高效液相色谱法测定连钱草迷迭香酸的含量

高效液相色谱法测定连钱草迷迭香酸的含量

连钱草是嘴唇科植物的一种活血丹属植物。该植物是多年生草本植物，通常有茅茎。我国除甘肃、青海、新疆及西藏外,各地均有分布。连钱草性味苦、辛、性凉,归肝、胆、膀胱经,具有利湿通淋、清热解毒、散瘀消肿的功效,临床上用于治疗热淋、石淋、湿热黄疸、尿路感染,疳积,感冒,肺痈,咳嗽,小儿惊风,跌打扭伤,骨折,风湿性关节炎等疾病。我们从连钱草水提物中分离得到了迷迭香酸(RosA)。RosA作为天然抗氧化剂,具有多种药理作用,如:对心肌细胞损伤的保护作用,抗神经细胞凋亡,诱导T细胞凋亡,抗癌。研究表明其在制药、食品、化妆品等领域中具有重要的应用价值。本文报道不同部位和不同产地连钱草中迷迭香酸含量测定结果,为控制连钱草及市场上相关产品的质量,和合理用药提供科学依据。1全草的提取、鉴定仪器:Agilent1100高效液相色谱仪、Agilent1100色谱工作站。DenverAB系列十万分之一电子分析天平,SG25OH超声清洗仪。迷迭香酸标准品:由本实验室提供,经测定纯度为97.74%。连钱草样品:连钱草样品购于贵阳、凯里地区。由贵阳中医学院陈德媛教授鉴定为唇形科植物活血丹Glechomalongituba干燥全草。HPLC流动相用甲醇为色谱纯,水为乐百氏纯净水,其余试剂均为分析纯。2实验方法和结果2.1流动相gc/msHypersilODS(4.6×250mm,5μm)Agilent分析柱进行测定,流动相:甲醇-0.1%磷酸水溶液(40:60),流速1ml/min,检测波长330nm,柱温25℃,进样量5μL,数据处理为外标法峰面积定量。在该色谱条件下,样品中迷迭香酸峰与其它非被测峰能够达到基线分离,保留时间在15.7min左右,对照品与样品的色谱图见图1。2.2对照品溶液的制备精密称取60℃减压干燥2h的迷迭香酸3.10mg,置于10mL容量瓶中,用甲醇溶解,定容,得含迷迭香酸0.303mg/mL的对照品溶液。2.3样品溶液的制备取连钱草样品粉碎(过60目),75℃干燥2h,精密称定0.5g,置于100mL具塞的锥形瓶中,加入9mL甲醇溶液,超声提取20min,自然冷却,过滤,重复提取两次,合并滤液,置于25ml的容量瓶中,定容,作为样品溶液。2.4标准曲线及线性范围精密吸取对照品溶液0.5、1、2、5、8、10μL注入液相色谱仪中,测定其峰面积,以峰面积值(y)为纵坐标,进样量(x)为横坐标作图,得到一条不经过原点的直线,其回归方程为:y=1570.0466x+22.406078,r=0.99998,线性范围0.15~3.06μg。2.5精密度测试精密吸取对照品溶液10μL,连续测定5次,测定各次峰面积,计算RSD值为0.98%。2.6进样稳定性试验精密称取连钱草样品0.5g,按样品制备项下方法制备供试品。在所选色谱条件下,精密吸取供试品溶液5μL,分别在0,2,4,8,12h处进样测定,所测峰面积RSD为1.02%,表明在12h内上述溶液中迷迭香酸的化学性质稳定。2.7供试品的制备取同一批次的连钱草样品5份,各0.5g,按样品制备项下方法制备供试品。在所选色谱条件下,精密吸取供试品溶液5μL测定峰面积,计算其RSD为0.86%,表明其重现性良好。2.8供试品的制备精密称取同一批次连钱草样品6份,分别加入实际含迷迭香酸1.078mg/mL的溶液0.6mL、0.6mL、1.0mL、1.0mL、1.4mL、1.4mL,按样品制备项下方法制备供试品。取5μL注入液相色谱仪测定,计算加样回收率,平均回收率为99.3%,RSD为1.07%。2.9外标法计算迷迭香酸含量按样品制备项下方法,分别制备不同地区连钱草供试品,精密吸取5μL注入液相色谱仪,以外标法计算样品中迷迭香酸的含量,结果详见表2。按样品制备项下方法,分别制备同一地区不同部位连钱草供试品,精密吸取5μL注入液相色谱仪,以外标法计算样品中迷迭香酸的含量,结果详见表3。3提取方法的确定3.1为了确定连钱草的入药部位,提高药材质量,我们以迷迭香酸为指标,对连钱草不同部位的含量进行了初步考查。实验结果表明,迷迭香酸主要集中分布在连钱草根部。3.2由实验结果知,采用本文的HPLC测定方法,迷迭香酸具有良好的分离度和线性关系,与其它成分的分离更为完全。与现有文献相比,本方法简单快速、高效灵敏、重现性好,可用于含连钱草药材及其制剂的质量控制。3.3根据迷迭香酸的溶解性,我们选择甲醇、水作为提取溶剂,比较了这两种提取溶剂提取方法(超声、回流及索氏提取)和不同提取时间(0.5h、1.0h、1.5h)对提取效果的影