注射用哌拉西林钠舒巴坦钠的含量测定

注射用哌拉西林钠舒巴坦钠的含量测定

拼音注射苯乙烯钠和树巴坦钠，是拉西林与树巴坦四、1的混合制剂。目前正在研究阶段。美国药典及中国药典仅收载了测定单一组分的HPLC法,未见同时测定哌拉西林与舒巴坦的方法,本文参照中国药典,建立了同时测定哌拉西林与舒巴坦含量及有关物质的HPLC方法,现报道如下。1药品、制剂及药品注射用HP1100液相色谱仪(单元泵、自动进样器、紫外检测器、工作站,美国惠普公司);UV2201型紫外分光光度计(日本岛津);哌拉西林钠(供注射用,山东瑞阳制药有限公司,批号990410);舒巴坦钠(供注射用,东北第六制药厂,批号9901001);哌拉西林、舒巴坦对照品(中国药品生物制品检定所,批号分别为:哌拉西林,0419-9502,含量:91.3%;舒巴坦,0430-200002,含量:92.0%)。注射用哌拉西林钠/舒巴坦钠(海口市杰威药物研究所,批号20000111,20000112,20000113);甲醇、乙腈为色谱纯,其他试剂为分析纯。2方法和结果2.1色度条件优化2.1.1分光光度法检测取哌拉西林对照品约15mg,用流动相稀释至100mL。舒巴坦对照品约10mg,用流动相稀释至100mL,照分光光度法在200～400nm范围内扫描测定(见图1)。在230nm波长处哌拉西林的吸收系数大于舒巴坦,同时由于制剂配比为哌拉西林:舒巴坦为4∶1,故参照中国药典标准,为减少溶剂的干扰,提高样品的检测灵敏度,选择适于舒巴坦的230nm为测定波长。2.1.2丁基氢氧化铵试验结果参照中国药典收载方法及有关文献,拟定3种流动相进行试验。(A)甲醇-0.05mol·L-1四丁基氢氧化铵(30∶70,pH3.5);(B)甲醇-水-0.0025mol·L-1四丁基氢氧化铵(450∶535∶15,pH3.5);(C)甲醇-0.2mol·L-1磷酸二氢钾溶液-10%四丁基氢氧化铵-水(510∶50∶8∶432,pH4.1)。试验结果见表1。选择结果表明,流动相中增加甲醇比例,或pH升高,或减少四丁基氢氧化铵浓度,样品保留时间缩短。加入四丁基氢氧化铵和磷酸盐缓冲液可以不同程度地改善峰形,使分离良好。2.1.3流动相、检测波长及进样量色谱柱:LunaC18(2)(美国Phenomenex,5μm4.6mm×250mm);流动相:甲醇-0.2mol·L-1磷酸二氢钾溶液-10%四丁基氢氧化铵溶液-水(510∶50∶8∶432,pH4.1);检测波长:230nm;流速:0.8mL·min-1;进样量:5μL;温度:25℃。2.2理论塔板数、分离度及拖尾因子的测定取对照品溶液约1g·L-1,进样5μL,计算理论塔板数、分离度及拖尾因子,结果哌拉西林和舒巴坦理论塔板数分别为10097和9377,分离度分别为2.77和2.09,拖尾因子均符合中国药典规定。2.3系统的独特性2.3.1降解产物的分离对样品进行强碱破坏、强酸破坏、高温破坏、强光照射试验,结果本品在强酸、强碱下均不稳定,舒巴坦及哌拉西林几乎完全破坏,降解峰多在舒巴坦主峰之前出现,与主峰可完全分离,热及光破坏的各降解产物峰与主峰均能分离,分离度大于1.5。2.3.2烷基苯磺酸钠pahs-2-烷基苯磺酸钠pa采用2695-2996HPLC仪(美国Waters公司),用二极管阵列检测器,作三维色谱图,见图2,表明舒巴坦与哌拉西林峰分离完全,均为单一组分峰。2.4流动相色谱法检测溶液浓度,流动相积分面积,当其规定了条件下的积分面积,则拉不同浓度的溶液,其积分面积和浓度,c精密称取哌拉西林、舒巴坦对照品分别为173.4(含量91.3%)、65.9mg(含量92.0%),置100mL容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀得标准液,用刻度吸管精密取标准液6.0,4.5,3.0,1.0,0.1mL,精密加入流动相使成6.0mL,摇匀,再用流动相按倍比稀释法得到相当于标准液1.5,0.75,0.5,0.25,0.05mL的溶液,分别注入液相色谱仪5μL,记录积分值,以浓度为横坐标(C,g·L-1),积分面积(A)为纵坐标,得回归方程舒巴坦为:A=1232.6324C+0.1482(r=1.0000),哌拉西林为:A=7190.8305C+48.7119(r=0.9999)由以上结果可见,舒巴坦在5.1～606.3mg·L-1范围内,哌拉西林在13.2～1583.1mg·L-1范围内,溶液的浓度与积分面积呈良好的线性关系。2.5回收率、精密度因样品为哌拉西林钠与舒巴坦钠的混合物,其中不含任何辅料,因此不存在空白干扰,精密称哌拉西林对照品分别约30,40,50mg,加入舒巴坦对照品约8,10,12mg,置50mL量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,进样5μL,每个样品分别进样3次,记录积分值,代入标准曲线方程,求出含量,结果回收率为哌拉西林(99.6±0.5)%,舒巴坦(100.2±0.8)%(n=9),符合制剂含量测定的精密度要求。2.6进样稳定性测定样品溶液(约1g·L-1)放置于室温(19～25℃),分别于0,1,2,4,6h各进样5μL,记录峰面积,结果RSD小于1.5%,表明本品水溶液在6h内稳定。2.7重复试验同一样品重复测定5次,RSD哌拉西林为0.29%,舒巴坦为0.39%。2.8检出限和检出限以浓度最低的标准液(相当于哌拉西林13.2mg·L-1,舒巴坦5.2mg·L-1),进样5μL,分别相当于基线水平的35.4和209.8倍,按3倍计,检出限为2.22ng和0.94ng,按10倍计,检出量为7.40ng和3.14ng。2.9重量测定2.9.1高效液相色谱法取本品装量差异项下的内容物,混合均匀,精密称定适量,加流动相溶解,稀释成每1mL含0.5mg的溶液,作为供试品溶液,照高效液相色谱法测定,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以甲醇-0.2mol·L-1磷酸二氢钾溶液-10%四丁基氢氧化铵-水(510∶50∶8∶432)(pH4.1)为流动相,流速0.8mL·min-1,检测波长230nm。取供试品溶液5μL注入液相色谱仪,理论塔板数按哌拉西林峰计算应不低于3000,分离度应符合规定。2.9.2对照溶液的制备本品精密称定,加流动相制成每1g·L-1的溶液,作为供试品溶液,精密量取适量,加流动相稀释成每0.1g·L-1的溶液,作为对照溶液。照含量测定法,取对照溶液5μL注入液相色谱仪,记录色谱图,调节仪器灵敏度,使主成分峰高达记录仪的满量程,取供试品溶液5μL注入液相色谱仪,记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍,按自身对照法计算杂质含量。2.9.3三个样品的含量和相关物质的结果按上述方法测定3批样品的标示含量及有关物质,结果见表2。3离子条件的优化舒巴坦与哌拉西林具有相似的β-内酰胺结构,酸性较强,强酸、强碱下均不稳定,故将其解离条件确定在pH3.5～6.5范围。经试验在较宽pH(3.5～5.9)范围内离解完全,适于离子对色谱,故选用四丁基氢氧化铵为离子对试剂。另外,考察了四甲基氢氧化铵、四乙基氢氧化铵、四丁基氢氧化铵的影响,结果杂质与舒巴坦的分离以四丁基氢氧化铵最好,四乙基氢氧化铵次之,而四甲基氢