分子诊断学：第十六章 题目

选择题抑癌基因启动子甲基化检测技术包括______。ACGHBICC/IHCCMSSDMSPERT-PCR2．检测致病基因结构异常的方法有_______。A斑点杂交B等位基因特异的寡核苷酸探针杂交C单链构象多态性D限制性内切酶图谱分析E限制性片段长度多态性3．在基因转录水平上的检测方法有_______。ARNA分子杂交B逆转录PCRC限制性片段长度多态性分析D限制性内切酶图谱分析E单链构象多态性4．下列不属于复杂性疾病的是_______。A高血压B外伤C肺癌D急性粒细胞白血病5．下列属于表观遗传性改变的是_______。A抑癌基因Rb1突变B癌基因K-ras突变C抑癌基因APC启动子高甲基化改变D微卫星不稳定性6．血浆DNA定量检测方法包括_______。A放射免疫法B实时荧光定量PCR法C溴化乙锭法D对流免疫电泳法ERNA—DNA杂交法7．下列与结肠直肠癌的发生有关的分子改变是_______。A抑癌基因APC启动子高甲基化改变Bt（9；22）染色体异常C抑癌基因Rb1突变D抑癌基因APC突变8．下列与肺癌的发生有关的分子改变是_______。A抑癌基因APC启动子高甲基化改变Bt（9；22）染色体异常C抑癌基因Rb1突变D抑癌基因APC突变9．在甲基化特异性引物基因扩增过程中，原始被分析的DNA模板进行化学修饰后，未甲基化的胞嘧啶会转变为_______。AABTCUDG10．下列微小残留病中具有血管外肿瘤细胞增殖特性的是_______。A播散肿瘤细胞B游离肿瘤细胞C循环肿瘤细胞D微转移名词解释分子诊断循环DNADNA芯片技术微小残留病（minimalresidualdisease，MRD）限制性内切酶图谱XE"限制性内切酶图谱（restrictionmap）"分析问答题复杂性疾病分子诊断有哪些研究特点？简述复杂性疾病分子诊断的临床意义。分子诊断有哪些常用的技术？DNA芯片技术有哪些优点？分子诊断在肿瘤临床中有哪些应用？简述甲基化特异性引物基因扩增的原理。简述肿瘤微转移与播散肿瘤细胞的区别。答案：选择题：CD、ABCDE、AB、B、C、ABCDE、D、A、C、D名词解释：分子诊断是以DNA和RNA为诊断材料，通过检测基因的结构或表达功能的异常，对人体状态和疾病作出诊断的方法和过程循环DNA是一种无细胞状态的胞外DNA，它存在于血液(血清或血浆)、滑膜液等体液中。循环DNA主要是由单链或双链DNA及其混合物组成，主要以DNA-蛋白质复合物的形式存在，但也存在着部分游离的DNA。DNA芯片技术是指在固相支持物上原位合成(insitusynthesis)寡核苷酸或者直接将大量DNA探针以显微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后与标记的样品杂交，通过对杂交信号的检测分析，得出样品的遗传信息（基因序列及表达的信息）。对于肿瘤（尤其是中晚期肿瘤）患者而言，即使原发病灶被去除，患者体内仍然可能存在来自原发病灶的肿瘤细胞。这些肿瘤细胞以单个肿瘤细胞，或以肉眼不可见细胞集落的形式存于血液或人体组织中。在肿瘤患者体内存在的这种肿瘤病变，被称为肿瘤微小残留病。如果DNA突变后改变了某一核酸限制性内切酶的识别位点，使原来某一识别位点消失，或形成了新的识别位点，那么相应限制性内切酶片段的长度和数目会发生改变，一般基因组DNA经该种限制性内切酶水解，再做Southern印迹，根据杂交片段的图谱，可诊断该点突变。问答题：（1）直接检测疾病或疾病相关基因，属病因诊断，针对性强；（2）特异性强、灵敏度高：由于分子诊断采用核酸分子杂交、聚合酶链反应、表达芯片、蛋白质芯片及质谱等新技术手段，检测分析的特异性和灵敏性均大大增高；（3）适用范围广：其应用的范围已从原先局限的遗传性疾病扩大到肿瘤、心血管及感染性疾病等领域。2．利用分子诊断的技术手段，可对绝大多数临床复杂性疾病做出早期快速诊断；确定个体对疾病的易感性；疾病的分期分型、疗效监测、预后判断等3．检测致病基因结构异常的方法：斑点杂交、等位基因特异的寡核苷酸探针杂交、单链构象多态性分析、限制性内切酶图谱XE"限制性内切酶图谱（restrictionmap）"分析、限制性片段长度多态性、限制性片段长度多态性XE"限制性片段长度多态性（restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP）"遗传连锁分析、DNA分子杂交基因转录水平检测方法：RNA分子杂交、逆转录PCR、基因序列分析及表达检测技术：DNA序列分析、生物芯片与基因芯片4．DNA芯片技术的优点：①可平行、高通量、综合性地检测大量基因；②快速、敏感、准确；③不需要使用同位素，可以对疾病进行前瞻性诊断，从而在亚健康状态下实现真正意义上的基因诊断。5．包括：肿瘤早期诊断、肿瘤患者预后判断、肿瘤筛查、肿瘤微小残留病检测、肿瘤耐药监测6．对原始被分析的DNA模板进行化学修饰后，未甲基化（野生型）DNA转化为尿嘧啶，而甲基化（突变型）DNA则仍然保持不变。因此，对未知甲基化检测样品进行化学修饰后，以针对甲基化和未甲基化（非甲基化）的特异性序列设计两对引物，对修饰后的模板DNA进行甲基化特异性引物基因扩增。甲基化阳性的样本用甲基化引物可以扩增出阳性产物，而非甲基化的样本以非甲基化引物可以扩增出阳性产物。利用电泳可以对结果加以鉴