基和合成培养基。2.培养基的类型1、概念：

人们按照微生物对__________的不同需求，配制出供其

的营养基质叫培养基

营养物质生长繁殖种类制备方法原理用途例选择培养基加入某种化学物质对某物质的抗性分离微生物青霉素分离酵母菌和霉菌鉴别培养基加入某种化学物质或指示剂某种代谢产物与特定物质或指示剂反应鉴别微生物伊红和美蓝鉴别大肠杆菌按培养基的功能（用途）培养基应用加入青霉素分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐分离金黄色葡萄球菌不加氮源分离固氮菌不加有机物的培养基分离自养型微生物加入青霉素等抗生素分离导入了目的基因的受体细胞加入氨基喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷分离杂交瘤细胞3.基本成份：碳源、氮源、水、无机盐⑴碳源无机碳源：有机碳源：CO2、CO32-、HCO3-牛肉膏、蛋白胨等自养微生物异养微生物⑵氮源无机氮源：有机氮源：N2、NH4＋、NO3-牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等注：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的碳源、氮源、能源。主要用于合成细胞物质、作为能源物质主要用于合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物4、其他条件pH、特殊营养物质（如维生素等）、氧气的需求等。部分加生长因子——是微生物生长不可缺乏的微量有机物，一般是酶和核酸的构成成份。（主要涉及维生素、氨基酸和碱基等）5.配制原则⑴目的明确：⑵营养全方面、浓度合适、百分比恰当⑶合适的pH值：有机碳源异养型：根据微生物的种类、培养目的选择原料自养型：不加碳源加入缓冲剂细菌偏碱，真菌偏酸（CO2碳源）生产科研12（二）无菌技术1、无菌技术就是取得纯净培养物的关键是对试验操作的空间、操作者的衣着和手进行__________将培养皿、接种用具进行_________接种的过程要在_________附近进行。试验后对培养基等也要_______处理预防外来杂菌的入侵预防杂菌污染的操作技术。涉及清洁消毒灭菌酒精灯灭菌消毒：指使用较为温和的物理或化学措施仅杀死物体表面或内部部分对人体有害的微生物（不涉及芽孢和孢子）。灭菌：指使用强烈的理化原因杀死物体内外全部微生物，涉及芽孢和孢子。灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最一般也是最主要的技术。2.消毒与灭菌的概念1、煮沸消毒法:100℃煮沸5~6min2、巴氏消毒法：70~75℃下煮30min或80℃下煮15min3、化学药剂消毒法:用75%酒精;氯气消毒水源等4、紫外线消毒……(1)消毒的措施：3.常用的消毒与灭菌的措施1、灼烧灭菌接种环、接种针等接种工具及试管口2、干热灭菌：160-170℃下加热1-2h。3、高压蒸气灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min.(2)灭菌的措施：1.无菌技术除了用来预防试验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.请你判断如下材料或用具是否需要消毒或灭菌。假如需要，请选择合适的措施。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）试验操作者的双手答：无菌技术还能有效防止操作者本身被微生物感染。答：（1）中培养基用高压蒸汽、培养皿与（2）用干热灭菌；（3）用酒精擦拭消毒。旁栏思索例题：消毒和灭菌是两个不同的概念，下列哪些事物合用于消毒处理()

①皮肤②饮用水③牛奶④注射器⑤培养皿

⑥接种环⑦培养基⑧果汁⑨酱油⑩手术刀

A．④⑤⑥⑦⑩B．①②③⑧⑨

C．①②③④⑤⑥⑧

D．以上全部B（三）试验操作

以牛肉膏蛋白胨固体培养基进行大肠杆菌纯化培养为例1、制备培养2、纯化大肠杆菌1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（1）.计算：依配方计算100mL培养基所需各成份的用量。

（2）称量：玻璃棒挑取牛肉膏于称量纸上称取。（3）溶化：注：牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖。牛肉膏、称量纸、少许水加入烧杯→加热溶解→取纸→蛋白胨、NaCl→搅拌溶解→冷却调pH→琼脂→搅拌熔化→补水至100mL牛肉膏黏稠，确保粘附在称量纸上的牛肉膏也溶于水中，降低误差作为凝固剂预防琼脂糊底而造成烧杯破裂(4)灭菌：培养基装入锥形瓶，加棉塞，包牛皮纸扎紧，高压蒸汽灭菌；培养皿5～8套作一包，放于干热灭菌箱内灭菌。(5)倒平板培养基冷却至约50℃左右时②灼烧灭菌①左手拔出棉塞③倒入培养基盖盖④冷却倒置(6)无菌检验：37℃倒置培养24～48h，观察是否有微生物生长。预防污染和挥发灭菌时防止水蒸气浸湿棉塞，取出培养基时，也起到隔绝空气中杂菌的作用①溶化时为何要将牛肉膏连同称量纸一起加热?②加琼脂的目的是什么?为何要用玻璃棒搅拌？③在灭菌前,用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基的锥形瓶的目的是什么？④培养皿能否用高压蒸汽灭菌？可确保粘附在称量纸上的牛肉膏也能溶于水中,降低误差作为凝固剂；预防琼脂糊底造成烧杯破裂。在灭菌时能防止水蒸汽凝结时浸湿棉塞,在取出培养基锥形瓶时也起到隔绝空气中杂菌污染的作用不能,因为培养皿要保持干燥,应该用干热灭菌.问题讨论答：用手触摸锥形瓶，感觉刚刚不烫手时。2.为何需要使锥形瓶的瓶口经过火焰？答：灼烧灭菌，预防瓶口的微生物污染培养基。问题讨论1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才干用来倒平板。你用什么措施来估计培养基的温度？3.平板冷凝后，为何要将平板倒置？答：既能够预防培养基表面的水分过快挥发，又能够预防皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。4.在倒平板的过程中，假如不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为何？答：最佳不要用。因为空气中的微生物可能在此滋生。纯化大肠杆菌微生物接种：最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法一、平板划线操作：微生物的接种技术还涉及斜面接种、穿刺接种等措施。虽然这些技术和操作措施各不相同，但是，其关键都是要预防杂菌污染，确保培养物纯度。一、平板划线操作：问题讨论1、为何在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，依然需要灼烧接种环吗？为何？①操作的第一步灼烧接种环是为了防止接种环上可能存在的微生物污染培养物②杀死上次残留的菌种，确保使下一次划线时，菌种直接起源于上次划线的末端，预防菌落连成一片。③及时杀死接种环上残留的菌种，防止细菌污染环境和感染操作者。2、在灼烧接种环之后，为何要等其冷却后再进行划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。问题讨论3.在作第二次以及其后的划线操作时，为何总是从上一次划线的末端开始划线？划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目伴随划线次数的增长而逐渐降低，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。一旦划破，会造成划线不均匀，难以达成分离单菌落的目的；存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一种条状的菌落。4.平板划线时不能划破培养基的原因？例：有关平板划线操作正确的是（）A．打开含菌种的试管需要经过火焰灭菌，取出菌种后需要立即塞上棉塞B．使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不再灭菌

C．最终将平板倒置，放入恒温箱中培养D．将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可C6支试管，分别加入9ml无菌水1ml1011ml1021ml1031ml1041ml1051ml1061、梯度稀释菌液：菌液微量移液器二、稀释涂布平板法：浸不超出0.1ml各梯度分别涂布3个平板1个不涂布作空白对照滴灼涂稀释103倍稀释104倍稀释105倍2、涂布平板：1、梯度稀释菌液：二、稀释涂布平板法：稀释103倍稀释104倍稀释105倍2、涂布平板：1、梯度稀释菌液：二、稀释涂布平板法：例、平板划线法和稀释涂布平板法接种大肠杆菌的操作中，相同的是（）

①能够用相同的培养基

②都需要使用接种针进行接种③菌液均需稀释后再接种④都能够用来计数活菌⑤根据的原理相同⑥都需要在火焰旁进行接种A．①②B．③④

C．①⑥D．②④涂布平板的全部操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应怎样进行无菌操作？应从操作的各个细节确保“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。C问题讨论培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同1、培养基的制作是否合格假如未接种的培养基在恒温箱中保温1～2d后无菌落生长，阐明培养基的制备是成功的，不然需要重新制备。2、接种操作是否符合无菌要求假如培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则阐明接种操作是符合要求的；假如培养基上出现了其他菌落，则阐明接种过程中，无菌操作还未达成要求，需要分析原因，再次练习。3、是否进行了及时细致的观察与统计课题成果评价菌种的保存：1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4℃冰箱保藏。后来每3-6个月，都要重新将菌种从旧的培养基上转移到新鲜的培养基上。这种措施保存的时间不长，菌种易被污染和产生变异。课题的延伸2、长久保存：甘油管藏法。在3ml的甘油瓶中，装入1ml甘油后灭菌。将1ml培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在-20℃的冷冻箱中保存。本课题知识小结:课堂巩固1.（2023.宁夏高考）某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了试验。试验涉及制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此试验有关的问题。（1）培养基中具有蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了和。除此之外，培养基还必须具有的基本成份是和。（2）对培养基进行灭菌，应该采用的措施是。碳源氮源无机盐水高压蒸汽灭菌（3）为了尽快观察到细菌培养的试验成果，应将接种了湖水样品的平板置于中培养，培养的温度设定在37℃。要使该试验所得的成果可靠，还应该同步在另一平板上接种作为对照进行试验。（4）培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这阐明湖水样品中有种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越。恒温箱无菌水多大2.（2023.宁夏高考）（1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑、和渗透压等条件。因为该细菌具有体积小、构造简朴、变异类型轻易选择、、等优点，所以常作为遗传学研究的试验材料。（2）在微生物培养操作过程中，为预防杂菌污染，需对培养基和培养皿进行（填“消毒”或“灭菌”）；操作者的双手需要进行清洗和（填“消毒”或“灭菌”）；静止空气中细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能。温度酸碱度易培养生活周期短灭菌消毒损伤DNA的构造（3）若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、屡次反复外，还应确保待测样品稀释的。（4）一般，对取得的纯菌种还能够根据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的。（5）培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测措施是、。。（6）若用大肠杆菌进行试验，使用过的培养基及其培养物必须经过处理后才干丢弃，以预防培养物的扩散。百分比合适鉴定将未接