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HIV筛查实验室的设置及人员情况为了更好发挥艾滋病检测在艾滋病防治工作中的作用，根据《全国艾滋病检测技术规范》对于艾滋病的检测要求，我院检验科设置了独立的HIV筛查实验室。为了使检测工作能够正常进行，保证HIV检测结果的正确性和准确性，我们不仅对工作环境条件和检测设施加以整改，而且建立了完整的实验室标准化操作规程，以确保HIV检测结备了专用的的生物安全柜、电脑、冰箱、酶标仪、洗板机、恒温培养箱、离心机、高压消毒锅等设备和安全防护用品等。根据HIV检测实验室工作的需要，我科配备从事HIV检测工作人员3名，其中专职工作管理人员2名，中级卫生技术职称人员2名，所有人员从业年限均在5年以上。并积极参加省级、市级举办的HIV检测技术培训，不断提高质量意识、技术水平和业务能力，保证HIV曹瑞峰寇燕波HIV筛查实验室工作管理程序对HIV筛查实验室工作全过程进行控制，保证检验工作符合规定要求，提供本实验室的检验工作，根据标本的来源不同分为采样检验和送样检验，根样品接收、分发和保管处理，执行本科程序文件《标本管理程序》和《标本检验人员按检验标准或作业指导书的要求按时完成检验任务，并按程序文件(七)、检验报告的编制、复核和签发按本科程序文件《检验报告管理程序》执行。(八)、检验方法控制可用经本科技术负责人批准的非标准检验方法进行。其他检验方法HIV筛查实验室工作流程图 HIV筛查实验室规章制度1、热爱党，热爱社会主义，坚持四项基本原则，全心全意为人民服务。2、努力学习政治，刻苦钻研业务，发扬救死扶伤，实行革命人道主义，对病人如亲人，态度和蔼，有问必答。3、热爱本职工作，服从分配，遵守劳动纪律，做到不迟到、不早退，不擅自离开工作岗位，不私自干私活。4、严格执行规章制度，尽职尽责，及时做好各项检验结果记录，自觉抵制1、岗位责任制是保证工作质量和医疗安全，提高工作效率的重要环节。建4、交接工作必须认真负责，须核对实物和记录，对工作一般情况、存在问6、新参加工作的职工，在未熟悉和掌握工作前不能独立工作不能顶岗位，7、建立HIV筛查实验室专用的精密仪器和重要设备专责岗位制，其他人不8、凡是一物多人使用的，除共同负责外，应指定一人为该岗位责任制负责副班人员负责协助正班人员做好实验室的所有日常工作，并负责对检验工作三、标本管理制度(1)、用一次性注射器(或真空采血管)抽取一定量静脉血，室温下自然放置1~2h,待血液凝固、血块收缩后再用3000r/min离心15min,吸出血清备用。肤后，迅速把滤纸片沾上，切勿让血液滴落在其(1)、用加有抗凝剂的真空采血管(或一次性注射器抽取静脉血，转移至加有抗凝剂的试管),反复轻摇，分离血浆和血细胞备用。(3)、用于核酸定性检测时，采集的抗凝全血应在4～8h内分离PBMC和血(2)、采集样品时应注意安全，建议采用真空采血管及蝶形(4)、应象操作未知传染风险样品一样，小心存放、拿取和使(二)样品的保存1、用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放于-20℃以下，短期(1周)内RNA检测的样品如需保存3个月以上应置于-80℃。(三)样品的运送(四)样品的接收1、含有感染性样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培2、核对样品与送检单，认真核对标本上病人姓名、年龄、性别、病区、床记录有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及检验要求。如果污染过重或者认为样品不能被接受，则应将样品安全废弃。并要4、打开标本容器时要小心，以防内容物泼溅。样品处理时若内容物有可能溅出，则应在生物安全柜中戴手套进行。同时应戴口罩、防护眼镜，以防皮肤或7、不符要求的标本，必须及时填写退回理由单，及时通知送样人，说明情况，重新留取。不符要求的标本与可疑含有感染性样品用后的包裹同检验后的标(五)标本检测1、离心机要使用密闭的罐和密封头，以防液体溢出或在超/高速离心时形成气溶胶。复核标本接收过程中的每一步骤，在检测过程中，应严格按照标准化操2、在标本足够的情况下，不能浪费、随意丢弃或损坏标本。应象操作未知检验标本先用含2-3g/L有效氯消毒剂浸泡半小时，再用高压锅高压消毒。四、试剂管理制度五、环境消毒隔离制度5、一次性医用器具包括采血针，注射器、尿杯、血红蛋白微量吸血吸管，应严格做好领发登记，注射器先浸泡消毒后由供应室一对一调换，统一处理，其余一次性器具浸泡消毒后装入污物袋送焚烧炉焚烧。6、检验人员在进行静脉抽血时应严格遵守无菌操作技术，操作前必须洗手必须戴好帽子与口罩，操作台和手被污染时应用肥皂和流水认真洗手，必要时用消毒液浸泡双手，酒精、碘酒瓶每周更换消毒两次。7、溢出试管外的血液，应立即用碘酒棉签擦拭干净，注意防止玻璃碎片刺伤手，并注意试管有无破裂。8、当针头和碎玻璃刺伤手时，用流水冲洗，挤出血水，应立即用碘9、实验室操作时应戴上手套。吸取标本，离心振荡等应严格按操作规程，防10、已检查标本与容器分别浸泡于次氯酸钠(2000mg/L)中两小时后，标本倾弃，一次性容器送焚烧，重复使用的经清洗消毒和灭菌后再使用，均要有记录。有毒化学试剂和放射性试剂使用后要经无害化处理，防止污染环境。11、非科室工作人员不准进入实验室，外来人员参观需经科主任同意方可进1、实验台消毒措施必须符合艾滋病实验室的通用生物安全要求。由专人按特定程序和方法进行清洁和消毒。2、台面的清洁消毒，保持清洁、湿式打扫。每天开始工作前用湿布抹擦1次，地面用湿拖把擦1次，禁用干抹干扫。抹布和拖把等清洁用具实验室专用，不得混用，用后洗净晾干，下班前用含氯消毒剂(次氯酸钠，含有效氯2000mg/L)、0.2～0.5%过氧乙酸或75%乙醇抹擦1次。也可用便捷式高强度紫外线消毒器近距3、应象操作未知传染风险样品一样进行消毒与灭菌，小心存放、拿取和使用所有可能有传染性的血液、质量控制和参考物质，若被上述物品明显污染，如具传染性的标本或培养物外溢，溅泼或器皿打破，洒落于台面，应立即用消毒液消毒，用5000mg/L有效氯消毒剂、过氧乙酸或乙醇洒于污染的台面，并使消毒干燥空气烘箱消毒(干烤消毒),140℃,保持2～3h。HIV最常用的化学消毒剂是含氯消毒剂(次氯酸钠，含有效氯2000~八、消毒液的配制及使用措施1、HIV实验室最常用的化学消毒剂是含氯消毒剂(次氯酸钠，含有效氯2、含氯消毒剂的配制：次氯酸钠原液使用前进行1:20～1:50稀释(2000-5000mg/L)或联昌84使用前进行1:10～1:25(2000-5000mg/L)稀释3、乙醇，俗称"酒精",能够杀灭多种细菌，对HIV病毒有一定的杀灭作用，4、过氧乙酸也是目前使用比较广泛的一种高效消毒剂，新鲜配置1消毒。0.04%的过氧乙酸用于实验室工作人员手浸泡1～20分钟，再用肥皂洗手。九、消防安全制度1、根据"谁主管、谁负责"的原则，实行科室负责制。2、主管领导和保卫科对全体职工经常进行消防安全教育，提高思想认识，3、严格执行《安全防火管理制度》各种火种与易燃易爆物品，必须严格分6、各种机电设备、高温电器设备、耐高压容器和设施，使用时必须有专人7、各防火区域设置的消防器材和设备，应定期进行检查，维修和更换，随8、任何人发现火、水灾等隐患者，必须及时向科领导报告。科主任及时向十、生物安全防护制度1、上岗工作人员应是经过岗前安全与技术培训，取得合格证，具有独立工2、进入实验室应穿隔离衣、戴手套，必要时(如对筛查阳性标本进行复测十一、职业暴露的防护及处理措施1.医务人员进行有可能接触病人血液、体液2.如有伤口，应当在伤口旁端轻轻挤压，尽可能挤出损伤处的血液，再用肥3.受伤部位的伤口冲洗后，应当用消毒液，如75%的酒精或者0.5%的碘伏等4.在暴露后的0周、第四周、第八周、第十二周及六个月时抽血进行检测艾5.预防性用药应当在发生艾滋病病毒职业暴露后尽早开始，最好在四小时内实施，最迟不得超过二十四小时；即使超过24小时，也应当实施预防性用药，连续使用28天。必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、批批检合格、在有效期内的试2、筛查方法目前国内外主要使用第三代(双抗原夹心法)试剂，少数使用第二代试剂。四代ELISA试剂)用于血源筛查。第四代ELISA试剂是最近发展起来的HIV抗原试剂相比，检出时间提前了4～9d。其优点在于能同时检测抗原抗体，降低血源随着对HIV感染者和AIDS病人抗逆转录病毒治疗的进展，及对无症状HIV感染者提供自愿咨询检测(VCT)的迫切需求，简便、快速的HIV检测方法被广泛应用。常用的主要有以下几种：①、明胶颗粒凝集试验(PA):PA是HIV血清抗体检测的一种简便方法，是将HIV抗原致敏明胶颗粒作为载体，与待检样品作用，混匀后保温(一般为室温)。当待检样品含有HIV抗体时，经抗原致敏的明胶颗粒与抗体发生抗原-抗体反应，共同致敏的PA试剂(AFDHIV-1/2PA),已经我国食品药品监督管理局(SFDA)分HIV-1型和HIV-2型，目前我国尚未引进。②、斑点EIA或称斑点ELISA(dot-EIA):以硝酸纤维膜为载体，将HIV抗原滴在膜上成点状，即为固相抗原。加血清样品作用，以后步骤同ELISA。阳性结果在膜上抗原部位显示出有色斑点。反应时间在10min以内，使用抗原量少。③、斑点免疫胶体金(或胶体硒)快速试验：与斑点EIA相似，也是以硝酸纤维膜为载体。区别在于不用酶标记抗体，而代之以红色的胶体金(或胶体硒)A蛋白，用渗滤法作为洗涤方法。试剂稳定，可室温长期保存。试验时不需任何设备，迅速、简便、特异性较好，敏感性约相当于中度敏感的ELISA,适用于应急检测、门诊急诊个体检测。目前已有在国内被SFDA批准注册的国外进口试剂④、艾滋病唾液检测卡：在硝酸纤维膜上包被人工合成的HIVgp41/gp36蛋白抗原，可同时检测含在唾液中的HIV-1/HIV-2抗体，原理为酶免疫间接法。主要检测唾液中的HIVIgA与IgG抗体，敏感性特异性与ELISA相近，可避免静脉穿刺。但样品预处理时间长且售价较高。以唾液为样品测定HIV抗体的ELISA、免疫印迹法(WB)试剂已经美国FDA批准。⑤、其它快速筛查试验方法：家庭HIV检测(HomeAccessSystem)等。3、尿液HIV抗体检测1996年美国FDA首次批准HIV-1尿液ELISA试剂，我国也正在研制尿液HIV抗体检测试剂。主要适用于静脉注射毒品(IDUs)人群和其它高危人群的大面积流行病学调查、监测。筛查阳性者仍需采血做确认试验才能确定。根据检测目的选用符合要求的筛查试剂对样品进行初筛和重复检测(复检)。5、初筛试验：以第三代ELISA(双抗原夹心法)为例。(1)实验准备：试验开始前将试剂和样品放置在室温(18~23℃),按实验室SOP做好试剂准备。磷酸盐缓冲液：若液体内有结晶，应放置在37℃直至溶解，用蒸馏水1:25稀释浓缩液，4℃保存2周。TMB底物液：使用前配制，TMB液和过氧化脲液等量混匀。1M硫酸终止液：85ml蒸馏水中加入5ml浓硫酸。备好试剂盒、待检样品和外部对照质控血清后，按试剂盒说明书以及质控和安全防护要求进行筛查检测。(2)实验操作①、装好所需使用数目的孔条，每孔均加入100μ1样品稀释液。设3个阴性对照孔，1个HIV-1阳性对照孔，若需要可再设1个HIV-2阳性对照孔。②、每孔加入50μ1待检样品及对照(对照要后加),未用孔用样品稀释液加满以溶解结合物球，以免堵塞洗板机孔。可震摇15S,37±2℃孵育60±5min。③、置洗板机上洗涤6遍(用洗液将反应孔完全加满，静置30~60S,共洗涤6遍，洗完后孔上方及底部不应残存液体，禁止在滤纸上拍干)。④、每孔加入100μl底物液，勿搅动，室温避光孵育30±2min。⑤、每孔加入100μl1M硫酸终止反应，充分混匀。⑥、在2h内置于酶标仪读数，单波长450nm,或双波长450/630nm测OD值。(3)实验结果①、阴性对照(NC),HIV-1阳性对照(PC1),HIV-2阳性对照(PC2)。NC必须<0.25方可用，排除NC≥0.25的值，计算NC平均值。NC界限范围：0.6倍NC均值<NC<1.4倍NC均值。②、符合以下条件的实验成立：两个以上的NC可用。PC1-NC均值≥0.4,PC2-NC均值≥0.4。③、Cutoff值=阴性对照均值+0.100。小于Cutoff为阴性，大于或等于Cutoff为阳性。(4)报告：对呈阴性反应的样品，可由实施检测的实验室出具HIV抗体阴性报告；对呈阳性反应的样品，须进行复检，不能出阳性报告。对初筛呈阳性反应的样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的筛筛查试剂原有试剂加另外一种筛查试剂告(附表1)。2),经1名检验人员和1名具有中级以上技术职称的人员审核签字。送当地艾滋1、HIV测定(胶体金法)结果的判定方法(3)、无效：如无红线(或只有反应线)出现，表明实验无效，须重新检测。2、HIV测定(ELISA法)结果的判定方法(1)、计算临界值CO(cut-off)值。(2)、临界值=阴性对照A均值+0.12(3)、正常情况下，阴性对照孔的OD值≤0.10(若1孔阴性对照的OD值>0.1应舍弃，若有2孔或2孔以上阴性对照的OD值>0.1,应重复实验。)。样品OD值<临界值者为HIV抗体阴性。(4)、正常情况下，阳性对照孔的OD值≥0.80(若1孔阳性对照的OD值<0.8应舍弃，若有2孔或2孔以上阳性对照的OD值<0.8,应重复实验。样品OD3、HIV测定(蛋白印迹法)结果的判定方法p32)带或至少有一条env带和一条gag(p55,p24,p18)带或至少有一条env带和一条gag带，一条pol带或至少2条env带。十四、检测结果报告规程3、初筛检测试剂必须是经国家食品药品监督管理局注册批准、中国药品生4、按照《全国艾滋病检测技术规范》的要求建立健全质量管理制度、实验5、检测结果报告前应填写好原始实验记录资料，包括试验日期，试验操作6、将试验结果存档保存，处理试验废物，擦净实验台，做好实验室消毒卫1)阴性报告；对呈阳性反应的样品，须进行复检，不能出阳性报告。8、复检试验：对初筛呈阳性反应的样品用原有试剂和另外一种不同原理或体筛查报告”(见附表1)阴性；如均呈阳性反应，或一阴一阳，则应按照《全国十五、检验结果的解释HIV抗体检测的结果有三种，分别是阳性、阴性和不确定，绝大多数情况1、表明一个人感染了HIV,具有传播性当一个人HIV抗体检测结果为阳性，表明这个人已经感染了HIV,具有把HIV传播给别人的可能。一个人是否感染了HIV,阳性结果并非就意味着一个人已经得了艾滋病，也不能说明患者处于疾病发展的哪个阶段。若要判断疾病的3、对于刚出生的婴儿，情况则不一样刚出生的婴儿，不能根据其HIV抗体主要是由该婴儿从其母体获得，不管他(她)感染HIV与否，只要其母亲感染了HIV,母体内存在HIV抗体，婴儿出生后HIV抗体检测-般都是阳性。如果要判断一个婴儿是否感染HIV,则应该等到一岁半(18个月)以后再做检测，检测结果阳性时才能说明该婴儿感染了HIV。HIV从感染到能够检测出来有一段时期，这段时期称为窗口期，窗口期一般是2周到2个月。拿到一个阴性结果，首先要确定窗口期是否已过，如果确定最后-次危险行为距抽血作检测时已过窗口期，这时基本可以确定检测者未感染HIV。如果窗口期末过或者抽血化验之后又发生了危险行具或未采取保护措施的性行为),同样也不能确定抽血者没有感染HIV。十六、检测数据的记录与保存要时记录通信地址)等。十七、呈阳性反应标本的处理程序(可用附表1);对初筛呈阳性反应的样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同查报告”(见附表1)阴性；如均呈阳性反应，或一阴一阳，则应按照《全国HIV检测管理规范》的要求送艾滋病确认实验室进应者不能出阳性报告，可出具“HIV抗体待复查”报告(附表1)。2、初筛试验呈阳性反应样品，需送上级实验室进行复测或确认，需要填写“HIV抗体复测送检单”(附表2),经实验室负责人和1名专业检验人员审核签字。送县疾病控制中心艾滋病筛查中心实验室，或在本实验室复检后直接送安阳3、初筛试验呈阳性反应样品，进一步送检、本室冰冻保存后不在需要的样5、所有废弃物应按照HIV污染物品处理。由专人按本实验室制定的程序和6、严格HIV实验室的废弃物的消毒处理制度，做好登记。7、检验科主任定期负责检查，操作处理不当的按照科室有关规定处罚1、艾滋病筛查实验室和艾滋病检测点应于每季度首月5日前填写“HIV抗体检测数季报表”(附表6),向艾滋病筛查中心实验室报告上季度检测情况。没有未设置艾滋病筛查中心实验室的地区每季首月5日前报告上季检测情况每季首月5日前每季首月5日前每季首月15日前每季首月10日前报告上每季首月10日前艾滋病确认2、艾滋病筛查中心实验室应于每季度首月10日前将本实验室和本辖区内各筛查实验室上季度报告的检测情况(附表6)汇总，报告艾滋病确认中心实验室。3、艾滋病确认实验室应于每季度首月10日前将上季度检测情况汇总后(附表6),报告当地艾滋病确认中心实验室和同级卫生行政部门。4、艾滋病确认中心实验室应及时收集、整理和分析辖区内HIV抗体检测情况，于每季首月15日前向省级卫生行政部门和中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心(简称中国疾控中心性艾中心)参比实验室报告。同时，按艾滋病疫情报告的有关规定上报疫情。5、在非送检样品中(如专项调查与研究等)发现的艾滋病病毒抗体阳性者，应向所在地的省疾病预防控制中心报告，并填写“HIV抗体确认检测报告单”(附表3),报中国疾控中心性艾中心参比实验室。6、实验室上报检测结果的同时，应随时报同级监测人员，以便及时随访调(一)、追踪人群1、有明确受血或血液制品史，并排除性传播、母婴传播、经国家确证实验室确认的艾滋病病毒抗体阳性者；2、无偿献血工作中发现的艾滋病病毒抗体阳性献血人员。(二)、工作步骤1、对供血或受血的追访，须以健康跟踪服务或科研的名义进行，系统体检并采血预备有关的检验。一次，连续2次。二十、保密程序制度资料(包括送检单、各种实验记录、感染者档案、报告单的发放),不得擅自修二十一、质量管理制度2、积极参加省临检中心组织的室间质控活动，对每5、商品化的试剂盒的申购由专业组长负责申报，每月一次报科主任审批，7、当日发出的全部检验报告单须经当日科室总值班人员严格审核后方可发8、科室在完成严格的室内、室间质量控制体系的同时，应逐步建立全面质二十二、室内质控失控分析管理制度室内质控出现失控时，应填写失控报告单，并上交专业主管，由专业主管做失控信号的出现受多种因素的影响，这些因素包括操作上的失误、试剂、校准物、质控品的失效，仪器维护不良以及采用的质控规则、质控限范围、一次测定的质控标本数等等。失控信号一旦出现就意味着与测定质控品相关的那批患者标本报告可能作废。此时，首先要尽量查明导致的原因，然后再随机挑选出一定比例(例如5-10%)的患者标本进行重新测定，最后根据既定标准判断先前测定结果是否可接受，对失控做出恰当的判断。对判断为真失控的情况，应该在重做质控结果在控以后，对相应的所有失控患者标本进行重新测定。如失控信号被判断为假失控时，常规测定报告可以按原先测定结果发出，不必重做。当得到失控信号时，可以采用如一、立即重测定同一质控品。此步是主要是用以查明人为误差，每一步都认真仔细操作，以查明质控的原因；另外，这一步还可以查出偶然误差，如是偶然误差，则重测的结果应控。如果重测结果仍不在允许范围，则可以进行下一步操二、新开一瓶质控品，重测失控项目。如果质控品结果正常，那么原来那瓶质控血清可能过期或在室温放置时间过长而变质或者被污染。如果结果仍不在允许范围，则进行下一步。三、进行仪器维护，重测失控项目。检查仪器状态，查明光源是否需要更换，比色杯是否需要清洗或更换，对仪器进行清洗等维护。另外还要检查试剂，此时可更换试剂以查明原因。如果结果仍不在允许范围，则进行下一步。四、重新校准，重测失控项目。用新的校准液校准仪器，排除校准液的原因。五、请实际工作经验丰富的工作人员或专家的帮助。如果前五步都未能得到在控结果，那可能是仪器或试剂的原因，只有和仪器或试剂厂家联系请求技术支援。1、质控血清的制备和保存(以ELISA试验检测HIV抗体为例)在每次实验中必须包含有内部对照质控血清和外部对照质控血清。(1)、内部对照质控血清指试剂盒内提供的阳性和阴性对照血清。内部对照是质量控制的基础。每一次检测必须使用内部对照，而且只能在同批号的试剂盒一年使用量配制(可加入不影响检测结果的防腐剂)用0.2μm滤膜过滤除菌。二十四、仪器的使用维护HIV筛查实验室仪器的标准操作规程1.仪器原理和适用范围1.1采用垂直光路进行光电比色，检测标准液和待检物质的吸光度，经内置微机进行分析计算，测出待检物质的含量。1.2适用于ELISA检测、微生物微孔板培养检测、化学或生物化学微量分析法检测。1.3仪器工作条件：适宜温度10℃~30℃;相对湿度<70%;电源220×1.4环境条件——防尘、防磁、防震、避强光、无腐蚀性气体。2.技术参数2.1波长：100nm-700nm;配置有405nm、450nm、492nm、630nm;2.2滤光片特性：正确度±3.0nm;半宽度≤12nm;峰值透射比≥35%;2.3测量范围及吸光度误差：测量范围0.1～3.0A;吸光度误差在0.1～1.0A时为1.0%(±0.01A)、1.0～2.0A时为2.0%(0.02A)、2.0～3.0A时为10.0% 2.4线性误差：线性误差0.1～1.0A时为±1.25%、1.0～2.0A时为±2.0%、2.0～3.0A时为±8.0%;2.7工作方式：单波长或双波长；2.8显示：120×100英文触摸屏幕；2.9打印：外置打印；2.11输出：原始吸光度、定性判定结果、S/CO值、浓度值及质控值；3.操作步骤3.1打开电源后仪器进入自检程序，自检正常时荧屏显示主菜单，应预热20分钟以上后仪器方能稳定，其后进行实际检测操作；3.2根据仪器《使用说明书》进行编程，对检测方式(临界值检测方式、浓度检测方式、吸光度检测方式)的项目设置、孔位设置、波长选择、计算方式、阴性对照值限定、定性方式选择、振板方式、无效性判断、孔位、报告方式、标准值设置等进行编程，请记住您设置的检测项目及方式的程序编号，以便能直接调用；3.3根据预先设置的检测项目及方式的程序编号，或按3.2要求临时实用编程，按照仪器《使用说明书》进行人机对话操作。3.4按样品测试键，选择布板方式、振动方式、测定项目，输入样品号，设定空白、质控、对照等，按开始键开始检测，显示数据后按打印键打印。3.5若使用外接电脑的酶标仪软件接受、显示、打印、储存，按其说明书操3.6检测结束后，按"返回键"返回主菜单进入关闭程序，等待仪器提示关闭电源，拔下电源插头，罩上防尘罩。4.注意事项4.1ELX-800酶标分析仪安全分类为I类B型，管理分类为II类，出厂前业经严格调试与检验，用户必须在专业技术人员指导下开机检修；4.2电源必须接有可靠的接地线，更换滤光片、调试光源灯应在专业技术人员指导下进行，更换保险管前应切断电源，换用相应规格的保险管。5.仪器维护5.1日常维护——酶板托盘日常应注意清洁勿使污染，仪器外表有污物时，应用中性洗涤剂搽除，并及时用清水抹净。5.2定期、期间核查按仪器设备管理程序进行，定期每年一次、其间1-2次，采用有证标准物质进行核查。6.相关记录仪器使用记录、定期维护记录、期间核查记录、校准记录美国宝特ELX-800酶标仪日常操作指南10代表检测10个样本数。5.选择样本数后，连续按ENTER(回车键)3次，检测板载入;;;1、平常不用时，拔掉电源插头。2、使用完毕，一定要拿下测试完的反应板，千万不要将反应板留在载物台上，并且要把载物台弹进酶标仪内。3、若有液体溅到载物台或酶标仪外壁，应用湿抹布及时擦去。酶标仪软件操作帮助软件打开先进入主界面如下图：编美检验中文报告系统一陶标仪-BR680-【报告录入—2006/09/15]输入查询C)统计2)工具T)质控Q)字典Q)设置(Q)帮动X)检验日期2006/09/15检验项目0项结果ODCutoff列表比较输入通讯标本号姓名住院号病人类型姓名性别年龄科室酶标仪设置项目在项目里进去如下图：科室编美检验中文报告系统-陶标仪-BR680-[检验项目维护]重接印代号名称Ok乙开表面抗原查询阳性表总汇表统计金项目注销?帮勘项目代号HsA参考值阴性结果调整系数1.0000打印形式原始检输结果测试方法参考值与性别有关参考值与标本有关打印P)自动加载)肺导出@制导入①退出×酶标仪设项目需要设项目的公式，在参数里设置如图。比如设HBsAg先要对着试剂的说明书设CUTOFF公式然后可以设置下弱阳性判断公式和阳性判断公式，如有些项目不需要弱阳性可以不填弱阳性公式。阴性对照的上下限和阳性对照的上下限也是根据试剂说明书来的，HbsAg里试剂说明书里规定为阴性对照做出来低于0.05的都按0.05计算那我们就设置为阴性对照下限为0.05。性对照下限为0.05。乙肝表面抗原乙肝表面抗体乙肝病毒前S1抗原阴性照、空百语测试模式[·终点法で两点法空白形式·空气试剂存盘(S)基本资料参数常用取值通道号移动模式[·连续で步进B阴性阴性说明：公式中阴、阳对滤光片波长对照表..2滤光片设置在滤光片波长对照表里设置按照仪器的滤光片来设置。滤光片波长对照表1234波长试剂维护里可以填试剂的批号，厂商，有效期。设置好以后按重启接口会出来酶标仪操作界面。测试项目选你需要做的项目，在下面的微孔板里布酶标板里标本放的位置一定要和酶标板里放的一样。板子布好后可以存为模板用于以后做的时候不用重新布板。如做不了96个标本可以在标本号区间里选取当天所做标本的数量，全部设置好后就可以按测试读板。进板方式连续空白形式空气试剂厂商测试方法测试板号060915HBsAg004试剂批号200308024712NC863NC4712NC863NC9577BCDEFGH测试好数据如下图：黑的就代表阴性，咖啡色代表弱阳性，红的代表阳性。板号：23B0.2160.192CDEFGH560.1040.05070.2230.286890.132按预览可以看原始结果，会提示你数据是否要入库，如板子做的好的话就直接入库，入库就可以入到病人信息里了，如做的不好可以先按否预览原始结果。如下3图：热0音乐Y输入Z)查询C)统计2)工具①质控(Q)字典@)设置(Q)帮动g)重启搜口批打印批输入查询阳性表总汇表E烧计金项目注销耐勤检验日期2006/09/15标本号1检验项目1项结果ODCutoff列表比较输入通讯病人类型病历号姓名性别费别科室床号标本类型申请单号年龄岁打印(P2)审核Q9)标本号姓名住院号类型床号科室送检时间采样时间报告日期检验医师核对医生诊断备注标本状态其他信息未审核未打印日新增Q6)X删除C7)设置①等雨上海瑞美电扇科按有用公司未注册systandis)开始国属标仪软件操作帮块美检检中文报告..都市水块读-上笔Pgp)下笔m)官1官1放大(3)络小(4)22阴性对照：0.2210阳性对照：1.7250NCNC12NCNC1234 678土9+CC查询测试日期2006/09/15酶标仪参数设定通讯基本参数波特率9600数据位8位停止位1位校验位N无校验通讯模式0文本模式秒秒接收缓冲区秒秒命令超时(短)读板超时(长)80数据二次处理(为空表示保持原始结果)错误结果表示为结果错误阳性结果表示为阳性弱阳性结果表示为弱阳性阴性结果表示为阴性正常结果表示为正常最大OD值999原始结果报告纸张defaultpapersize数据对应目标仪器(目标仪器为空时使用默认值，不要随意改动!)□原始结果隐藏S/CO值□原始结果隐藏阴性结果标识定量项目负值结果替代为0如酶标仪要做定量项目需在项目参数里设置这个项目性质为定量如下图：编美检验中文报告系统一隔标仪-BR680代号名称1测试波长1450住院号类参考波长4630流光片波长对照表弱阳性公式00>=(2.1*MC)*0.7有效性校验阴性对照下限0.050000阳性对照下限阴性对照上限阳性对照上限项目性质○定性◎定量移动模式◎连续○步进测试模式◎终点法◎两点法振板频率(◎高○中○低空白形式◎空气○试剂振板时间5秒日新增8)自动加新4)设好后重启接口酶标仪测试板界面里会跳出浓度设定如下图：晦标仪测试BR680测试项目测试项目KBsAg乙肝表面抗原振板频率高阳性公式参考波长β30(4)C空白对照ECC阳性对照FCC质控标本qc确定测试(D清空(C)查询(Q)2ABCDEYGH389在酶标排板时要把标准品列上，如下图ST就代表标准品：酶标仪测试BR680测试项目测试项目KBsAg乙肝表面抗原进板方式庭续阳性公式630(4)空白形式空气C空白对照BCC阳性对照FC确定测试(D清空(C)查询(Q)ABCDEYGHST1ST2ST3ST4ST512234567893浓度设定(D)标准品浓度48Ⅱ、TECAN洗板机的标准操作程序(SOP)实验室名称制定日期嘉峪关市第二人民医院检验科HIV筛查实验室洗板机标准操作程序NEYJH-SOP-YQ-0022007年07月26日规范洗板机的操作程序，保证洗板机的正常状态。【适用范围】本实验室洗板机的操作。【操作人员】本实验室实验人员。【操作步骤】a.打开电源，启动洗板机，待自动停止后，视屏显示[Run]:A,-+,洗板机启动运行c.按-+键可以任意调节数字大小，按照你所需要的数字，可通过-+键获得。临床实验室yes,按yes整板洗涤(即12排96孔洗涤),洗板机将按照程序进行5-6次的重复洗涤，洗涤完成后洗板机将自动发出鸣叫声，提示洗板结束。f.如果洗涤不是整板，通过-,+调节到所需要的板条数，按yes键洗板机将按照所设定的板条数进行5-6次的重复洗涤，洗涤完成临床实验室后洗板机将自动发出鸣叫声，提示洗板结束。g.下班时用Prime:Ch1清晰通道。【洗板机的维护保养】1.平常不用时，拔掉电源插头。2.每天洗板机工作结束时，要对内外其进行清洁，用湿抹布擦洗洗板机的外壁及载物台，以保证其洁净。用蒸馏水将所有的管道清洗一遍，防止洗液的结晶3.及时倒弃废液，以免废液瓶过满致使废液回流而造成洗板机的故障。4.保证待洗的反应板的孔边缘不要过高且水平，以免造成吸液针损伤。5.定期将洗液及废液管道拆卸下来进行冲洗，以保证管道的通畅。Ⅲ、可调式移液器的标准操作程序(SOP)【目的】规范仪器设备的操作程序，保证加样器的正常状态。【操作步骤】一、设定容量值：转动加样器的调节旋钮，反时针方向转动旋钮，可提高设定移液量。顺时针方向转动旋钮，可降低设定移液量。在调整设定移液量的旋钮时，不要用力过猛，并应注意使移液器显示的数值不超过其可调范围。二、预洗：当装上一个新吸头时应预洗吸头，先吸入两次液体并排回原容器2、取液之前，所取液体应在室温(15℃-25℃)平衡。1、一般维护可用中性洗涤剂清洁，或者用60%的异丙醇，然后用蒸馏水反【目的】【适用范围】【操作步骤】二、杀菌操作：按一下"杀菌(UV)"键，语音提示："杀菌启动",紫外灯打开进行杀菌，50分钟后再按一下"杀菌"键，语音提示："杀菌关闭"。关),可升降前视窗，当前视窗达到200MM高度时会自动停下(此时前视窗下沿与窗高标志线相齐),如继续升降前视窗，约延时1S后前视窗会继续运动，直到松开手动开关为止。在风机运转状态下，当前视窗高度超过或低于200时，系统联锁报警启动，控制面板上的"窗高异常"指示灯亮，语音提示："窗高异常",此时应将前视窗调整到200高度，报警自动消除。四、风机启动/停止操作：按键“风机WM”,风异常",这是正常情况。如果风机运转正常，且各过滤器状态良好，约1分钟后，的吸入风速值和下降风速值。(注意：风机启动运行10分热稳定后再开始工作。)五、辅助照明操作：按下"照明LIGHT"键，语音提示："照明启动",照明六、柜内插座操作：当需要使用安全柜内插座时，按下"插座SOCKET"键，语音提示："插排启动",柜内右下方的电源插座通电。七、键盘锁定功能操作：按住"键锁"键约2S后，指示灯亮，语音提示：“键盘锁定”,此时前面开启的键盘已锁定。当需要解锁时按住“键锁”键约2S后，语音提示："键盘解锁",指示灯灭，此时，方可自由操作控制面板上的各功妥善进行生物安全柜的维护，可以为实验室提供有效的安全保障。具体方法1、日常维护可用70%的乙醇，或其他中性洗涤剂将生物安全柜的内、外部3、在生物安全柜工作时，通常打开前视窗检查其报警系统是否正常。正常4、不要用过强的清洁剂清洁柜体外部，强溶解性或强磨损性清洁剂可能会5、不锈钢上顽固的污渍清除时，可以用MEK(甲基-乙基-酮)。但是，必须在清除污渍后立即用清水和中性清洁剂进行清洗6、检查日光灯和紫外线灯管，确定他们的正常工作。日光灯和紫外线灯管在长时间使用后，可以用酒精擦洗灯管表面的污渍，注意先断电，以防触电。紫本电热恒温水浴箱主要用于科研单位、医疗单位及化验所检查化验病理血清等用。2.技术性能：工作环境：常温常压条件下正常工作。技术指标：温度调节范围：37℃~65℃3.1使用是必须加入温水，可缩短加热时间和节约用电。3.2打开电源开关，电源指示灯亮表示电源接通。3.3旋转恒温控制器旋钮，加热指示灯亮表示电源接通，当温度表上的温度达到所需使用的温度时，将恒温控制器的旋钮调整在恒温指示灯忽亮忽熄点，待数分钟后即能自动恒温控制。3.4恒温控制器的刻度，仅可作温度对照指示，并非温度指示刻度。4.点检程序：4.1为保证水浴箱温度的准确性必须每日使用温度计测量水浴箱内水温，并做好日温度记录。4.2每半年由设备科检测校正一次，且附有原始记录。5.1箱外壳必须有效接地。5.2在未加水前，切勿开电源，以防止电热管内的电热丝烧坏。5.3非必要时，请勿拆开右册盖板，以利安全。离心机操作维护规程1.仪器分析原理和适用范围1.1原理：主要利用其高速旋转时产生的高离心力场的作用，可将不同大小或不同密度的颗粒分开。颗粒是指细胞、细胞器或病毒、大分子等。1.2适用范围：血清、血浆或体液标本的离心处理。2.仪器性能参数2.1最大转速：7000rpm2.2时间控制：0-30min/连续/短时运转2.3最大容量：4×60×7ml2.5最大离心力：4920g2.6尺寸(DxWxH):460mm×365mm×300mm2.7重量：41Kg3.操作规程3.1样品准备：未抗凝标本垂直放置30-60分钟后离心。3.2标本配平。3.3标本放入离心机。3.4盖上离心机盖，锁上安全锁。3.5打开离心机电源，设定离心转速及离心时间。3.6一般检测项目的未抗凝血离心3000转(rpm)7分钟或2400转(rpm)15分钟。抗凝血或特殊检测项目的样本离心按作业指导书设定。3.7待离心机转速停止后或离心转速降至0时，轻轻取出标本，关闭离心机3.8离心后立即将标本转移至干净不含抗凝剂或防腐剂的试管，同时此管应具有可识别标签。4.维护保养项目：每日用软布和中性洗涤剂清洁仪器内外表面，离心转筒每周及需要时消毒。5.校准：厂家校准。6.相关记录：仪器使用记录、定期维护记录、期间核查记录、校准记录本灭菌器用于医院，生物实验室等进行常规湿热灭菌。无需操作人员看管，全部灭菌过程可自动完成，工作结束后有声音提示。(二)高压蒸汽灭菌器主要技术参数：工作温度115℃~132℃灭菌时间0～60分钟可调工作电压额定压力内桶容积外型尺寸本灭菌器为内排汽式全自动控制，工作中产生的废汽由随机配代的废水桶回收，不会向屋内排放。门锁紧为搬捍推拉快速锁紧机构，锁门快捷轻便，并设有锁紧到位指示，确保安全。压力保险锁会在锅体内有压力时自动锁闭门盖。灭菌温度及灭菌时间可根据需要随意设定。本机工作温度采用压力式控制，工作时更为安全可靠。(四)高压蒸汽灭菌器使用方法：配带的排汽管插入机器下部的排汽口一端放入随机配带的废汽回收桶内，并将桶内放入一些水使管口没入水中(任何水皆可，此水为工作时冷凝用水，水满时可倒掉)。2、灭菌操作：2.1检查本机各部位有无异常并将各电源开关按键使其处在关断状态，将电源插头插入插座。注：供电线路要满足15A的供电需求；2.2打开电源开关，电源指示灯亮；2.3打开门盖，倒入蒸馏水至水位灯亮；同时将待灭菌物品放入。注意：每次开机前应观察水位灯是否点亮否则应及时补水防止干烧。2.4盖好门盖将门锁搬捍向左侧搬动，门位灯熄灭即可；2.5按需要设定好灭菌温度、灭菌时间，按下启动键，键灯及加热灯亮表示开始工作；2.6当温度到达灭菌温度时计时器开始计时，机内温度进入恒温状态，开始灭菌；2.7计时结束后，发出灭菌结束的声音提示并开始减压；2.8观察压力表指针为零时应及时打开门盖，取3、高压蒸汽灭菌器故障处理①工作进程中，若出现异常，按住故障键即可停止加热同时排除压力；②机内压力超高时，超压保护系统会自动停止加热，压力回落后会自动恢复。③工作时如迂突然停电会终断本次工作程序。如若要取出物品可按住手动排阀压力减至零时可打开门盖。(五)高压蒸汽灭菌器维护、保养和存放①本机工作用水尽量使用蒸馏水，特别是水咸较大的自来水不可用。(如使用自来水视不同水质而定可否);②锅体内底部的测水电极应经常保持清洁，特别是经常使用自来水的用户，应定期擦拭；③电源开关设有漏电保护器，每月应进行一次漏电保护测试，以确保功能正常；④本机若长期停用，应将锅体内及废水桶内的水排HIV筛查实验室检测标准操作规程I、HIV测定(胶体金法)抗体，用于帮助检测受感染个体的HIV-1和HIV-2抗体。本品检测阳性者，需进利用双抗原夹心法检测HIV抗体。标本加入反应板，若标本中含有HIV抗体时，先与金标抗原反应，形成抗体-金标抗体复合物，在虹吸作用下向前移动，遇到包被抗原形成抗原-抗体-金标抗原复合物，并(1)标本类型：血清。(3)标本储存和运输：新鲜血清2～8℃贮存时间不超过72小时。(1)试剂名称：人类免疫缺陷病毒(HIV-1+2)抗体诊断试剂(胶体金法)。(3)包装规格：1个测试/包装袋；25个测试/盒。(4)试剂盒组成：单人份包装测试板，每盒25人份。说明书一份。(2)、用塑料吸管吸2-3滴血清标本(70-100微升)加入标本孔中。其他体液或混合样品可干扰反应，不可用EDTA抗凝的全血血浆。正常人为阴性监测血清或血浆中的HIV-1和HIV-2抗体，用于帮助检测受感染个体的HIV-1和HIV-2抗体。本品检测阳性者，需进一步确证。必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有"检定合格"防伪标1、检验目的：应用双抗原夹心酶联免疫法原理(ELISA)定性检测人血清、血浆标本中的HIV(1+2)型抗体的测定，用于HIV感染的辅助诊断，抗HIV药物治疗的效果的监测。采用夹心ELISA方法检测血清或血浆标本中人类免疫缺陷病毒HIV(1+2)型抗体，预包被高纯度基因重组HIV(1+2)型抗原，可与标本中的抗-HIV抗体反应，加入HRP标记HIV(1+2)型抗体抗原结合，形成抗原一抗体一酶标抗原复合物，然后加入TMB底物产生显色反应。通过酶标仪检测吸光度(OD值),根据OD值判断HIV抗体的存在与否。3、性能参数灵敏度高(0.5ng/ml)(1)标本类型：血清，血浆。(2)标本采集：见标本采集手册(3)标本储存和运输：室温放置不超过8小时，2-8℃不超过72小时，-20℃可长期保存，应避免反复冻融(4)标本拒收状态：细菌污染，严重溶血或脂血标本不能作测定。(1)试剂名称：人类免疫缺陷病毒HIV(1+2)型抗体诊断试剂盒。(2)试剂生产厂家：北京万泰生物药业有限公司(3)包装规格：96T/Kit性及阴性对照血清；④、显色剂A液和B液；⑤、此外还有浓缩洗涤液、终止液、移液器：上海求精，每年由国家计量单位进行一次校准。8、校准程序送嘉峪关市计量检测所校准①、配液：将50ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释至1000ml备用。②、编号：将样品对应微孔按序编号，每板设阴性对照3孔、阳性对照I型、Ⅱ型各1孔，空白对照1孔。③、加样：分别在相应孔加入待检标本、阴性、阳性对照100μ1,用封板膜封板后置37℃温育30min。④、洗涤：小心把封板膜揭去，用洗板机选择5次程序，洗板后拍干。⑤、加酶：每孔加酶结合物100μl(空白对照孔除外),充分混匀，用封板膜封板后置37℃温育30min。⑥、洗涤：小心把封板膜揭去，用洗板机选择5次程序，洗板后拍干。。⑦、显色：每孔加入显色剂A液和B液各50μ1,轻轻振荡混匀，封板后置37℃避光显色15min。⑧、测定：每孔加终止液50μl,轻轻振荡混匀。设定酶标仪波长为450nm(建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm),空白调零，读取各孔OD值。⑨、判断结果：计算临界值(cut-off)(CO)值。临界值=阴性对照A均值+0.12正常情况下，阴性对照孔的OD值≤0.10(若1孔阴性对照的OD值>0.1应舍弃，若有2孔或2孔以上阴性对照的OD值>0.1,应重复实验。)。样品OD值<临界值者为HIV抗体阴性。正常情况下，阳性对照孔的OD值≥0.80(若1孔阳性对照的OD值<0.8应舍弃，若有2孔或2孔以上阳性对照的OD值<0.8,应重复实验。样品OD值≥临界值者为HIV抗体阳性。注意：对于筛查阳性标本，应重新取样双孔复试，复试阳性者应按照《全国HIV检测管理规范》送HIV确证实验室进行确证试验。每块板设阴阳性及空白对照，并于每次试验用自制质控血清作质控，将质控血清孔OD值采用"即刻法"计算或标在质控图上，如质控有效，表明试验可靠；如失控，则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，12、生物参考区间正常人阴性。13、患者检验结果的可报告区间阳性表示HIV病毒感染。14、临床意义用于HIV感染的辅助诊断，抗HIV药物治疗的效果的监测。按规定必须使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有"检定合格"防伪标应用双抗原夹心酶联免疫法原理(ELISA)定性检测人血清、血浆标本中的HIV(1+2)型抗体的测定，用于HIV感染的辅助诊断，抗HIV药物治疗的效果的采用夹心ELISA方法检测血清或血浆标本中人类免疫缺陷病毒HIV(1+2)型应，加入HRP标记HIV(1+2)型抗体抗原结合，形成抗原一抗体一酶标抗原复合物，然后加入TMB底物产生显色反应。通过酶标仪检测吸光度(OD值),根据OD灵敏度高(0.5ng/ml)(1)标本类型：血清，血浆。(2)标本采集：见标本采集手册(3)标本储存和运输：室温放置不超过8小时，2-8℃不超过72小时，-20℃(4)标本拒收状态：细菌污染，严重溶血或脂血标本不能作测定。(1)试剂名称：人类免疫缺陷病毒HIV(1+2)型抗体诊断试剂盒。(2)试剂生产厂家：上海科华生物工程股份有限公司①、配液：将50ml浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水25倍稀释至1000ml备②、编号：将样品对应微孔按序编号，每板设阴性对照2孔、阳性对照3孔，空白对照2孔。③、加样：分别在相应孔加入待检标本、阴性、阳性对照100μ1,用封板膜封板后置37℃温育60min。④、洗涤：小心把封板膜揭去，用洗板机选择5次程序，洗板后在干净纱布⑤、加酶：每孔加酶结合物100μ1(空白对照孔除外),充分混匀，用封板膜封板后置37℃温育30min。⑥、洗涤：小心把封板膜揭去，用洗板机选择5次程序，洗板后在干净纱布⑦、显色：每孔加入底物缓冲液50μ1,TMB50μ1,轻轻振荡混匀，封板后置37℃避光显色10min。⑧、测定：每孔加终止液50μ1,轻轻振荡混匀。设定酶标仪波长为450nm(建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm),空白调零，读取各孔OD值。⑨、判断结果：计算临界值(cut-off)值。临界值=阳性对照值×10%。(若阳性对照OD值>2.5按2.5计算)正常情况下，阴性对照孔的OD值≤0.08。样品OD值<临界值者为HIV抗体阴性。若1孔阴性对照的OD值>0.08应舍弃，若有2孔或2孔以上阴性对照的OD值>0.08,应重复实验。正常情况下，阳性对照孔的OD值≥0.80。样品OD值≥临界值者为HIV抗体阳性。若1孔阳性对照的OD值<0.8应舍弃，若有2孔或2孔以上阳性对照的OD值<0.8,应重复实验。注意：对于筛查阳性标本，应重新取样双孔复试，复试阳性者应按照《全国HIV检测管理规范》送HIV确证实验室进行确证试验。每块板设阴阳性及空白对照，并于每次试验用自制质控血清作质控，将质控血清孔OD值采用"即刻法"计算或标在质控图上，如质控有效，表明试验可靠；如失控，则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。12、生物参考区间正常人阴性。13、患者检验结果的可报告区间阳性表示HIV病毒感染。14、临床意义用于HIV感染的辅助诊断，抗HIV药物治疗的效果的监测。必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有"检定合格"防伪标签的试剂。第46页共81页1.检验目的主要是用于人类免疫缺陷病毒的的诊断、了解病毒感染者的恢复情况、疗效观察及预后评估。2.方法原理采用ELISA夹心法，反应的微孔板包被基因工程重组HIVAg,加入待测血液，洗板后，再加入HIVAg-HRP,与抗原形成结合，加入底物TMB时显色，判断阴阳性结果。3.性能指标此方法快速简便、特异性强、检测灵敏度度0.5NCU/ml。4.标本收集4.1标本类型：静脉血或动脉血的血清或血浆标本均可作为检测标本(抗凝剂可用肝素钠、枸橼酸钠、ACD、CPDA-1或EDTA,抗凝剂的质量应符合化试药品要求——化学纯或分析纯，使用的比例以厂家推荐为准);其他体液如尿液、唾液、精液、羊水、胸水、腹水、乳汁等体液可以作为检测标本，但加热灭活的血清和血库的库存血则不宜作为检测标本。4.2标本留取：以空腹为宜，收到标本后最好立即离心留取血清或血浆(凝固血应待其充分凝固后收集血清),不能有残留的红细胞、纤维蛋白丝，使用肝素治疗的病人宜在肝素治疗前抽血。4.3标本保存：留取的标本最好在3小时内检测，不能立即检测的应放置于2-8℃最长达14天(可以含有凝块但要密闭以防蒸发),或者-10℃最长达14天(不能反复冻融也不能含有凝块和红细胞)。4.4标本容器：盛放标本的容器应为洁净的一次性真空采血管、玻璃试管、一次性的不同规格的塑料离心管4.5标本外送：如涉及到需要外送的标本，必须以规定的容器(0.5ml塑料离心管)存放并密封，并根据邮寄规则和要求进行包装，运送时还要放入冰袋(2-8℃)或干冰(-10℃)由专人运送至指定地点指定接收人。4.6拒收标本：凡与4.1-4.5所述内容不符的标本，检验人员应向临床或就诊者说明拒收标本的原因，并提出解决的方案或建议。5.分析系统5.1分析仪器：为美国宝特公司提供的ELX-800型酶标仪，仪器校准请参见6.1每孔加入待测标本50微升。6.2充分混匀，封板，置37℃孵育60分钟。6.3手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复5次后拍干。6.4除空白对照孔外，每孔加入酶结合物50微升，充分混匀，封板，置37℃孵育306.5手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复5次后拍干。6.6每孔加显色剂A液、B液各50微升，充分混匀，封板，置37℃孵育15分钟。6.7每孔加入终止液50微升，混匀。7.1每次实验设阴性、阳性各2孔，并设空白对照1孔随常规标本一起检测。7.2质控结果登记到本年度的"免疫室定性检测项目室内质控登记表"。过程；失控情况处理及原因分析详见8"失控处理"。7.4每月进行质控小结。并将原始数据打印和存盘留档。控报告单，上交专业室主管(组长),由专业室主管(组长)做出是否发出或重测与质控品照物以外的原因则应判为真失控，与对照物相关的同批次病人标本重新检测；如是对照物本身的原因，则判为假失控，与对照物相关的同批次病人标本不必重测，可以发出报告。当失控信号出现时，可以采取以下步骤去寻找原因：8.2.1立即重测同一对照物。此法主要用于查明人为误差，每一步都应该认真仔细的操作，以查明失控的原因；另外，这一步还可以查出偶然误差，如是偶然误差，则重测的质控结果应在允许范围(在控),可以认为该批次的病人标本不必重测。如仍不在允许范围则可以进行下一步。8.2.2新开一瓶对照物，重测失控项目。如果新开的对照血清结果正常，那么原来那瓶对照血清可能过期或在室温放置时间过长而变质，或者被污染，此时可以认为该批次病人标本不必重测。如仍不在允许范围则可以进行下一步。8.2.3进行仪器维护，重测失控项目。检查仪器状态，检查光源是否更换，对仪器进行清洗维护，然后再测质控品，如在控，则说明是仪器原因，该批次的病人标本应重测。如仍不在允许范围则可以进行下一步。8.2.4更换另一试剂盒，重测失控项目。检查试剂是否过期或贮存环境，更换试剂盒重新检测对照物，如在控则说明试剂存在问题，该批次病人标本应重测。如仍不在允许范围则可以进行下一步。9.注意事项9.1从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反应条应置37℃平衡30分钟后方可使用，余者应及时封存于冰箱中以备后用。在平衡试剂的同时，待测标本应需置平衡30分钟后再行测试。9.2使用前试剂应摇匀，并弃1-2滴后垂直滴加。9.3封片不能重复使用。9.4结果判断需在反应终止后10分钟内完成。9.5不同批号的试剂不能混用。9.6待测标本不可用NaN3防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释。9.7本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。10.结果计算10.1CutoffValue计算：COV=阴性对照平均值+0.1010.2标本OD值≥COV为阳性，标本OD<COV为阴性11.警告值当HIVOD值略大于COV一般视为低浓度区或灰区。12.1标本的吸光度值<COV被认为HIV阴性，反之则被认为阳性结果。12.2对处于灰区或可疑标本，应重复检测或进一步做确证试验。12.3对于假阳性结果的原因可能有：血清标本中含有颗粒性物质(红细胞)或纤维蛋白丝、前一份血清标本含有高滴度的HIV使得在加样时存在携带污染、非特异性反应存在。12.4对于其他体液标本和血库库存血的检测结果只能作为参考。12.5对于反复冻融的血标本或含有颗粒性物质的血标本应离心后再进行检测。12.6肝素治疗病人的血标本可能由于部分凝固而存在潜在的纤维蛋白丝，因此可能产13.1对任何一份标本(包括质控品、标准品及检测试剂等)都应视其为具有传染性，13.2一旦发生标本容器划破手或身体、液体溅进眼睛等粘膜处，应立即用大量的水冲洗，同时向上级医师或科领导报告，必要时施以丙种球蛋白预防。14.1仪器原因：仪器的性能、仪器的校准等。14.2试剂原因：试剂过期、定标14.3标本原因：标本处理、收集不符合要求等。14.4人为原因：结果填写错误等。15.参考文献山东潍坊三维公司人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒说明书。全国临床检验操作规程室内质量控制的标准操作程序实验室名称编号制定日期XX第二人民医院检验科ELISA方法NEYJH-SOP-0022007年07月26日【方法】2、通过询问试剂包被物的组成，如原料来源(基因工程或的组合(按比例混合或化学合成),片段的长短等判断试剂的优劣。3、参考室间质评报告中对试剂的评价结果，了解不同试剂的质控成绩。4、根据权威部门发布的试剂评价结果，了解市场上试剂的质量优劣。【仪器质控】为使仪器保持最佳工作状态应建立维护和校正仪器的标准操作程序(SOP),所要控制的仪器包括移液器(加样枪),水浴箱(温箱),洗板机和酶标仪。1.移液器：ELISA加样量小(5-100u1),其准确性直接影响实验结果，利用称重法检查：吸取刻度指示量的水，万分之一天平称重后计算吸量是否准确，一2.水浴箱：经常检查水浴箱温度计所示的温度和水中(或温箱内)实测温度是否一致，允许有±1℃的误差。3.洗板机：每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定一般不超过2ul,人工扣板时，垫纸不湿，定期检查管孔是否堵塞。4.酶标仪：经常维护其光学部分，防止滤光片霉变，定期检测校正，使其保持良好的工作性能。酶标仪的主要性能指标有：测读速度、读数的准确性、重复性、精确度和可测范围、线性等等。优良的酶标仪的读数一般可精确到0.001,准确性为±1%,重复性达0.5%。酶标仪的可测范围视各酶标仪的性能而不同。普通的酶标仪在0.000~2.000,新型号的酶标仪上限拓宽达2.900,甚至更高。超出可测上限的A值常以“*"或“over”或其它符号表示。应注意可测范围与线性范围的不同，线性范围常小于可测范围，比如某一酶标仪的可测范围为0.000～2.900,而其线性范围仅0.000～2.000,这在定量ELISA中制作标准曲线时应予注意。【酶标仪校正程序】1、滤光片波长精度检查：将不同波长的滤光片从酶标仪上卸下，用UV-2201型紫外-可见分光光度计(波长精度±0.3nm)于可见光区对每个滤光片进行扫描，其检测值与标定值之差为滤光片波长精度。一般酶标仪无585nm滤光片，可选用550nm或630nm滤光片。450nm滤光片的检定选用普鲁兰溶液(校正波长为2、通道差与孔间差检测：通道差检测是取一只酶标板小孔杯(杯底须光滑，透明，无污染)以酶标板架作载体，将其(内含200ul甲基橙溶液吸光度调至0.500A左右)置于8个通道的相应位置，蒸馏水调零，于490nm处连续测三次，观察其不同通道的检测器测量结果的一致性，可用极差值来表示。孔间差的测量是选择同一厂家，同一批号酶标2板条(8条共96孔)分别加入200ul甲基橙溶液(吸光度调至0.100A左右)先后置于同一通道，蒸馏水调零，于490nm处检测，其误3、零点飘移(稳定性观察):取8只小孔杯分别置于8个通道的相应位置，均加入200ul蒸馏水并调零，于490nm处每隔30分钟测一次，观察各个通道44、精密度评价：每个通道3只小杯分别加入200ul高中低3种不同浓度的甲基橙溶解，蒸馏水调零，于490nm作双份平行测定，每日测二次(上下午各一次),连续测定20天。分别计算其批内精密度，日内批精密度，日间精密度和总精密度及相应的CV值。5、线性测定：用电子天平精确称取甲基橙配制5个系列的溶液，于490nm平行测8次，取其均值。计算其回归方程，相关系数及标准估计误差S,并用±1.96S表示样品测量的误差范围。双波长测定评价：取一分甲基橙溶液，分别加入3种不同浓度的溶血液(测定波长为490nm,校正波长为585nm),先后于8个通道检测，每个通道测3次，比较各组之间是否具有统计学差异，以考察双波长1、标本采集时应尽量避免溶血，因红细胞破裂可释放过氧化物酶活性物质干扰立可读方法的结果，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本会增加非特异2、细菌污染的标本同样的道理也易产生假阳性，因菌体中可能含有内源性3、抗凝不完全的标本因纤维蛋白原的干扰而造成假阳性，建议尽量不用抗加深，一般血清置4℃冰箱5天内完成测试。如同时避免气泡。可上下颠倒混和，不要在混匀器上强烈振荡。反复冻融会使抗体5、ELISA的灵敏度>1ng/ml水平上，标本间的污染要尽量避免，尤其不应1、加样应用微量移液器(加样枪)按规定的量加入微孔板底部，避免加在1、抗原抗体反应需要在一定温度下(37°C),经过一定的时间才能达到反遍(即注满孔后即甩去);3)微孔重新注满洗液后浸泡2-3分钟，间歇摇动；4)2、一定要按照说明书规定的时间温度(一般为37°C,10-15分钟)恒定反3、或根据临界值质控血清吸光度值达0.2左右使的时间而恒定反应时间。1、显色反应终止后应立刻比色(30分钟内)。终止后显黄色，测定波长为450nm,二种底物的校正波长均用630nm。3、使用双波长的优点可以消除反应板条上的划痕手印的干扰。同时要注意反应板应用纸吸干后才能置酶标仪中比色，否则吸光度易出现负值或损坏滤光【分析后质控】【报告方式】1)、COV=2.1×N(当N不足0.05时按0.05计),此公式由P/N>2.1换算3)、COV=N+C(C为常数),用于间接法。4)、COV=C×P+N(C为常数),用于间接法。此公式最客观，但对厂家要求2、现有的ELISA定量试剂盒标准曲线只有在较窄的浓度范围内成直线，要【记录】1、所有实验的原始资料均应存档；所有的记录均应规范登记在册；原始登【定性试验】界值S/C.0≥1,高值质控血清S/C.0≥10,正常人血清A值在0.05～0.07之间。【"即刻性"质控】2、计算X和S;>规定值，失控。实验室名称编号制定日期XX第二人民医院检验科ELISA方法NEYJH-SOP-0032007年08月01日6、采取行动，解决差异。恢复原状(原标准状态)的手段发挥作用。【灰区概念】把定量分析的正常值范围引入定性分析建立灰区概念，即将COV值上下的一范围内则报告+(阳性)。灰区概念对血站系统的献血员筛查尤为重要。灰区的设1、COV×(1±CV),CV为该试剂的批内CV(一般在15-20%间)。线性走向不是呈平台状无限后延，而是向下弯曲状，似一只钩子或一把镰刀(HOOK),MILES(1974)根据此现象写实性地称之为“HD-H0OK”效应。产生该现象的分子机理有"分子变构说”和“浓度效应"等推论。一步法和二步法均存在“HD-H0OK”效应，只是前者出现的更早些，大多数是高值低吸光度，很少阴【质量控制血清】得结果来了解本次检验的情况。质控血清检验的结果如能控制其误差在一定范围内，就说明该检验没有发生不允许的误差。如果出现超过允许冰冻状态融化使用时，应先混匀，未用完部分可在4℃保存5天。不宜反复冰融量准备。自制的不定值质控血清，在一批质控血清将用完之前，需准备下一批质控血清。质控血清要求性能稳定，较长期内效价不变，其理化性质应与病人样本2、56℃加热30分钟灭活。6、标定含量。20-30次测定结果删除>±2SD数据的均值作为靶值，并与已SI=(实验室得分-平均分X)/平均标准差(S),SI在0.0-0.9间为良实验室意外和事故