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文档简介

恒远生物|ELISA常见问题与解决方法ELISA常见问题与解决方法1.阴性对照出现阳性结果①

样品、试剂被污染，或加样时操作不当导致相邻孔之间溶液溅洒出现交叉污染——更换试剂，小心操作。②酶标板洗涤不好——洗板前先将抗体溶液倒干净，然后清洗液倒满板孔，确保能充分洗涤。③抗体量过多导致非特异性结合——根据说明书的推荐量使用抗体，稀释抗体到适当浓度。2．酶标板整体背景高①抗体非特异性结合——应确保板孔进行了封闭并且使用的是恰当的封闭液以防止非特异性结合。②底物结合浓度过高——对底物进行适当稀释。③反应时间过长——当酶标板显色足够进行吸光度读数时立即使用终止液终止反应，适当缩短显色时间。④底物溶液污染——正常底物溶液应是澄清透明的，若出现黄色或其他颜色表明受到污染，应更换新的底物溶液。⑤底物孵育过程没有避光——底物孵育应在避光条件下进行。3.复孔之间重复性差①样品数量不整齐，加样时间有长有短——加重复孔时尽量保持加样时间与第一次接近。②加样量不一致——样品稀释前应充分混匀，并且使用同一移液枪。③洗涤条件、操作人员不一致——重复测定样品时，操作条件、人员应尽可能与上次保持一致。4.吸光值偏高或偏低①样品中待测抗原含量太低会导致测定结果偏低——可尝试增加样品使用量。②加入抗体量不合适会造成结果偏低或偏高——使用建议抗体量或为了使结果更好尽可能调整抗体的适用量。③孵育时间太短导致检测结果偏低——适当延长抗体或抗原的孵育时间，确保待测样品与检测抗体能充分结合。④孵育温度不适合——应保证抗体在最适宜条件下进行孵育（一般37℃孵育1h）。本公司网站每周都有最新新闻与技术文章要分享给大家，欢迎关注！恒远公司主营：动物血

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