2022陆生野生动物疫病采样技术规范

陆生野生动物疫病采样技术规范目 次前言 II1范围 12规范性引用文件 13术语和定义 14采样要求 15采样设备 26采样 27样品标记和采样记录 58样品保存 69废弃物的处置 610安全操作要求 6附录A（资料性）陆生野生动物疫病样品采集工作用表 8IPAGEPAGE1PAGEPAGE8陆生野生动物疫病采样技术规范1范围采样记录、样品保存、废弃物的处置、安全操作要求。本文件适用于广西区内陆生野生动物疫病样品的采集。2规范性引用文件（包括所有的修改单适用于本文件。LY/T1959陆生野生动物疫源疫病监测技术规范农业农村局农医发〔2005〕25号病死和死因不明动物处置办法（试行）农业农村局农医发〔2017〕25号病死动物无害化处理技术规范3术语和定义LY/T1959界定的以及下列术语和定义适用于本文件。3.1陆生野生动物terrestrialwildlife脊椎动物。本文件特指哺乳类、鸟类、爬行类和两栖类动物。3.2陆生野生动物疫病terrestrialwild-borneinfectiousdiseases染病。4采样要求4.1审批要求采集疫病样品，应报告和获得审批，采样程序应符合有关法律法规的要求。4.2强度要求LY/T1959250m520g～50g；100m5500mL。80cm～150cm4～55min。时间要求陆生野生动物死亡后，应立即采集样品，夏季不应超6h，冬季不应超24h。用于免疫效果评价的样品，应在免疫21d采集。其他要求怀疑患有炭疽等不宜解剖的陆生野生动物，应由具有资质的单位或部门进行采样。采样人员应经过专业技术培训，熟悉采样器具的使用，掌握正确的采样方法。采样人员应做好个人防护。所有容器和采集器械应经过消毒且完整无缺，避免样品的交叉污染。5采样设备5.1保定器械麻醉吹管、麻醉针等。5.2采样器械离心机镊子手术剪酒精灯酒精棉碘酊棉射器一次性采血针血液生化管T形管U形管、不同型号的密封袋、灭菌棉签、保存液等。解剖器械解剖剪手术刀柄和刀片止血钳解剖刀钢锯骨剪尺子酒精灯接种环组织存瓶、细菌培养基、组织固定液等。防护物品一次性口罩N95口罩一次性帽套一次性连体防护服一次性乳胶手套胶鞋一次性隔离衣、一次性防水鞋套、免洗消毒液、护目镜等。记录材料记号笔、采样单、标签纸、记录本等。5.6其他物品样品保存箱、试管架、胶布、封口膜、封条、冰袋、医疗废物袋等。6采样体液样品血液样品采血部位血或是眼窝内的血管丛采血；爬行动物可从尾静脉采血；两栖动物可从心脏采血。采血方法采集，可用塑料T形管采集。血液处理全血保存备用。血液寄生虫样品应采集末梢血液直接涂片固定备用。血清分离。血浆所采集的血液应装入抗凝管，摇匀，离心抽取上清液。6.1.2胃液活体动物加压后，取胃液。死亡动物解剖后直接提取胃液。6.1.3胆汁、脓液、粘液或关节液经烫烙等方法消毒后，抽取所需样品，密封待用。6.1.4乳汁应冻结、加热或强烈震动。6.1.5精液活体动物可用假阴道法、电刺激法等人工方法采集；死体则消毒后从睾丸直接抽取。6.2组织样品皮肤及附属组织宜采集病变的皮肤包括痂皮、未破裂水泡的水泡液、水泡皮、羽毛用消毒的器械直接采取皮肤及皮肤附属组织，放入经消毒过的保存容器中。肌肉及实质器官切开皮肤，无菌取肌肉和器官，密封低温保存。剖开腹腔时，不要损坏肠道。6.2.3胃肠道选择病变最明显的胃肠道部分，灭菌生理盐水冲洗弃去内容物，剪取胃肠道组织密封低温保存。6.2.4脑、脊髓较小头纱布包裹较开颅中备用。内容物肠内容物烧烙肠壁表面，抽取肠内容物置于保存液中；或结扎肠管两端，从两端剪断密封低温保存。6.3.2胃内容物可安全保定的反刍动物，可从口腔采集反刍的食团。其他动物可插入胃管抽取胃液。6.4拭子及镜检样品呼吸道拭子将灭菌棉拭子插入鼻腔咽喉轻轻旋转3圈粘取分泌密封。肛门或泄殖腔拭子将灭菌棉拭子插入肛门或泄殖腔内1cm左右，轻轻旋转3圈粘取分泌物，将样品端剪下，放入保存液中，密封。生殖道拭子将灭菌棉拭子粘取生殖道、阴道分泌物或包皮冲洗液，将样品端剪下，放入保存液中，密封。6.4.4眼睛拭子将灭菌棉拭子轻轻擦拭眼结膜表面后，将样品端剪下，放入保存液中，密封。6.4.5物体表面拭子物体面积＜100cm积≥100cm100cm5cm×5cm的标准灭菌规格板，放在被检物体表面，用浸有生理盐水采样液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返均匀涂擦5随之转动棉拭续采样4个规格把6.4.6培养样品用灭菌接种环经消毒部位插入，提取病料接种在培养基上，密封备用。6.4.7镜检样品6.4.7.1直接镜检采集病变组织碎屑、体液等，置载玻片上稀释，火焰固定后密封保存。6.4.7.2病理切片镜检样品采集病灶及正常组织交界处的组织块，组织块厚度不超过0.5cm，组织块避免挤压、刮摸和水洗，放入10％福尔马林溶液中固定。冷冻切片样品，直切采集组织块密封，0℃～4，24h内送检。排泄物粪便样品应选择新鲜有患病特征的粪便，可用灭菌棉签取粪便放入盛有灭菌的30%甘油磷酸缓冲盐水保存液中送检。尿液活体动物直接收集，宜取晨尿；死体，解剖后消毒膀胱表面直接抽取。6.6其他样品6.6.1动物胚胎采集整个胚胎，密封打包后装入器具内低温保存。6.6.2寄生虫直接采集虫体密封后，低温保存。6.6.3环境可采集动物死亡现场的土壤、周边的河流的水体、暂养场馆的空气等相关样品。7样品标记和采样记录7.1采样记录采样记录应清晰、完整，一个样品一条记录，标识和样品一致，采样新表参见附录A。7.2标识要求单个样品样品保存管上直接填写动物种类、样品名称、编号、采样时间等，密封袋密封。外包装密封袋上等温箱外应贴封封条上采样人签封日期，标注放置方向。当样品中含有高致病性病原微生物，包装材料上应加贴生物安全标识。8样品保存保存容器盛放容器拭子样品管应置于特定塑料盒或冷冻U型或T型离心管内的血清样品管应置于冷冻避免晃动。运输容器样品应使用保温箱或保温瓶保存运输。8.2保存场所样品应保存在专用冰箱和冰柜中，防盗和防泄漏。8.3保存温度在24h内送到实验室的样品应在2℃～8℃温度下保存；长期保存的样品在-70℃或以下保存，避免反复冻融。9废弃物的处置采样器具处置一次性用品丢弃前应消毒层密封袋密封放入专用的防止污染扩散的可消毒的容器到当地有医疗废弃物处置资质的专业无害化处置公司集中统一销毁。器械弃置或清洗前应高压灭菌处理。9.2废弃样品处置动物尸体残骸和质量不合格的样品应按照《病死和死因不明动物处置办法（试行）》和《病死动物无害化处理技术规范》的规定执行。10安全操作要求应由专业人员实施保定，操作时应减少动物应激，宜在麻醉状态下开展采样。使用麻醉枪或是麻醉吹管注射麻醉剂，麻醉枪应由具有持枪证且经过专业培训的人员使用。麻醉药应由执业兽医师开具和使用，缺乏麻醉技术物种，应避免采样。采样现场环境应进行终末消毒，避免产生环境污染。附录A（资料性）陆生野生动物疫病样品采集工作用表表A.1给出了陆生野生动物疫病样品采集记录表。表A.1陆生野生动物疫病样品采集记录表表单号：物种名称调查疫病采样地点采样时间地理坐标海拔高度生境气候条件种群数量气候条件种群特征样品数量野生动物发病和死亡情况（禽他动物接触情况采样动物性别年龄捕获方式临床检查剖检病变样品采集样品编号样品名称样品数量样品编号样品名称样品数量01鼻（咽）拭13小肠02肛拭14结肠03血清15粪便04脑16草料05心17水源06肺18土壤0