不同产地地骨皮水煎剂对四氧啶糖尿病小鼠降血糖作用

不同产地地骨皮水煎剂对四氧啶糖尿病小鼠降血糖作用

宁夏枸杞是一种常见的补药方剂，具有抗逆、抗衰老、肿瘤、肝肾、降血脂、增强身体免疫等功能。枸杞的药用部位主要包括枸杞果实（枸杞，通常称为枸杞）、枸杞根（土壤壳）、枸杞果柄（带刺的果柄）、枸杞叶。北宋诗人苏左生在他的诗《枸杞》中说：“茎和花都可以收获。没有扔掉的东西。”枸杞的根、茎、花和果实可以用于治疗。王力等人的研究表明，枸杞能显著降低糖尿病小鼠的血糖值（p0.01），提高血清胰岛素水平。中国药典(1995)收载的地骨皮(Cortexlycii)为茄科植物枸杞(LyciumchineseMill.)或宁夏枸杞的干燥根皮.黄小红等实地药源调查表明,现地骨皮药材商品,主要来源于枸杞的根皮,宁夏枸杞和北方枸杞(L.chinensevar.potaninii)的根皮在个别地区也作为药用地骨皮.地骨皮为常用中药,其提取物有降血糖、解热、降压、镇痛、免疫调节、抗菌、抗生育等作用.黄小红等用3种地骨皮(枸杞根皮、宁夏枸杞根皮、北方枸杞根皮)原生药总提取物灌喂小鼠,测定它们对小鼠的降血糖作用,结果表明,3种枸杞根皮中仅枸杞根皮对四氧嘧啶小鼠有明显降血糖作用,其余2种地骨皮降血糖作用不甚明显.但未见有关宁夏枸杞根皮降血糖的进一步研究报道.枸杞叶俗称天精草,是一味重要的中药材,具有补虚益精、清热止渴、养肝明目之功效,也可作为新鲜蔬菜食用.有学者关于枸杞叶活性成分、营养成分和常微量元素的含量明显优于枸杞果实的报道,未能引起足够的重视.枸杞果柄所含的营养成分与枸杞叶相当,而枸杞果柄的相关研究则更少.有关枸杞叶降血糖的研究,国内仅见的报道认为枸杞叶蛋白具有降血糖作用.枸杞果柄在内蒙古自治区等地被作为糖尿病人的保健品使用,但未见相关研究报道.因此进一步开展宁夏枸杞叶、枸杞果柄及枸杞根皮降血糖作用的研究,对于宁夏枸杞传统非药用部位的开发利用具有重要的理论及实践意义.1材料和方法1.1实验材料1.1.1枸杞叶茶、地骨皮血糖仪及血糖试条,均为北京怡成生物电子技术有限公司产品.四氧嘧啶(Alloxan,ALX),美国sigma公司产品.枸杞叶茶,宁夏枸杞研究所园林试验场产品.枸杞果柄,采自内蒙古自治区乌拉特前旗白彦花镇.地骨皮,河北产枸杞根皮,简称河北地骨皮,采于河北枣强县产的枸杞的根皮;甘肃产枸杞根皮,简称甘肃地骨皮,采于甘肃庆阳产的枸杞的根皮;宁夏产地骨皮,简称宁夏地骨皮,采于宁夏中宁产宁夏枸杞“宁杞1号”的根皮.苯乙双胍,又名降糖灵,南通制药厂出品,批号070107.1.1.2枸杞叶茶、枸杞果柄、地骨皮水产权水社剂的制备将枸杞叶茶50g,加水1000mL煎煮1.5h,过滤;药渣再加水500mL煎煮1h,过滤.合并滤液,用旋转蒸发仪减压浓缩至100mL(生药质量浓度为0.5g/mL).同样方法制取生药质量浓度为0.5g/mL的枸杞果柄及3种地骨皮水煎剂各100mL.将降糖灵片研碎,以煮沸过的蒸馏水溶解,配制成质量浓度为5mg/mL的水溶液.制得的枸杞叶茶、枸杞果柄、地骨皮水煎剂及降糖灵水溶液置于4℃冰箱中备用.1.1.3实验动物昆明种小鼠(均为雄性)及小鼠饲料均由宁夏医学院实验动物中心提供.在实验室暂养1周后开始实验,初始体质量为(22±5)g.1.2实验方法1.2.1氧吡啶糖尿病小鼠血糖含量测定小鼠禁食(不禁水)12h后,尾静脉注射5%四氧嘧啶溶液(80mg/kg),恢复进食;于48h后再禁食(不禁水)12h,断尾取血,用血糖仪测定血糖值,测定结果大于11.1mmol/L的小鼠为合格的四氧嘧啶糖尿病小鼠模型.动物出现明显的多饮、多食、多尿症状为标准,确认模型,未达标动物不纳于实验.将糖尿病小鼠按空腹血糖水平高低进行随机区组法分组,同时兼顾各组动物体质量均值尽量接近.另设1组体质量相近的非糖尿病小鼠15只,作为以上各组糖尿病小鼠的对照组(正常对照组),同时测定其血糖值.1.2.2正常组和多次给药防治小鼠血糖试验选取合格的四氧嘧啶糖尿病小鼠,分为9组(每组15只),分别以生理盐水、降糖灵(25mg/(kg·d-1)),枸杞叶茶水煎剂分别为5.0g/(kg·d-1)和7.5g/(kg·d-1),枸杞果柄水煎剂分别为5.0g/(kg·d-1)和7.5g/(kg·d-1),宁夏地骨皮水煎剂为5.0g/(kg·d-1),河北地骨皮水煎剂为5.0g/(kg·d-1)和甘肃地骨皮水煎剂为5.0g/(kg·d-1)灌胃.正常对照组小鼠以等量生理盐水灌胃.各组小鼠每日上午8:00～10:00期间灌胃1次.每天观察小鼠行为及死亡情况并做好记录,连续给药14d.在末次给药后禁食12h,断尾取血,用血糖仪测定血糖值.1.3血糖降低值方差分析实验数据用x¯±sx¯±s表示,给药前后血糖值比较采用t检验,P<0.05为差异显著,P<0.01为差异极显著.给药后各组间血糖降低值采用多重比较用最小显著差数法(LSD)进行方差分析,同一列数字右侧小写字母相同者表示差异不显著(P>0.05),不同者表示差异显著(P<0.05);同一列数字右侧大写字母不同者表示差异极显著(P<0.01).2结果2.1各组小鼠的死亡数给小鼠尾静脉注射四氧嘧啶后,由于体内代谢紊乱,致使部分小鼠死亡.由表1可知,给药后降糖灵治疗组、枸杞叶茶治疗组糖尿病小鼠死亡数低于模型对照组糖尿病小鼠.说明降糖灵、枸杞叶茶在降血糖的同时提高了动物的生存率.给药前期除正常对照组小鼠外,其余各组小鼠均出现明显的多饮、多食、多尿、消瘦、活动减少、精神萎靡等症状.到给药末期,除模型对照组外,降糖灵治疗组、枸杞叶茶治疗组、枸杞果柄治疗组、地骨皮治疗组小鼠的“三多”症状均有所改善.2.2两组血糖比较由表2可知,给药前各四氧嘧啶糖尿病小鼠模型的血糖均大于11.1mmol/L,为合格的糖尿病小鼠模型.给药前各组糖尿病小鼠间的血糖差异不显著,但与正常对照组相比差异极显著.给药后高、低剂量枸杞叶茶治疗组及降糖灵治疗组血糖较给药前有极显著降低;高、低剂量枸杞叶茶治疗组与降糖灵治疗组的差异不显著,说明此剂量枸杞叶茶与降糖灵降血糖作用等效.给药后,低、高剂量枸杞果柄治疗组除与降糖灵治疗组血糖降低值之间无显著差异外,与模型对照组、正常对照组血糖降低值之间达到极显著差异.可见低、高剂量枸杞果柄均有降低四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的作用,且与降糖灵有相同的降糖效果.给药后宁夏地骨皮治疗组、河北地骨皮治疗组和甘肃地骨皮治疗组血糖较给药前有极显著降低.实验表明,3个产地的地骨皮水煎剂与降糖灵一样,对四氧嘧啶糖尿病小鼠有明显的降血糖作用.给药后降糖灵治疗组与宁夏地骨皮治疗组、河北地骨皮治疗组和甘肃地骨皮治疗组的差异不显著,说明三者的降血糖作用与降糖灵效果相似.3主要降血糖功效成分本实验中,一定剂量的枸杞叶茶、枸杞果柄及宁夏、甘肃、河北3个产地的地骨皮均有明显降低四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的作用,且与降糖灵治疗组的差异不显著,表明降糖效果已经达到了目前临床治疗糖尿病所使用的降糖西药降糖灵的降糖效果.目前发现的植物天然降血糖成分主要包括黄酮、生物碱、皂甙、鞣质、多糖、萜、蛋白质与氨基酸、不饱和脂肪酸、硫键化合物、苯丙素酚和其他化合物等11大类,但这些成分在不同植物体内有着不同的种类.现有较多的研究已经认为枸杞子、地骨皮可以降血糖,枸杞子降血糖的有效成分主要有枸杞多糖等.周晶等人研究表明地骨皮降低实验性小鼠血糖的有效部位是水溶性小分子.李康等认为地骨皮降血糖的有效组分是酸性组分.杨涓等测定得知枸杞子、地骨皮均含有牛磺酸,许多研究也证明牛磺酸可以降血糖,但牛磺酸是不是枸杞子、地骨皮降血糖的有效成分之一,至今未见报道.枸杞子、地骨皮含较丰富的牛磺酸,这在植物药中很少见.枸杞叶、枸杞果柄作为枸杞子、地骨皮一株同生的一部分,是否也含有牛磺酸,尚待进一步研究.宁夏枸杞叶富含黄酮类化合物、维生素E、维生素C、硒、甜菜碱等营养活性成分.黄酮类主要影响胰岛β细胞功能,作用缓慢而持久.有报道从芥菜中分离得到黄酮类化合物异鼠李素二葡萄糖苷,其降血糖机制与异鼠李素二葡萄糖苷的体内抗氧化活性有关.荞麦种子、广西藤茶、桑叶中的总黄酮都对高血糖小鼠也有明显的降血糖作用.宁夏枸杞叶黄酮类化合物含量高于其果实.推测黄酮类化合物