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文档简介

核酸分子杂交（DNA/DNAorDNA/RNA）技术核酸分子杂交技术，是在1968年由华盛顿卡内基学院（CavnegieInstituteofWashington）的RoyBritten及其同事发明的。所依据的原理是，带有互补的特定核苷酸序列的单链DNA或RNA，当它们混合在一起时，其相应的同源区段将会退火形成双链的结构。

杂种核酸分子：彼此退火的核酸来自不同的生物有机体，而形成的双链分子。

DNA/DNA的杂交作用，检测特定生物有机体之间的亲源关系。

DND/DNA或RNA/DNA的能力，揭示核酸片断中某种特定基因的位置。核酸杂交常用几种膜的性能比较硝酸纤维素膜不能滞留小于150bp的DNA片断，不能同RNA结合。应用1mol/L醋酸铵和0.2mol/L的NaOH缓冲液代替SSC缓冲液可改善对小片断DNA的滞留能力。RNA变性后也能十分容易的结合到膜上。

尼龙膜或硝酸纤维素膜杂交的步骤：1.核酸印迹转移：将核酸样品转移到固体支持膜上，利用的是毛细管作用。2.印迹杂交：将具有核酸印迹的滤膜同带有标记的DNA/RNA进行杂交。1、萨瑟恩DNA印迹杂交根据毛细管作用的原理，使在电泳凝胶中分离的DNA片段转移并结合在适当的滤膜上，然后通过同标记的单链DNA或RNA探针的杂交作用检测这些被转移的DNA片段，这种实验方法叫做DNA印迹杂交技术。由于它是由E.Southern于1975年首先设计出来的，故又叫SouthernDNA印迹转移技术。

印迹转移前的凝胶处理：分子量不同所需转移的时间不同；浸泡在0.25M的HCL溶液中脱嘌呤，再进行碱变性碱水解，DNA链断裂单链（a）（b）（c）（d）（e）基因组DNADNA限制片段

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