宫颈及宫颈癌前增殖基因表达及临床意义

宫颈及宫颈癌前增殖基因表达及临床意义

宫颈疾病的发生与hp感染诱导的细胞激活和一些突变有关。本研究应用免疫组化方法检测宫颈癌及宫颈癌前病变组织中增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)及Ki-67的表达,探讨它们在宫颈癌的表达及临床意义。1数据和方法1.1慢性宫颈炎的临床病理信息收集2004年6月至2006年9月山东大学齐鲁医院手术切除宫颈标本70例,患者年龄23~68岁,平均40.39±9.08岁。其中慢性宫颈炎15例,CIN37例,子宫颈浸润性鳞癌18例,均经病理证实。37例CIN中包含CINⅠ(LSIL)20例,CINⅡ/Ⅲ(HSIL)17例。18例早期宫颈癌均为高分化鳞癌,其中IA~IB期8例,IIA期10例。15例慢性宫颈炎的宫颈组织取自因子宫肌瘤、子宫腺肌病或子宫脱垂而行全子宫切除的患者。患者术前均未作放疗、化疗。1.2抗力量单次用药试验应用免疫组织化学S-P法检测Ki-67抗原及PCNA抗原的表达,应用HPVL1通用引物MY09/MY11行PCR反应检测宫颈病变组织中HPV感染情况,扩增片断450bp,并结合部分患者临床HC-II检测结果进行比较。即用型兔抗人单克隆Ki-67抗体、小鼠抗人单克隆PCNA抗体及S-P通用型试剂盒购于福州迈新公司,体液病毒基因组DNA提取试剂盒购自北京天根生化公司,PCR反应试剂盒购自上海生物工程公司。标本以10%福尔马林溶液固定,石蜡包埋切片,已知阳性鳞癌切片为阳性对照,PBS代替一抗/二抗作阴性对照。1.3增殖指数piKi-67、PCNA以细胞核中见到棕黄色颗粒分布为阳性。PCNA偶可见核周胞浆着色。采用半定量法判断结果,阳性率用增殖指数(proliferatingindex,PI)表示,即阳性细胞占肿瘤细胞的百分比,并分为4级。0~10%为(-),10%~25%为(+),25%~50%计为(++),>50%计为(+++),++~+++为强阳性或过表达。两人双盲法判断结果,相差超过10个百分点则重新判断。1.4融资约束比较用SPSS13.0统计软件分析。率的比较根据具体情况用χ2及校正检验,或Fisher确切概率法。各组间相关性用Spearman等级相关分析。2ki-97及pcna表达情况Ki-67及PCNA表达免疫组化结果,见表1。慢性宫颈炎、CIN、宫颈鳞癌中Ki-67阳性表达率分别为33.33%、89.19%、100%。PCNA阳性表达率分别为66.67%、97.30%、100%。CINI和CINII/III中Ki-67阳性表达率分别为85.00%、94.12%;PCNA阳性表达率分别为95.00%、100.00%。CIN和宫颈癌的Ki-67及PCNA表达与慢性宫颈炎相比,差异均有显著性(P<0.05)。Ki-67及PCNA过表达率在CINI组与慢性宫颈炎、CINII/III组和早期宫颈癌各组间无显著差异(P>0.05),而CINII/III组与CINI组间差异显著(P<0.05)。Ki-67、PCNA的表达强度呈正相关(rs=0.6565,P<0.01),见表2。PCR检测HPV感染结果,见表3。CIN和宫颈癌HPV感染率与宫颈炎相比,均有显著差异(P<0.05)。HPV感染率在CINI与慢性宫颈炎之间、CINII/III组和早期宫颈癌各组之间不具显著性差异(P>0.05),而CINII/III组与CINI组间差异显著(P<0.01)。比较分析其中33例患者(含浸润癌I期5例,CINII/III12例,CINI10例,慢性宫颈炎6例)临床HC-II检测结果,除2例PCRHPV-DNA阳性的CINI及1例早期浸润癌HC-II的检查结果提示阴性外,其余HC-II结果与本研究相符。HPV感染与Ki-67的表达强度呈正相关(rs=0.6072,P<0.05)。HPV感染与PCNA的表达强度呈正相关(rs=0.7835,P<0.05),见表4。3免疫组化标记物CIN是宫颈癌的癌前病变,按照异型增殖细胞累及宫颈黏膜上皮的层次,分为CINI,CINII,CINIII。CINI包含HPV感染和轻度非典型增生,CINIII包含重度不典型增生和原位癌。这种命名方法提示宫颈癌的发生发展是一个渐变的过程,但同时也有一定的局限性,(1)很多CIN是可逆的,或者与低危性HPV-6、11感染有关;有些甚至是疑似CIN的良性反应性改变,部分萎缩性上皮及未成熟鳞状细胞化生等难以与CIN区分;(2)单纯HE染色的组织形态学表现与生物学行为及预后有时并不一致。CIN多由低到高逐级进展,但也有少数低级别的CIN,短期内直接发展为浸润癌。CIN分级的重要依据是核分裂象增多和病理性核分裂象在上皮方向的垂直位置。但细胞质量减少,多形性增加,细胞核体积增大、深染、大小不均,可见于上皮的所有层面。因此,有学者认为,病变谱系中不同位置的细胞和上皮之间的差异只是量的变化,而非性质上的差异。因此,诊断不当有可能导致治疗过度,或给患者带来不必要的忧虑。高度怀疑的病例需有区分良性反应性增生还是CIN病变的检测方法,尤其是要有检测高度CIN病变的免疫组化标记物,可以减少不必要的误诊与漏诊。增殖是细胞的重要生物学行为之一,细胞周期失控和异常增殖将导致肿瘤发生。肿瘤细胞增殖与肿瘤组织的分化状态、侵袭能力以及预后密切相关。PCNA参与哺乳类动物细胞的DNA复制。是反映细胞增殖状态的良好指标。PCNA在G0~G1期细胞中无明显表达,G1晚期其表达大幅度增加,S期达到高峰,G2~M期明显下降,其量的变化与DNA合成一致,检测它在细胞中的表达,可作为评价细胞增殖状态的指标。高危HPV的E7癌蛋白使得P21介导的CDK活性与PCNA依赖性DNA复制发生紊乱,PCNA表达呈现强阳性。Branca等研究显示,PCNA表达上调与高危HPV感染和进展型CIN密切相关,结果与本研究类似。但PCNA强阳性的预测敏感性高,特异性差,正常宫颈组织亦有表达,故不能单独作为宫颈癌筛查的肿瘤标志物。Ki-67抗体在G1期开始表达,S期和G2期逐渐增加,M期达到峰值,有丝分裂后迅速降解,G0期不表达,半衰期短,检测结果明显优于半衰期长的增殖细胞核抗原(PCNA),被视作较可靠的全面反映细胞群体增殖活性的指标。既往研究表明,Ki67在CINIII组的表达显著高于宫颈炎组,与本研究结论相似。也有学者提出,宫颈上皮的上2/3发现Ki-67阳性表达可作为鉴别LSIL和HSIL的标志。Ki-67抗原可在正常宫颈、良性反应性增生及CINI上皮基底层少量表达,故在鉴别宫颈增生性病变时,Ki-67最好