22.3酶免疫组织化学检验技术讲解

第二十二章

免疫组织化学检验技术知识目标1.掌握：免疫组化技术的定义、基本过程、抗原的修复方法（重难点），抗体的选择和保存；酶标记抗体的免疫组化染色（直接、间接法）的原理，荧光免疫组化标本类型和保存。2.熟悉：免疫组化标本来源、固定于保存，结果判断；非标记酶免疫组化的常见类型及原理、亲和组织化学技术的定义及分类（重点）。3.了解：常见亲和组织化学技术的原理、优缺点及应用。能力目标掌握抗原的修复方法，免疫组化标本的采集、固定于保存、结果判断。思政-素质目标责任心、质控、生物安全意识、临床免疫学思维教学目标目录概述一免疫组化技术基本知识二酶免疫组织化学检验技术三荧光免疫组织化学检验技术四亲和组织化学检验技术五其他免疫组织化检验技术六酶免组织化学检验技术是在一定条件下，应用酶标抗体（抗原）与组织或细胞标本中的抗原（抗体）发生反应，然后加入酶的底物，催化底物显色，借助光镜或电镜，就可识别出标本中抗原（抗体）的分布和性质；也可通过图像分析技术达到定量的目的。酶免疫组织化学检验技术三一、标本制作常用的标本有组织切片、组织印片和细胞涂片酶免组织化学检验技术可分为酶标记抗体免疫组织化学染色法非标记抗体酶免疫组织化学染色法二、酶标记抗体的免疫组化染色法（一）原理

酶标记抗体的免疫组织化学染色法是借助交联剂的共价键作用将酶直接连接在抗体（或抗抗体）上，酶标抗体（或抗抗体）与组织内特异抗原或抗原抗体复合物反应后，通过酶对底物的催化作用，生成不溶性有色产物并沉淀在特定位置，达到对抗原定性、定位、定量检测的目的。（二）技术类型

1.直接法形成抗原一抗体一酶复合物2.间接法形成Ag-Ab1-Ab2﹡E复合物3.酶标抗体三步染色法为间接法的改良法形成Ag-Ab1-Ab2﹡E-Ab3﹡E复合物（三）方法评价三、非标记抗体酶免疫组化染色法（一）原理该技术首先用酶免疫动物，制备效价高、特异性强的抗酶抗体（Ab3），将酶与Ab3结合形成复合物，然后利用第二抗体（Ab2）作桥，Ab2既可与Ab3的Fc段结合，又可与结合在组织抗原上的第一抗体（Ab1）的Fc段结合，经酶催化底物的显色反应，达到对抗原的检测。（二）技术类型1.酶桥法用辣根过氧化物酶（HRP）免疫动物（如兔）制备抗HRP的抗体（Ab3），经Ab2（如羊抗兔）作桥，将结合在组织抗原上的Ab1(兔抗相应组织抗原的抗体)与Ab3连接起来，最后将HRP与Ab3结合形成Ag-Ab1-Ab2-Ab3-HRP复合物，加底物显色2.PAP法即过氧化物酶（P）-抗过氧化物酶（AP）法，为酶桥法的改良，技术要点基本上与酶桥法相同，但该法将抗酶抗体（抗过氧化物酶（AP））与酶（过氧化物酶（P））制成了可溶性复合物（PAP）,该复合物由2个抗酶抗体和3个过氧化物酶分子组成，呈五角形，非常稳定。通过桥抗体（Ab2）将特异性识别组织抗原的抗体（Ab1）与PAP复合物的抗酶抗体连接起来3.双桥PAP法该法是PAP法的改良，通过两次连接桥抗体和PAP，形成Ag-Ab1-Ab2-PAP-Ab2-PAP复合物，在抗原抗体复合物上结合了比PAP法更多的酶分子，大大增强了方法的敏感性。4.APAAP法APAAP法就是以碱性磷酸酶代替HRP建立的碱性磷酸酶（AP）-抗碱性磷酸酶（AAP）法，简称APAAP法。技术要点与PAP法相似。（三）方法评价该技术既可检测抗原，又可检测抗体。由于酶不是标记在抗体上，而是经抗原（酶）抗体反应与抗酶抗体结合，避免了酶标抗体的缺点，提高了方法的敏感性。尤其是双桥PAP法，是当今免疫组化技术中敏感性较高的方法。四、临床应用

酶免疫组织化学