卷柏化学成分的测定

卷柏化学成分的测定

选择干柏树、柏树和垫柏，以及maxim等三种柏树的全草试验。卷柏为多年生草本,民间药用全草,具有活血散瘀、凉血的功效、有活血通经之功能,用于经闭痛经,症痛痞块,跌扑损伤;经炒炭而成卷柏炭,化瘀止血,用于吐血崩漏,便血,脱肛。经过三种卷柏的化学成分的提取分离研究,可知卷柏中化学成分十分复杂,其药用的有效成分不清楚。但试验表明含有大量的黄酮类化学成分和其它化学成分,本文用光度法对其主要化学成分总黄酮进行测定,结果满意,操作简便。1试验部分1.1主要设备7230G型分光光度计;KQ-250DB型数控超声波清洗器。1.2标准溶液配制称取在105℃干燥恒重的芦丁对照品10mg,用95%乙醇溶解,摇匀,定容至100mL,配成质量浓度为0.1000g·L-1芦丁标准品溶液,作为储备液备用。移取标准储备溶液0.10,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00,1.20mL分别于25mL容量瓶中,各加甲醇(1+1)至10mL,加50g·L-1亚硝酸钠溶液0.5mL,摇匀,放置6min;加100g·L-1硝酸铝溶液0.5mL,摇匀,放置6min;加50g·L-1氢氧化钠试液4mL,用水定容至刻度,摇匀,放置15min。以相应的溶液为空白,于500nm波长处分别测定吸光度,绘制标准曲线。1.3种卷柏提取物的制备卷柏是内蒙古乌兰浩特山脉上采取的样品,旱生卷柏和垫状卷柏为从医药公司购买的。分别称取经干燥、粉碎的三种卷柏100g,用滤纸包好,放入乙醚中浸泡30min,取出,加入甲醇400mL,置超声波清洗器中提取,至提取液无色为止,合并提取液回收溶剂。得到粗品溶液100mL,备用。2结果与讨论2.1最大吸收波长的确定移取0.060g·L-1标准储备液0.60mL,按标准曲线的制备方法,在480~520nm波长之间进行测定,试验结果表明,500nm为最大吸收波长。2.2试验条件的选择2.2.1硝酸盐铝溶液试验结果表明,加50g·L-1亚硝酸钠溶液0.4~0.6mL,100g·L-1硝酸铝溶液0.4~0.6mL时吸光度基本稳定,试验选择亚硝酸钠和硝酸铝溶液各0.5mL。2.2.2碱剂量的选择试验结果表明,50g·L-1氢氧化钠溶液3~5mL吸光度基本不变。试验选择氢氧化钠溶液4mL。2.2.3脂溶性物质因大多数糖类不干扰测定,三种卷柏干扰测定的杂质主要为脂溶性物质,如叶绿素等,叶绿素等脂溶性物质除得越充分,黄酮溶解的越少,说明除杂效果越好。比较了石油醚、乙醚和氯仿三种常用除脂试剂,试验结果石油醚除杂效果差,氯仿对黄酮有一定的溶解性,乙醚除杂效果最好,并且不溶解黄酮。2.2.4不同溶剂提取效果比较提取黄酮类化合物,一般常以水、乙酸乙酯、乙醇或甲醇等为溶剂,但对于不同的原料因成分的差异,提取效果差别很大。比较了几种常用溶剂,水提取不完全,而且杂质较多;乙酸乙酯虽提出的杂质少,但黄酮提取不完全;乙醇提取完全,但杂质很多;甲醇提取完全,并且提出的杂质很少。2.3显色稳定性显色溶液在4h内吸光度的变化小于5%,说明黄酮类化合物与铝盐生成的络合物显色稳定。2.4干扰试验在0.1mg芦丁标准溶液中分别加入20倍于芦丁含量的葡萄糖、蔗糖、麦芽糖,试验结果表明,这些组分不干扰黄酮的测定。2.5相对标准偏差按试验方法,移取芦丁标准储备溶液0.4mL7份,测定吸光度,结果为(n=7)0.596,相对标准偏差为0.002%。回归方程为y=9.6745x-0.0149,r=0.9996(n=7),在0.02~0.10g·L-1范围呈线性关系。2.6黄酮含量的测定按试验方法处理样品,取粗品溶液0.2mL进行测定,卷柏样品中黄酮为0.0231%,旱生卷柏样品中黄酮为0.0126%,垫状卷柏样品中黄酮为0.0187%。2.7超声提取溶剂的选择(1)卷柏中含有黄酮类化合物,因此利用芦丁为对照品,用光度法对总黄酮进行测定具有指导意义。测定结果的回收率为101.61%,RSD为1.01%,显色快速灵敏,方法简便,结果重复性好、准确度高,可用于该产品的定量分析方法以控制其内在质量。(2)选择