费林试剂热滴定定糖法

费林试剂热滴定定糖法一、实验目的初步掌握费林试剂热滴定定糖法的原理和方法。正确掌握滴定管的使用方法和热滴定的终点。二、实验原理还原糖是指含有自由醛基(如：葡萄糖)或酮基(如：果糖)的单糖和某些二糖(如：乳糖、麦芽糖)。所有的单糖（除二羟丙酮和五碳糖，即核糖和脱氧核糖），不论醛糖、酮糖都是还原糖。大部分双糖也是还原糖，蔗糖例外。一般情况下，单糖的还原能力主要来自它的醛基，如葡萄糖，而多糖则大多因为半缩醛羟基的存在。还原后，自己会变成糖酸。如葡萄糖就会变成葡萄糖酸。在碱性溶液中，还原糖能将金属离子(Cu2+、Hg2+、Ag+等)还原，而糖本身被氧化成各种羟酸类化合物。该特性常用于糖的定性和定量测定。本实验采用费林试剂热滴定法，费林试剂是氧化剂，由甲、乙两种溶液组成。甲液含质量分数为0.05g/mL的硫酸铜和次甲基蓝(氧化还原指示剂)；乙液含质量分数为0.1g/mL的氢氧化钠，酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。当甲、乙两溶液混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应生成天蓝色的氢氧化铜沉淀。在碱性溶液中，酒石酸钾钠与沉淀的氢氧化铜作用形成可溶性的络合物，该含Cu2+络合物的溶液，被还原后得到砖红色Cu2O的沉淀。因此，斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在与否。费林试剂热滴定定糖法的基本原理,是在沸热条件下,用还原糖溶液滴定一定量的费林试剂时,将费林试剂中的铜离子还原为氧化亚铜,以亚甲基蓝为指示剂,稍过量的还原糖立即将蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基蓝,指示滴定终点。三、试剂和器材试剂：1.面粉2.6MHCl3.蒸馏水4.碘液5.酚酞试剂6.10%氢氧化钠7.菲林试剂（甲、乙液）8.标准葡萄糖（1mg/ml）器材：25毫升碱滴定管。(6)万能夹移液管(5、10毫升)(7)铁架台100毫升溶量瓶(8)点滴板100毫升锥形瓶(9)水浴锅滴管(10)600瓦电炉四、实验步骤1.总糖的提取准确称取面粉1克，加入6mol/L盐酸10毫升，蒸馏水15毫升，混匀。沸水浴加热半小时后，取出几滴水解液用碘化钾-碘溶液检查水解是否完全，若已经水解完全，则不呈现蓝色。冷却后用10%氢氧化钠中和至中性溶液，定容至100毫升。准确吸取该溶液10ml，移入100ml容量瓶内并定容至刻度，即为测定总糖的样品液。2、空白测定准确吸取费林甲、乙液各5毫升和蒸馏水5毫升放入250毫升的锥形瓶中，再用滴定管加入一定量的标准葡萄糖液，混匀后放在石棉网上加热，应使瓶内溶液在2分钟内达到沸腾，以每滴4-5秒的速度由滴定管滴入标准葡萄糖液直至蓝色消失为止。记录滴定完后滴定管的刻度，并同时记录滴定所需时间。平行测定三次，直至所得的平均数与各组的差值＜0.1ml。沸腾前加入的标准葡萄糖液量与沸腾后滴定时所用的标准葡萄糖液量的总和，就是测定空白时耗用的标准葡萄糖液毫升数(V1)。全部滴定过程必须在沸腾状态下快速进行，一般应在3分钟内完成。因此，除控制滴定速度外，滴定前需加入一部分标准葡萄糖液。加入该液的数量，应在正式滴定前的预备滴定试验时确定，同时练习掌握操作条件。3、总糖的测定准确称取面粉1克，加入6N盐酸10毫升，蒸馏水15毫升，混匀。沸水浴加热半小时后，取出几滴水解液用碘化钾-碘溶液检查水解是否完全，若已经水解完全，则不呈现蓝色。冷却后用10%氢氧化钠中和至中性溶液，过滤，滤液定容至100毫升。准确吸取该溶液10毫升，移入100毫升容量瓶内并定容至刻度，即为测定总糖的样品液。准确吸取样品液5毫升放于100毫升锥形瓶内，加入费林甲液、乙液各5毫升，混匀，然后按测定空白同样操作进行滴定，记下耗用标准葡萄糖的毫升数。平行测定三次，直至所得的平均数与各组的差值＜0.1ml。五、数据记录实验测定数据如下表所示：表一：费林试剂热滴定数据记录表滴定组别空白测定样品测定滴定次数123平均123平均费林甲液/mL555--555--费林乙液/mL555--555--蒸馏水/mL555----------样品液/mL--------555--预加葡萄糖/ml555----------消耗葡萄糖量V1/ml7.257.257.357.28消耗葡萄糖量V2/ml3.003.103.053.05六、实验计算(V1-V2)×标准葡萄糖液浓度(克/毫升)×稀释倍数还原糖(或总糖)%=×100%称取的样品量(克)×5式中：V1为测定空白时耗用标准葡萄糖液毫升数。V2为测定总糖时耗用的标准葡萄糖的毫升数。把实验所得数据代入公式得：(7.28-3.05)×0.001×1000还原糖(或总糖)%=×100%1×5=84.6%即面粉中的糖含量为84.6%。七、注意事项1.菲林试剂一般应现配现用，因为斐林试剂甲和斐林试剂乙混合后会因酒石酸有一定的还原性而自发地缓慢产生氧化亚铜沉淀。2.总糖的提取步骤中，面粉应在液体加入三角瓶之后再加入，因为这样可以使面粉更容易溶解，沸水浴30min后检查是否水解完全，若未则应继续加热。3.用酚酞作指示剂时用10%氢氧化钠调PH至7，应先计算大概需加入氢氧化钠溶液的体积，然后在接近拐点处应一滴一滴甚至半滴半滴的加，因为此处突变很大，避免加入氢氧化钠过量后再用盐酸调PH，因为这会使得葡萄糖溶液变得粘稠。4.空白滴定中一定以每滴1-2秒的速度由滴定管滴入标准葡萄糖液直至蓝色变成黄色且在30s内颜色又变成深红色为止。5.为使空白测定与样品测定的时间一致，在样品滴定之前应提前加入一定量的葡萄糖。6.在滴定过程中，应注意在颜色由蓝色变为紫色时，应减慢滴速，当颜色变为土黄色时，立即停止加入葡萄糖，颜色会再度变回紫色时，不应再滴加葡萄糖。八、分析与小结实验分析实验测得的面粉中的糖含量为84.6%，与实际值有一定的误差，产生误差的原因有以下几点：1)面粉未完全溶解，仍有部分固体残渣被过滤出来，对测量结果有一定的影响。2)各组滴定的时间不完全一致，空气中的O2对实验结果造成影响。3)对滴定终点的把握不够精确，