浙江蓖麻性贝毒作用下的赤潮生物调查

浙江蓖麻性贝毒作用下的赤潮生物调查

akai潮汐的最大破坏之一是有毒赤潮生物产生的麻痹性骨料（psp），这危害经济生物，并影响人类的健康和安全。世界各地不断报道食贝类的中毒事件,引起人们的关注,许多国家进行了大量的研究工作。我们在嵊泗列岛养殖区进行赤潮生物调查时发现可能产生麻痹性贝毒的藻类,如裸甲藻(Gymnodinium)、原甲藻(Prorocetrum)、鳍藻(Dinophysis)、和膝沟藻(Gonyanlax)等。1991年两次较大规模赤潮发生时进行赤潮麻痹性贝毒小鼠生物测定,检测食用该区生产的水产品的安全性,探讨赤潮危害原因,为提出防治措施提供科学依据。一、小鼠的急性毒性试验每月一次用采水器和浮游生物Ⅲ型浅水网进行周年浮游生物定性定量调查,赤潮发生时以采水沉淀法作浮游植物定性和定量细胞计数。赤潮麻痹性贝毒小鼠生物测定所用的紫贻贝(Mytilusedulis)采自赤潮刚退后在构杞海区吊养的成贝。试验小鼠购自宁波市卫生防疫站的健康雌性小鼠,体重18g左右。毒性测定按AOAC(1980)提出的小白鼠测定方法。制取贝毒提取液:用淡水冲洗壳面,割断闭壳肌打开贝壳取出软体部分,收集110q软体部分,凉水浸泡5min,剪碎放入匀浆器中,在YQⅢ型电动匀浆器(3000r/min)匀浆7min,称取100g匀浆,加100m10.1mol/L盐酸充分搅拌,用5mol/L盐酸调pH至3,缓缓煮沸5min,放冷至室温,调pH至2～4,转入量筒定容至200ml,将样品以3000r/min离心7min,倾取上清液。空白试验:取2只健康小鼠分别进行0.1mol/L盐酸1ml的腹腔注射,经1h无死亡,则可进行毒性试验。毒性预试验:取2只健康小鼠分别用1ml贝毒提取液进行腹腔注射,死亡时间大于5min,则提取液、不需稀释。毒性试验:每组测定6～8只小鼠,每只小鼠用1ml贝毒提取液进行腹腔注射,观察其反应情况,记录死亡时间,查表确定毒性。二、结果(一)赤潮区的优势种1990年7月3日～6日,16日～21日构杞、嵊山、绿华连片海区中肋骨条藻(Skeletonemacostatum)赤潮。1990年7月底至8月上旬嵊山、构杞一带多次发生分散的、短期的夜光藻(Noctilucscientillans)小规模赤潮。1991年6月3日～6日构杞、嵊山、绿华连片的简裸甲藻(Gymnodiniumsimplex)赤潮。1991年7月13日构杞岛东南至嵊山海域连片的菱形裸甲藻(Gymnodiniumrhomboides)赤潮。重赤区的构杞小沙头水域菱形裸甲藻密度为3.5×106个/L,赤潮不明显区后头湾水域菱形裸甲藻密度为7.5×103个/L。1991年8月2日～7日花鸟、嵊山、构杞的菱形裸甲藻、中肋骨条藻赤潮。8月2日优势种为菱形裸甲藻1.3×106个/L,次优势种中肋骨条藻3.0×105个/L;8月4日优势种为中肋骨条藻1.3×107个/L,次优势种菱形裸甲藻7.2×105个/L。1991年9月2日至10日绿华、构杞、嵊山的中肋骨条藻赤潮。(二)小鼠骨髓炎试验小鼠在注射贝毒提取液后1h均无死亡,说明1991年7月13日和8月2日至7日发生的赤潮所产生的麻痹性贝毒毒性极轻,小于8.75×10-3Mu/q组织。空白试验的小鼠基本无异常反应,活动自如。毒性试验的小鼠则有异常反应,三个组小鼠的具体反应不一(表1)。三、紫贻贝的毒性1.近年嵊泗列岛养殖区为赤潮常发海区,为确保该区水产品的食品卫生,应进行定期监测。该区两年里发生6次以上赤潮,赤潮生物有中肋骨条藻、夜光藻、菱形裸甲藻和简裸甲藻。其中,中肋骨条藻和夜光藻未见有毒性报道,而裸甲藻的毒性问题则是值得重视的,表1毒性测定结果1986年福建陈岱乡瓷窑村发生食菲律宾蛤仔中毒事件是由于赤潮生物裸甲藻(Gyumodiniumsp)水中含量106个/L所引起的。一种裸甲藻(Gymnodiniumcatenatum)1976年在西班牙北部发生赤潮引起严重的PSP中毒事件,1986年12月日本首次发现由它引起的贝毒,1986～1987年澳大利亚塔斯马尼亚发生赤潮PSP中毒事件。在我们所做的三组小鼠毒性测试中,Ⅰ组和Ⅲ组小鼠出现呼吸急促,后肢瘫痪等现象。但含毒量少,毒素在小鼠体内通过新陈代谢作用而逐渐减轻最后失效,所以1h后异常状态消失。因而可认为Ⅰ、Ⅲ组紫贻贝含一定量的贝毒。三组毒试小鼠反应不同与裸甲藻赤潮的严重程度有关,即紫贻贝受水中菱形裸甲藻浓度大小影响有关。Ⅰ组是经受7月13日菱形裸甲藻严重赤潮影响后小沙头水域的紫贻贝,Ⅱ组是7月13日赤潮不明显区头湾水域的紫贻贝,Ⅲ组是小沙头再次经受8月2日～7日菱形裸甲藻、中肋骨条藻赤潮影响的紫贻贝。毒试小鼠反应以Ⅲ组最强,Ⅰ组次之,Ⅱ组最弱无明显中毒表现。所以我们为菱形裸甲藻会产生毒素,且毒素随该藻类浓度大小和持续时间长短而变化。水域中菱形裸甲藻密度达106个/L经一潮汐周期(约12h)影响,紫贻贝中的毒素就可使小鼠后肢出现瘫痪。1991年7月份出现的菱形裸甲藻赤潮时间短,仅一个潮汐周期。8月份出现的赤潮时间虽然长达6d,但菱形裸甲藻的优势很快就被中肋骨条藻所取代,说明嵊泗列岛海域发生的这几次赤潮中养殖区受高浓度菱形裸甲藻影响时间较短,毒素低,危害不大。菱形裸甲藻在6～8月是该区常见种甚至优势种之一,是值得进一步深入研究的一种赤潮生物。2.嵊列岛海域存在发生有毒赤潮的危险。两年调查发那该区5～7月有海洋原甲藻(Prorocentrummicans),5～6月有另一种原甲藻(P.triestinum),5月有倒卵形鳍藻(Dinophycisforiu),6～7月有多种膝沟藻(Gonyaulaxspp)出现并成为优势种之一。这些种类在环境合适情况下可能会形成有毒赤潮,值得关注。此外日本、香港发生的原链状膝沟藻(Protonyanlaxcatel/a)、泰国等东南亚水域原膝沟藻(P.tamarensis)、危地马拉的沟环藻(Pyrodiniumbaharnense)有毒赤潮都可危及本区。3.近年嵊泗列岛养殖区虽然发生赤潮但检测结果该区所生产的水产品含麻痹性贝毒量极低,符合食用标准,对人体健康尚无危害。根据我们所作的三组小鼠测定结果显示紫贻贝可食部分含麻痹性贝毒量小于8.75×10-3Mu/g组织,比美国FDA规定可食部分毒素含量不得超过4Mu/g,联合国卫生组织规定不得超过80μg都少得多,而且这两年未见因食水产品发生中毒事件。4.紫贻贝是检测麻痹性贝毒的理想材料。贝类滤食时赤潮生物毒素可以转移到贝类体内并在其体内积累,但一般情况下该毒素对贝类生存无害。不少报道,贝类中的蛤、贻贝、扇贝和牡蛎等有积累赤潮生物毒素的能力。这类毒素在贝类的软组织中都有一定含量,尤以消化器官中含量最高,如1977年6～7月日本东北部发生的中毒事件,来自Shizugawa湾中部的紫贻贝体内含毒量为10Mu/q,扇贝为6Mu/g。1989年香港沿海水域的翡翠贻贝软组织含麻痹性贝毒达4.5～9.5Mu/q。嵊泗列岛养殖区主要养殖紫贻贝、鲍鱼、对虾、海带、石斑鱼、海鳗、三疣梭子蟹等,以紫贻贝数量最大,仅构杞岛的港湾1991年紫贻贝养殖产量达6000余t。因此,在嵊泗列岛养殖区选用紫贻贝作为检测麻痹性贝毒的材料是经济实用的。用贻贝作材料提取麻痹性贝毒时需注意把整个软体部分先剪碎,特别是把外套模边缘剪成小段状再行匀浆,否则受外套膜坚韧的外缘缠绕,难以得到均匀的均浆液。贻贝匀浆液较为稠厚,加热时要注意控制温度,不能上其逸出或烧焦,损失毒素量,要在调pH值至3不加搅拌条件下,缓缓煮沸5min,以便蛋白质结絮并充分提取毒素。5.小鼠生物测定可作为麻痹性贝毒常规监测方法。该测定法虽然专一性差、灵敏度不高,但准