二氢杨梅素的提取与应用研究进展

二氢杨梅素的提取与应用研究进展

二羟基杨树林素（3、3、7、3、4、5）二羟基黄酮醇，又名三羟基黄酮醇，是一种由丙醇和抑制的黄酮醇。二氢杨梅素大量存在于葡萄科蛇葡萄属植物中,尤其是藤茶(Ampelopsis)中其含量高达29%。二氢杨梅素具有消炎、止咳、祛痰、镇痛、抑菌、降脂、抗肿瘤、抗高血压、保肝护肝等诸多生物活性,极具开发潜力。因此,二氢杨梅素的提取和应用受到国内外广泛关注。作者在此综述了其提取方法和应用研究进展。1二羟杨梅素提取方法1.1提取法和浸泡提取法提取法传统的二氢杨梅素提取方法有热提取法(煎煮法、回流提取法)和浸泡提取法(渗透法、冷浸法),均存在费时、费溶剂、效率低、重现性差、提取率低等不足,而且所用溶剂通常有毒,易对环境和操作人员造成危害。1.2氢杨树林的纯化张友胜等成功利用大孔吸附树脂实现了“增温溶解,保温过柱,温水洗脱”的方法提取DMY。该方法的适宜温度为50~70℃,最佳温度为60℃,能很好地将70%左右的二氢杨梅素提纯到80%;提纯二氢杨梅素时,单位数量D-16大孔吸附树脂处理料液的数量,主要取决于料液中二氢杨梅素的纯度。树脂吸附法有以下优点:工艺简单,操作方便,能耗少;操作条件温和,避免了有效成分失活,而且无毒、无污染;树脂容易回收再生,可反复利用,提取效率高。但是仍存在以下缺点:树脂用量过大,只适合于小批量的生产,不适合大批量的工业生产。1.3微波条件下二氢杨树莓原汁最佳提取工艺的确定杨铃等通过正交实验对微波萃取DMY的工艺条件进行了研究。结果表明,影响DMY提取率的因素为提取温度>微波辐射时间>料液比,最佳提取条件为:提取温度95℃,微波辐射时间15min,料液比1∶20。采用微波萃取法大幅提高了提取效率,提取时间从直接热提法的30min缩短到了15min,而且以高效液相色谱直接测定目标成分的含量,检测更加简便、快速。郑成等以干藤茶叶为原料,在微波辐射条件下,以水为溶剂提取二氢杨梅素,确定最佳提取工艺条件为:微波功率高档,微波辐射时间3min,料液比1∶20,水浴浸提时间2h。此条件下二氢杨梅素的提取率为29%。韦星船等采用MARS5微波和压力蒸气灭菌器,以稀碱水为溶剂,选择吸光度法为测定方法,确定最佳提取条件为:高温高压时间45min,料液比1∶25,微波温度95℃,微波时间5min,微波功率600W,转子高速。此条件下二氢杨梅素提取率为30.94%。1.4微波与流化床相结合提取逆流法提取是指提取剂从第一级加入流向最后一级,而物料从最后一级加入流向第一级,即两相逆向流动。由于DMY在热水和冷水中的溶解度差别很大,故可选择以水为提取剂,采用逆流法对原料中的DMY进行提取。李卫等研究了逆流法提取DMY的工艺条件,结果发现,温度越高越有利于DMY的提取,用沸水提取的收率最大,提取时间在60min以前,DMY的收率随提取时间的延长而增大,用偏碱性的水比用中性或酸性水要好。这种方法具有降低能耗、节约成本、提高安全性的优点。此外,还有微波与逆流相结合的提取方法。张友胜等和Du等采用高速逆流色谱法(HSCCC)对提取的DMY粗品进行纯化,得到纯度达99%以上的产品。这种方法避免了分离样品与固态载体表面发生化学反应而变性以及不可逆吸附等缺陷;残留溶剂容易在较短时间内冲净,不会对后续分离产生影响,提高了分离样品的回收率。这种方法的关键之处在于合适的溶剂系统的选择和配比。1.5设备回收率低、不能实现大规模生产超临界流体萃取DMY具有节省试剂、无污染等优点,但回收率较低、一次性设备投资较大、运行成本高,因此很难实现大规模生产。目前国内外未见超临界流体萃取DMY的报道。2二羟杨梅素的应用2.1生理活性2.1.1dmy对慢性肉芽肿的影响魏捷发现,从藤茶中分离出的DMY对巴豆油和角叉菜胶引起的急性炎症和纸片埋藏引起的慢性肉芽肿均有明显的抗炎作用。易诚报道,DMY对小鼠巴豆油性耳廓水肿、小鼠角叉菜胶性、甲醛性足跖肿胀及腹腔毛细血管通透性、急性、亚急性炎症的渗出过程均有抑制作用;对小鼠醛酸性扭体反应和热水反应显示一定的镇痛作用,能提高小鼠的痛阈水平。2.1.2dmy的红排泌量钟正贤等对小鼠做了一系列实验,结果发现,DMY添加量为1.0g·kg-1和0.5g·kg-1的2个组比阳性氯化铵(1.0g·kg-1)对照组的酚红排泌量均有明显提高,证实DMY有明显祛痰作用;同时DMY能明显延长咳嗽潜伏期,减少咳嗽次数,其中大剂量组(1.0g·kg-1)的止咳作用强度与阳性对照组咳必清相当。2.1.3dmy对兔胸径收缩的影响周天达等、刘建新等报道,DMY能抑制去甲肾上腺素和高K+所致的兔胸主动脉条收缩,表明DMY对肠平滑肌和主动脉条的α受体具有阻断作用。周雪仙等通过研究DMY对去甲肾上腺素、氯化钾、氯化钙所致兔胸主动脉条收缩反应量效应曲线的影响,进一步表明DMY能显著抑制去甲肾上腺素、氯化钾和氯化钙所致兔胸主动脉条的收缩,对高K+所致兔胸主动脉条收缩的抑制作用明显大于对去甲肾上腺素所致兔胸主动脉条收缩。DMY对去甲肾上腺素引起的依赖细胞内Ca2+性收缩有明显抑制作用,而对去甲肾上腺素依赖细胞外Ca2+性收缩仅在较高浓度时才显示抑制作用,提示DMY可能对电压依赖性钙通道有选择性阻滞作用。因而,DMY有望开发为抗高血压药。2.1.4dmy保肝护肝机理指标钟正贤等研究表明,DMY能明显抑制四氯化碳所致的小鼠谷草转氨酶(GOT)、谷丙转氨酶(GPT)活性升高以及血清总胆红素降低,显示其有明显的降酶退黄保肝作用。目前,DMY保肝护肝机理基本明确,主要是通过抑制肝M细胞胶原纤维的形成,从而达到治疗目的。在小鼠肝细胞组织培养中,肝细胞移植后很容易产生胶原纤维,DMY则可抑制胶原纤维的形成,使已形成的胶原纤维分散成小微块。2.2dmy抑菌效果熊大胜等用显齿蛇葡萄幼嫩茎叶提取物进行抑菌实验,结果表明,其对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌均有很强的抑制作用,对黑曲霉、黄曲霉、青霉及交链霉均有不同程度的抑菌效果。熊皓平等用DMY对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌、产气杆菌、啤酒杆菌、粘红杆菌、青霉菌、黑曲霉菌、毛霉菌、根霉菌、绿脓杆菌、甲型溶血型链球菌、乙型溶血型链球菌、肺炎双球菌、白色念珠球菌等16种细菌与真菌进行了抑菌实验,结果表明,DMY对以上菌均有一定的抑制效果。杨书珍等用纯度为90%的DMY对酵母菌、桔青霉菌、牛奶酸败混合菌等3类微生物进行抑菌实验,结果表明,当DMY用量在0.05%时,对牛奶酸败菌的抑制效果与相同用量的苯甲酸相近;对酵母菌的抑制效果则不显著,可能是酵母细胞的细胞壁较厚,DMY要穿过细胞壁作用于细胞膜有一定的困难造成的。2.3dmy的抗氧化作用DMY为活性黄酮类化合物,具有良好的抗氧化活性。何桂霞等研究发现,DMY对植物油的抗氧化效果优于儿茶酚、大豆异黄酮、葛根异黄酮这3种常用的天然抗氧化剂,且抗氧化效果随其浓度的增加而增强,在铁离子存在的情况下,也表现出很强的抗氧化稳定性。林淑英研究发现,纯度为95%的DMY在花生油体系中的最优添加量为0.04%,并且当增效剂L-抗坏血酸和亚硫酸钠的添加量为0.02%时,可有效提高DMY的抗氧化性能。杨书珍等研究发现,DMY可防止亚油酸的脂质过氧化。胡自勇研究发现,DMY对二苯代苦味酰基自由基(DPPH)的清除效果较好,当用量达到0.04%时,其对DPPH的清除率达到91.5%。郭清泉等通过量子化学计算手段和醚处理实验相结合的方法,确定了DMY分子结构的抗