中国农业大学

PAGEPAGE1中国农业大学本科生“URP”立项申请书项目名称芸薹黄化病毒3a转基因本生烟的创制申请人韩成贵工作单位植物保护学院联系电话62731629电子信箱hanchenggui@填表日期2017年04月中国农业大学教务处制项目名称芸薹黄化病毒3a转基因本生烟的创制项目起止时间2017年4月-2018年3月项目申请人情况姓名韩成贵性别男出生日期1966．11最后学历与学位研究生、博士专业技术职务教授从事专业植物病理学项目概况芸薹黄化病毒(Brassicayellowsvirus,BrYV),属于马铃薯卷叶病毒属（Polerovirus）。该病毒主要侵染甘蓝、油菜、萝卜、大白菜、菜花和芥菜等多种十字花科作物，引起黄化和卷曲的症状。BrYV在我国广泛发生和分布比较广泛，目前已在我国的24个省、市、自治区、直辖市检测到该病毒的发生。Polerovirus基因组正义单链RNA（+ssRNA），基因组RNA含有6个ORFs。最近的研究结果表明在Polerovirus病毒的ORF3的上游还存在一个非AUG起始的小ORF，其编码的P3a蛋白与病毒的长距离运动相关，但目前P3a在病毒的侵染过程中起作用的分子机制我们并不清楚。在之前的工作中我们构建了BrYV在35S启动下的全长侵染性cDNA克隆，通过农杆菌浸润接种的方法注射本生烟，两周后病毒能系统侵染本生烟。同时我们发现一个P3a的自发突变体（BrYV-P3amut），该突变不影响病毒在接种叶片上的的积累量，但使病毒丧失系统侵染的能力，因此P3amut可能是运动缺陷突变体。为了进一步研究P3a在BrYV的系统侵染过程中的作用机制，本项目期望利用农杆菌介导转化法获得稳定表达P3a蛋白的转基因本生烟植株。获得P3a转基因本生烟可以为研究P3a的功能提供良好的材料基础。二、实施计划及方案(明确各个环节对培养学生创新能力的具体思路及考核办法)1、资料查阅与整理：指导学生查阅国内外资料，了解该领域中前人的工作进展。考核的办法：完成一篇和本项目相关的文献综述。2、芸薹黄化病毒3a转基因本生烟的创制：目前本实验室已获得多个P3a的病毒突变体，在此基础上，首先构建表达不同P3a突变体的瞬时表达载体，通过农杆菌侵润的方法，确定P3a蛋白是否表达；其次利用农杆菌介导转化法，进行P3a转基因本生烟的创制；最后通过分子检测，确定转基因植株内P3a基因的拷贝数以及P3a蛋白的表达量，同时观察含不同P3a突变体的转基因本生烟的表型是否存在差异。本项目期望得到稳定表达P3a蛋白的转基因本生烟植株。考核办法：提交实验方案和实验结果。3、URP结题报告和科研训练毕业论文的撰写。考核办法：在本实验学术会议上进行汇报、写出规范的论文文稿。三、项目实施的基础和条件1.项目负责人长期从事植物病毒相关的研究，具有指导学生进行试验的理论和实践基础；2.本课题组所在实验室拥有从事本项目相关研究的所有仪器设备。四、学生提交的成果1、完整的实验记录和具有一定样本量的转基因阳性植株。2、URP结题报告3、科研训练毕业论文

五、经费预算本项目总预算3000元，计划接收2-3名本科生参加本项计划，具体预算如下：1. 试验材料与试剂预算占70%：试验材料包括：培养皿、三角瓶、试管、滤纸、枪头、封口膜等；试验试剂包括组织培养所需的各种原料、营养液各种原料等。2、文具、文献查阅、资料复印费、劳务费等占30%3、水电费、仪器使用费、测定费等全部由申请人从相关科研经费中支出。六、学院U