样品处理分离技术-色谱分离法（分析制样技术课件）

色谱分离法的由来分析制样技术干扰组分或待测组分的分离方法干扰组分或待测组分的分离方法萃取分离法沉淀分离法离子交换分离法色谱分离法色谱分离法的由来0101色谱分离法的由来分析制样技术色谱分离法层析法、色层法或层离法1903年由俄国化学家、植物学家茨维特首创的，用于分离植物色素。由于这一实验将混合的植物色素分离为不同的色带，因此茨维特将这种方法命名为色谱法。01色谱分离法的由来分析制样技术后来采用此方法亦可用于无色组分的分离。故色谱法只不过是一个延用的名词并非表示只能分离有色组分。目前，各种类型的色谱法，特别适合于分离不稳定化合物，结构相似、性质相近的化合物是分离混合物的近代技术。基本概念0202基本概念分析制样技术色谱分离法是利用组分在不相混溶的两相中分配的差异而进行分离的一种方法。例如以洗脱剂洗脱植物色素的提取液，经过一段时间洗脱之后，植物色素在色谱柱中实现分离，由一条色素带分散为叶绿素a、叶绿素b、叶黄素和胡萝卜素数条平行的色带，然后依次对各色素进行分离。色谱法具备的条件0303色谱法具备的条件分析制样技术首先待分离的混合物中各组分的理化性质有差异，并且差距越大，越易分离。其次具有两相固定相流动相滤纸或其它载体作为惰性支持物，两相在惰性支持物上作相对运动，而进行分离。03色谱法具备的条件分析制样技术最后应进行多次冲洗或展开操作，才能使待分离组分完全分离。总而言之，色谱分离法总是由一种流动相，带着被分离的物质，流经固定相，从而使试样中的各组分分离。色谱分离法的分类0404色谱分离法的分类分析制样技术纸色谱法薄层色谱法柱色谱法按固定相的形状和操作形式的不同分为04色谱分离法的分类分析制样技术纸色谱法以色谱滤纸为载体的液相色谱法。由于各组分在两相间进行分配的分配比不同，因此随着展开剂的向前流动得到分离。纤维素形成纸色谱中的固定相；而有机溶剂为流动相，又称展开剂。04色谱分离法的分类分析制样技术基本原理利用待分离组分在固定相和流动相分配或吸附的差异，从而利用使它们在薄层上的移动速度差异得以分离的方法。薄层色谱法04色谱分离法的分类分析制样技术柱色谱法将氧化铝或硅胶等吸附剂填充在玻璃柱中作为固定相，然后将试液加在柱上，用一种洗脱剂作为流动相进行洗脱。04色谱分离法的分类分析制样技术若试液中有A、B两种组分，则A、B将不断地在色谱柱内溶解、吸附、再溶解再吸附，吸附能力较弱的物质溶解、吸附的速度都较快，将先被洗脱下来，这样便可将A、B两种组分分离。纸色谱法分析制样技术色谱分离法分类纸色谱法薄层色谱法柱色谱法按固定相的形状和操作形式的不同分基本概念0101基本概念分析制样技术纸色谱法又称纸层析法，是根据混合物中不同组分在两相中的分配比不同而进行分离的一种微量分离方法。载体层析纸（滤纸）。固定相滤纸上的吸湿水分。流动相有机溶剂（展开剂）。故纸层析法属于液-液色谱。层析滤纸的要求0202层析滤纸的要求分析制样技术要求所选滤纸应质地均匀，厚薄一致。①滤纸应具有一定的机械强度，被溶剂浸湿后能站立。②滤纸纤维应松紧程度适宜，溶剂展开速度合适。③应具有一定纯度，不含杂质。④滤纸上应不含有溶于水及有机溶剂的物质。⑤纸色谱法的原理0303纸色谱法的原理分析制样技术有机混合物点在滤纸（载体）上，做为展开剂的有机溶剂（流动相）自下而上移动。样品混合物中各组分在水（固定相）或有机溶剂（流动相）中的溶解能力各不相同。各组分会在水与有机溶剂两相中发生溶解分配并随有机溶剂的移动而展开，达到分离的目的。03纸色谱法的原理分析制样技术层析分离不同组分性质不同的组分分离在滤纸的不同位置上亲脂性强的成份在流动相中分配的多一些，随流动相移动的速度就快一些。亲水性强的成份在固定相中分配的多一些，随流动相移动的速度就慢一些。操作方法0404操作方法分析制样技术第一步配制试样溶液第二步裁滤纸第三步画圆点第四步点样第五步取展开剂第六步展开第七步显色固定相和展开剂溶剂。1.5cm×20cm长条层析纸。离滤纸末端约2cm处用铅笔。毛细管取样，轻点样于原点上，晾干，重复3～5次。斑点直径需<0.5cm取展开剂，将滤纸一端浸入有机溶剂中。滤纸不可触及试管的内壁，纸条末端浸入展开剂约0.5cm,不能让试样点浸入展开剂。喷洒适宜的显色剂，使各组分显色。约2cm试样点04操作方法原点展开后斑点展开剂前沿a1a2bAB分离示意图实验结果0505实验结果通常用比移值Rf衡量各组分的分离程度。RfRf=组分原点中心到展开后的斑点中心的距离a组分原点中心到展开剂前沿的距离bRf范围0～1。Rf