《茶青中吡虫啉的快速检测方法 胶体金免疫层析法》征求意见稿

1T/FQIA014-2023茶青中吡虫啉的快速检测方法胶体金免疫层析法本文件规定了吡虫啉农药残留的胶体金免疫层析法的原理、试剂与设备、分析步骤、结果判定。本文件适用于茶青中吡虫啉农药残留的快速检测。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法NY/T2102-2011茶叶抽样技术规范3术语和定义胶体金免疫层析法Colloidalgoldimmunochromatographicmethod胶体金免疫层析法就是以胶体金为显色媒介，利用免疫学中抗原抗体特异性结合原理，在层析过程中完成这一反应，从而达到检测目的的方法。4原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。试样中吡虫啉经提取后与胶体金标记的吡虫啉特异性抗体结合，抑制抗体和检测线（T线）上偶联抗原的免疫反应，从而导致T线颜色深浅的变化。通过T线的显色深浅及与质控线（C线）颜色深浅比较，对试样中吡虫啉进行定性判定。5试剂与材料5.1试剂5.1.1甲醇（CH3OH，CAS号：67-56-1）。5.1.2样品提取试剂：茶青试样胶体金免疫层析检测卡（或试纸条）专用提取试剂。5.2标准品吡虫啉标准品的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量见表1，纯度≥99%。表1吡虫啉标准品的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量C9H10ClN5O25.3标准溶液的配制5.3.1吡虫啉标准储备液（50mg/L）：准确称取5.0mg（精确至0.01mg）吡虫啉标准品（5.2），置于50mL烧杯中，加入适量甲醇（5.1）溶解后，转移至100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇2T/FQIA014-2023匀，配制成浓度为50mg/L的吡虫啉标准储备液。避光-18℃及以下条件保存，有效期6个月。5.3.2吡虫啉标准工作溶液（0.5mg/L）：准确移取吡虫啉标准储备液（5.3.1）1.0mL于100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，配制成浓度为0.5mg/L的吡虫啉标准工作溶液，临用现配。5.4材料吡虫啉胶体金快速检测试剂盒：一般包含吡虫啉检测卡（或试纸条）及配套试剂。5.5除另有规定外，所有试剂均为分析纯，所有实验用水为GB/T6682中规定的二级水。6仪器和设备6.1电子天平：感量分别为0.01g和0.01mg。6.2移液器：量程为200μL、1000μL、56.3涡旋振荡器。7分析步骤7.1试样制备7.1.1按NY/T2102-2011茶叶抽样技术规范进行茶青样品抽样，将样品剪碎/切碎成小于1cm见方碎片，备用。7.1.2称取1.0g剪碎/切碎的待测样品于15mL离心管中；7.1.3加入8mL吡虫啉提取试剂，涡旋振荡或手动上下振荡1min，静置1min，上清液即为样品提取液；7.1.4吸取100μL样品提取液于1.5mL离心管中，再加入900μL吡虫啉提取试剂，混匀即得样品待测液。7.2试样测试7.2.1从包装袋中取出检测卡（或试纸条），恢复至室温，启封后应在1h内使用；7.2.2取样品待测液100μL（约4滴）垂直滴于检测卡中，见图1；7.2.3在加样后开始计时，5~8min读取结果，其他时间读取无效。图1加样示意图8结果判定采用目视法，通过对比检测区（T线）和质控区（C线）色带有无和颜色深浅按照图2和如下原则进行结果判定：3T/FQIA014-20238.1阴性（-）：C线显色，T线显色比C线深或两者接近，表示样品中待检物质浓度低于检测限。8.2阳性（+）：C线显色，T线显色比C线浅或不显色，表示样品中待检物质浓度大于等于检测限。8.3无效：C线不显色，表明不正确的操作过程或检测卡已失效。在此情况下应再次检查操作步骤，并用新的检测卡或试纸条重新测试。9检测指标9.1检测限茶青中吡虫啉残留的检测限为0.5mg/kg。9.2灵敏度灵敏度≥98%。9.3特异性特异性≥95%。9.4假阴性率假阴性率≤2%。9.5假阳性率假阳性率≤5%。注：性能指标计算方法见附录A。4T/FQIA014-2023附录A（规范性）定性方法性能指标计算表定性方法各个性能指标计算方法见表A.1。表A.1定性方法性能指标计算表N11N12N21N22N2.=N21+N22N.2=N12+N22显著性差异（x2）x2=（|N12-N