鸡球虫疫苗的研究进展

鸡球虫疫苗的研究进展

鸡球病是一种严重的性原生病。这是一种高度发病率和很难控制的疾病之一。鸡球虫属于单宿主型,即不需要中间宿主,易于传播,凡是规模化养鸡的地方,就有鸡球虫的存在。集约化养殖场是球虫病暴发的最适宜场所,其病死率有时高达40%。全世界每年因球虫病造成的损失达10多亿美元,其中抗球虫药的年消费约3.2亿美元。该病已被美国农业部列为对禽类危害最严重的五大疾病之一。传统药物防治存在着药物残留、耐药性、环境污染及新药开发费用高等缺点,而免疫预防能克服上述药物防治的缺点。2008年8月7日,国内第一个由佛山市正典生物技术有限公司自主研发的“鸡球虫活疫苗”正式获得农业部颁发的生产许可证和产品批准文号,至此我国球虫疫苗的研制、生产和使用也进入了一个新的时期。1鸡的循环重复免疫法球虫活疫苗的免疫机理是球虫在低水平感染时不会使鸡只发病,但球虫卵囊能循环地在鸡只体内繁殖,并排出新的卵囊于垫料中,鸡只从垫料中可获得再次免疫,如此经过几次生活史循环,鸡只就可以产生很好的保护性免疫,即鸡只在低剂量球虫感染状况下,逐步建立免疫力,以抵抗现场强毒虫株的侵袭。2疫苗类型2.1流行病苗2.1.1疫苗接种安全性强毒疫苗的研制是疫苗预防球虫病的开始,强毒疫苗的虫株是直接从自然发病的鸡体内或粪便中分离出来的,致病力强,而且是药物敏感虫株。加拿大的李荣丰提出了独创性的凝胶接种体系,即将疫苗均匀分布于凝胶后接种鸡,他随后又研究出藻酸盐颗粒强毒疫苗。但强毒疫苗因其毒力较强,容易引发球虫病;球虫卵囊在水中沉降较快,易造成免疫不均匀,必须有较好的悬浮剂才能使用;此外,也可能将强毒球虫引入新鸡场。2.1.2致弱株的选育基于强毒疫苗的弱点,人们开始转向用致弱疫苗来预防鸡球虫病。鸡球虫弱毒疫苗有鸡胚传代致弱株、选育的早熟弱毒株、理化处理的致弱株等多种。国内王江清、秦建华等分别选育出巨型艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫的早熟株,并成功研制了三价早熟弱毒疫苗。吴兆敏等用化学诱变剂NTG处理柔嫩艾美耳球虫卵囊,结果发现在毒力下降的同时卵囊繁殖力也下降。2.2利用生物技术手段由于活疫苗存在着致病力恢复,理化处理虫株存在卵囊产量低、容易返祖等问题,因此随着现代生物技术的不断发展,科研人员也在不断利用生物技术手段寻求现代生物技术疫苗。2.2.1基于蛋白免疫的e.teella-pca将寄生虫抗原基因转入表达载体直接导入动物体细胞内,诱导机体产生免疫力。核酸疫苗是近年发展起来的一种新型疫苗,因其安全、稳定、高效和易于制备而得到广泛研究,被称为第三代疫苗。球虫DNA疫苗是利用编码致病菌抗原的基因,加上适当的调控元件(启动子、增强子)直接注射宿主,在宿主体内表达天然蛋白,然后递呈给MHCⅠ和MHCⅡ,因此能被宿主的免疫系统识别。Du等用含E.tenella5401抗原基因通过减毒沙门氏菌(Salmonellaenterica)制备口服DNA疫苗,含pcDNA3-5401的减毒沙门氏菌口服免疫后诱导了很强的体液免疫和细胞免疫,对E.tenella卵囊的攻击提供了部分保护。Konjufca等将编码E.acervulina子孢子抗原EASZ240和裂殖子抗原EAMZ250的减毒沙门氏菌分别于1周龄和2周龄2次免疫鸡,对E.acervulina卵囊的攻击在增重和肠道病变记分方面有明显的差异,可诱导一定的保护作用。2.2.2《重组卡介苗的制备和高效表达的卡介苗疫苗》2008年8月6日,由吉林大学李建华等人获得的发明专利《球虫重组卡介苗及制备方法》,此专利包括穿梭表达载体球虫重组卡介苗和整合表达载体球虫重组卡介苗疫苗,能高效表达球虫蛋白,使表达的蛋白发挥很好的免疫保护作用,可对鸡球虫病的预防起到较好的作用。2.2.3e.upra检测e.ma感染是指除去不能激发机体免疫反应或对机体有害的成分,利用其具有免疫原性的部分制得的疫苗。Wallach等采用亲和柱纯化的56ku、82ku和230ku配子体抗原加入弗氏佐剂免疫产蛋鸡,发现后代鸡群对E.maxima感染具有明显保护作用,3次免疫后卵囊排出量下降49.2%。郑明学等研究显示雏鸡体内母源抗体水平与雏鸡抗球虫水平具有明显正相关性。以色列雅贝克公司出品的亚单位疫苗CoxAbic中主要含有3种从巨型艾美耳球虫的配子体中分离而得的抗原,这种疫苗可对种鸡或蛋鸡进行肌肉注射,诱导产生的抗体进入卵黄,对雏鸡产生被动保护,临床应用表明,球虫卵囊产量下降50%~80%,可用于控制生产中的球虫病。2.2.4球虫基因的筛选单克隆抗体在疾病的诊断、治疗、预防领域显示出重要作用。国内外已经建立了多株针对堆型艾美耳球虫的单克隆抗体细胞株,并用单克隆抗体对已建立的表达性DNA文库或cDNA文库进行筛选球虫基因,利用这种方法已经筛选出很多基因,如堆型艾美耳球虫的9S4、6S2、Eala、MAⅠ、EAMZp30-40和MA16等。但单克隆抗体在体内代谢快、特异性较差,许多特异性抗体在体内并不完全发挥其中和活性,用杂交瘤细胞技术筛选的单克隆抗体存在一般只能保持其天然抗体的部分活性、制备工作异常繁琐和费时等缺点。2.2.5寄生虫入侵宿主细胞内蛋白定位分析Hao在柔嫩艾美耳球虫体内成功地瞬时转染并表达了黄色和红色荧光蛋白,为了解体内蛋白定位,分析寄生虫入侵宿主细胞有关的分子功能提供了技术支持。Yan等利用重组E.tenella建立的一个体内稳定转染体系,为E.tenella和禽类其他主要细胞内病原的活疫苗投递系统及寄生虫的生化和细胞生物学研究提供有效的途径。3接种方法的选择目前,鸡球虫病疫苗的免疫接种方法有喷羽毛、喷眼睛、胚蛋注射、拌(喷)料、混饮和滴口等方法,养殖者可根据自身条件选择适宜的接种方法。正确使用疫苗进行免