++2.1植物细胞工程++第2课时+探究-实践+菊花的组织培养课件-【知识精讲精研】高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3

第2章

细胞工程第1节

植物细胞工程第2课时

探究•实践菊花的组织培养幼苗愈伤组织脱分化IAA/CTK比例适合再分化IAA/CTK比例先减小再增大植物组织培养过程示意图完整植株外植体课题背景——植物的组织培养课题背景——细胞表现全能性的条件（1）离体状态（2）无菌操作（防止杂菌污染）（3）种类齐全、比例适合的营养物质（4）植物激素（主要是生长素和细胞分裂素）诱导和调节（5）适宜的外界条件（温度、pH、光照等）1、原理：外植体愈伤组织试管苗完整植株脱分化芽、根等再分化生长发育植物细胞一般具有

。全能性生长素/细胞分裂素

结果比值高(＞1)比值低(＜1)比值适中(=1)有利于根的分化，抑制芽的形成有利于芽的分化，抑制根的形成促进愈伤组织的形成简记为：“高”根，“低”芽，“中”愈伤探究•实践菊花的组织培养2、目的：（1）了解植物组织培养的基本原理；（2）了解生长素和细胞分裂素的浓度、用量比例对菊花愈伤组织形成和分化的影响；（3）尝试进行植物组织培养。3、材料用具：（1）材料：幼嫩的菊花茎段、培养基、体积分数为70%的酒精、质量分数为5%左右的次氯酸钠溶液和无菌水等。探究•实践菊花的组织培养（2）用具：50mL锥形瓶（或植物组织培养瓶）、烧杯、酒精灯、超净工作台（或接种箱）、高压蒸汽灭菌锅、培养箱、封口膜、滤纸、标签、消毒用酒精棉球、培养皿、解剖刀和镊子等。4、步骤：接种培养试管苗正常植株用酒精擦拭双手和超净工作台台面。流水充分冲洗外植体。②方法：①材料：幼嫩的菊花茎段30S酒精2-3次立即无菌水洗30min次氯酸钠溶液2-3次立即无菌水洗（1）消毒：既要考虑消毒效果，又要考虑植物的耐受力两次用无菌水清洗的目的：将酒精和次氯酸钠溶液清洗干净探究•实践菊花的组织培养消毒消毒接种培养试管苗正常植株在酒精灯火焰旁，将外植体的1/3~1/2插入诱导愈伤组织的培养基中；③封盖和标记（2）接种：注意：接种时注意外植体的方向，不要倒插！（将“形态学上端”朝上，下端朝下）①切分外植体：无菌操作将消过毒的外植体置于无菌的培养皿中，用无菌滤纸吸去表面的水分。用解剖刀将外植体切成0.5~1cm长的小段；外植体切块②接种

用封口膜或瓶盖封盖瓶口，并在培养瓶上作好标记。探究•实践菊花的组织培养接种培养试管苗正常植株脱分化脱分化形成愈伤组织有光时，往往容易形成维管组织，而不易形成愈伤组织。将接种了外植体的锥形瓶或植物组织培养瓶置于18~22℃的培养箱中培养。在培养过程中，定期观察和记录愈伤组织的生长情况。避光（3）培养愈伤组织：①接种到诱导愈伤组织培养基培养基及培养条件：激素比例1：1、置于黑暗、提供有机碳源（蔗糖）

探究•实践菊花的组织培养消毒接种培养试管苗正常植株②接种到诱导生芽培养基③接种到诱导生根培养基培养15~20d后，将生长良好的愈伤组织转接到诱导生芽的培养基上。若先生根后面就不易生芽，所以要注意顺序，该过程每日需要给予适当时间和强度的光照！（3）培养：长出芽后，再将其转接到诱导生根的培养基上，进一步诱导形成试管苗。探究•实践菊花的组织培养消毒接种培养试管苗正常植株（4）移栽：移栽前先打开封口膜或瓶盖，让试管苗在培养箱内生长几日用流水清洗掉根部的培养基将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中，待其长壮后再移栽入土。每天观察并记录幼苗的生长情况，适时浇水、施肥，直至开花。探究•实践菊花的组织培养消毒5、注意事项：探究•实践菊花的组织培养（1）实验中使用的培养基和所有的器械都要灭菌。接种操作必须在酒精灯火焰旁进行，并且每次使用后的器械都要灭菌。（2）接种时注意外植体的方向，不要倒插。（3）诱导愈伤组织期间一般不需要光照；在后续的培养过程中，每日需要给予适当时间和强度的光照。（4）培养离体植物组织常用的培养基——MS培养基水（去离子水）、无机营养（大量元素、微量元素）、有机营养（蔗糖、维生素、氨基酸）、天然附加物、植物激素（生长素、细胞分裂素等）诱导愈伤组织、诱导生芽和诱导生根的培养基成分有差别。6、结果分析与评价：用于植物组织培养的培养基同样适合某些微生物的生长，如一些细菌、真菌等的生长。培养物一旦受到微生物的污染，就会导致实验前功尽弃，因此要进行严格的无菌操作。（1）在植物组培过程中，为什么要进行一系列的消毒，灭菌，并且要求无菌操作？探究•实践菊花的组织培养培养基、接种工具灭菌不彻底；外植体消毒不彻底；操作过程不符合无菌操作要求等。被污染的培养基6、结果分析与评价：（2）接种3~4d后，检查外植体的生长情况，统计有多少外植体被污染，试分析它们被污染的可能原因。（3）从刚接种的外植体到长出愈伤组织需经历多少天？2周左右探究•实践菊花的组织培养固体基质型，含水量高、蓄水性强、透性好，适合栽培珍珠岩

,珍珠岩是一种火山喷发的酸性熔岩，经急剧冷却而成的玻璃质岩石，有弧形或圆形裂隙，如珍珠的结构，所以被命名为珍珠岩。蛭石是一种天然、无毒的矿物质，在高温作用下会膨胀的矿物。它是一种比较少见的矿物，属于硅酸盐。探究•实践菊花的组织培养进一步探究：若想探究生长素与细胞分裂素的使用比例对植物组织培养的影响，则应如何设计对照实验。③

实验组2：生长素/细胞分裂素＜1②

实验组1：生长素/细胞分裂素=1③实验组3：生长素/细胞分裂素＞1产生愈伤组织诱导生芽诱导生根①空白对照：不加任何激素探究•实践菊花的组织培养外植体愈伤组织试管苗完整植株脱分化芽、根等再分化生长发育黑暗光照离体无菌培养基适宜的外界条件(温度、光照、气体等)水琼脂有机物无机物植物激素蔗糖：提供能量、调节渗透压。植物激素：主要是生长素和细胞分裂素。课堂小结1、某课外活动小组获得了一株性状优良的结球生菜，并利用植物组织培养技术对其进行快速繁殖。下列叙述正确的是（

）A.外植体消毒的过程为：酒精消毒30s→次氯酸钠溶液处理30min→无菌水清洗2~3次B.愈伤组织是一种不定形的薄壁组织团块，诱导产生愈伤组织时每日应给予适时光照C.与诱导生根培养基相比，诱导生芽培养基中细胞分裂素所占的比例更高D.移栽时，打开封口膜后直接用流水冲洗掉幼苗根部的培养基，再将幼苗移植到消过毒的蛭石环境中C课堂练习2、如图为烟草植物组织培养过程的流程图，下列有关叙述错误的是（

）A.过程③为脱分化，其实质是基因的选择性表达B.过程②应根据要求使用适宜的培养基，且在避光的环境中进行C.对过程①获取的根组织块应作消毒处理D.植物组织培养的理论基础是植物细胞的全能性课堂练习A3、有关菊花组织培养的说法，正确的是（

）A.需要有三种培养基，其营养成分中的碳源应该是无机碳源B.要用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌，即在100℃下保持15～30minC.在培养过程中要先让愈伤组织生根后再使其生芽D.用酒精对外植体