乙型肝炎表面抗体定性检测作业指导书时间

乙型肝炎表面抗体定性检测作业指导书时间文件名制订/修订部门制订/修订人员制订/修订日期批准人批准日期乙型肝炎表面抗体定性检测作业指导书蔡洪庆2008吴家洪2009-06-22SOP文件号文件名制订/修订部门制订/修订人员制订/修订日期批准人批准日期乙型肝炎表面抗体定性检测作业指导书1.检验目的检测HBsAb要紧是用于监测乙型肝炎疫苗是否有效，HBsAb的显现表明机体具有针对乙肝病毒感染的免疫力和抗击乙肝病毒的侵入，同时定量检测HBsAb还能够观看急性乙肝复原的动态情形以及乙型肝炎的流行病学调查（以往是否暴露接触过乙肝病毒）。2.方法原理采纳ELISA双抗原夹心法，反应板的琼脂微孔包被纯化HBsAg,待测血液中抗HBs抗体与之反应，再加HRP标记HBsAg形成HBsAg-抗HBs抗体-HRP标记HBsAg复合物，最后加底物TMB显色。3.性能指标此方法快速简便、特异性强、检测灵敏度度0.5ng/ml。4.标本收集4.1标本类型：静脉血或动脉血的血清或血浆标本均可作为检测标本（抗凝剂可用肝素钠、枸橼酸钠、ACD、CPDA-1或EDTA，抗凝剂的质量应符合化试药品要求——化学纯或分析纯，使用的比例以厂家举荐为准）；其他体液如尿液、唾液、精液、羊水、胸水、腹水、乳汁等体液能够作为检测标本，但加热灭活的血清和血库的库存血则不宜作为检测标本。4.2标本留取：以空腹为宜，收到标本后最好赶忙离心留取血清或血浆（凝固血应待其充分凝固后收集血清），不能有残留的红细胞、纤维蛋白丝，使用肝素治疗的病人宜在肝素治疗前抽血。临床实验室4.3标本储存：留取的标本最好在3小时内检测，不能赶忙检测的应放置于2-8℃最长达14天（能够含有凝块但要密闭以防蒸发），或者-10℃最长达14天（不能反复冻融也不能含有凝块和红细胞）。4.4标本容器：盛放标本的容器必须为洁净的一次性真空采血管、玻璃试管、一次性的不同规格的塑料离心管4.5标本外送：如涉及到需要外送的标本，必须以规定的容器（0.5ml塑料离心管）存放并密封，并按照邮寄规则和要求进行包装，运送时还要放入冰袋（2-8℃）或干冰（-10℃）由专人运送至指定地点指定接收人。4.6拒收标本：凡与4.1-4.5所述内容不符的标本，检验人员应向临床或就诊者讲明拒收标本的缘故，并提出解决的方案或建议。5.分析系统5.1分析仪器：为美国BIO-RAD公司提供的MODEL550型酶标仪，仪器校准请参见仪器操作规程。5.2分析试剂：为上海科华公司提供的配套的HBsAb试剂盒，规格为96test/盒，2-8℃贮存，有效期12个月；在效期内使用试剂。5.3质控试剂：为上海公司提供的配套的HBsAb试剂盒中所附带的阴、阳性对比，2-8℃贮存，有效期12个月每月一次质控小结，失控要有记录及纠正的结果。6.操作方法6.1每孔加入待测标本50微升。6.2每孔加入酶结合物1滴，充分混匀，封板，置37℃孵育30分钟。6.3手工洗板：弃去孔内液体，洗涤液注满各孔，静置5秒，甩干，重复5次后拍干。洗板机洗板：选择洗涤5次程序洗板后拍干。6.4每孔加显色剂A液、B液各1滴，充分混匀，封板，置37℃孵育才1５分钟。6.5每孔加入终止液1滴，混匀。6.６用酶标仪读数，数值取波长450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长630nm），先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。7.质量操纵操作程序7.1每次实验设阴性、阳性各2孔，并设空白对比1孔随常规标本一起检测。7.2质控结果登记到本年度的“免疫室定性检测项目室内质控登记表”。7.3一旦发觉失控，应即时查找和分析缘故，并在该结果栏作详细的批注和记录解决的过程；失控情形处理及缘故分析详见8“失控处理”。7.4每月进行质控小结。并将原始数据打印和存盘留档。8.失控处理操作程序8.1失控情形处理：操作者在分析质控结果时，如发觉质控违抗了操纵规则，应填写失控报告单，上交专业室主管（组长），由专业室主管（组长）做出是否发出或重测与质控品有关的该批次病人标本检验报告的决定。8.2失控缘故分析：失控信号的显现受多种因素的阻碍，这些因素包括操作上的失误、试剂、对比物的存贮条件改变、仪器爱护不良以及采纳的质控规则、操纵范畴、一次测定的质控标本数等等。失控信号一旦显现就意味着与测定质控品有关的该批病人标本报告可能作废，现在第一要查明导致失控的缘故，是对比物本身的缘故依旧对比物以外的缘故。如是对比物以外的缘故则应判为真失控，与对比物有关的同批次病人标本重新检测；如是对比物本身的缘故，则判为假失控，与对比物有关的同批次病人标本不必重测，能够发出报告。当失控信号显现时，能够采取以下步骤去查找缘故：8.2.1赶忙重测同一对比物。此法要紧用于查明人为误差，每一步都应该认真认确实操作，以查明失控的缘故；另外，这一步还能够查出偶然误差，如是偶然误差，则重测的质控结果应在承诺范畴（在控），能够认为该批次的病人标本不必重测。如仍不在承诺范畴则能够进行下一步。8.2.2新开一瓶对比物，重测失控项目。如果新开的对比血清结果正常，那么原先那瓶对比血清可能过期或在室温放置时刻过长而变质，或者被污染，现在能够认为该批次病人标本不必重测。如仍不在承诺范畴则能够进行下一步。8.2.3进行仪器爱护，重测失控项目。检查仪器状态，检查光源是否更换，对仪器进行清洗爱护，然后再测质控品，如在控，则讲明是仪器缘故，该批次的病人标本应重测。如仍不在承诺范畴则能够进行下一步。8.2.4更换另一试剂盒，重测失控项目。检查试剂是否过期或贮存环境，更换试剂盒重新检测对比物，如在控则讲明试剂存在咨询题，该批次病人标本应重测。如仍不在承诺范畴则能够进行下一步。8.2.5请专家关心。前4步都未能得到在控结果，如果其他同类型检验项目在控，则需要联系试剂厂家寻求技术关心；如果其他同类型项目也失控，则需要与仪器厂家工程师取得联系了。9.注意事项9.1从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反应条应置37℃平稳30分钟后方可使用，余者应及时封存于冰箱中以备后用.在平稳试剂的同时，待测标本应需置平稳30分钟后再行测试。9.2使用前试剂应摇匀，并弃１～２滴后垂直滴加。9.３封片不能重复使用。9.４结果判定需在反应终止后10分钟内完成。9.５不同批号的试剂不能混用。9.６待测标本不可用NaN3防腐，腐烂如需稀释标本，请用小牛血清稀释。9.７本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室检查规程处理。10.结果运算10.1样品OD值/阴性对比平均OD值≥2.1判定为阳性，否则为阴性。10.2阴性对比OD值低于0.05作0.05运算，高于0.05按实际OD值运算。11.警告值11.1当HBsAb检测值在2.1-2.5之间一样视为低浓度区或灰区。12结果讲明12.1标本的HBsAb值<2.1被认为HBsAg阴性，反之则被认为阳性结果。12.2对处于灰区或可疑标本，应重复检测或进一步做确证试验。12.3关于假阳性结果的缘故可能有：血清标本中含有颗粒性物质（红细胞）或纤维蛋白丝、前一份血清标本含有高滴度的HBsAb使得在加样时存在携带污染、非特异性反应存在。12.4诊断急、慢性乙型肝炎是否复原，或者是否接触过乙肝病毒，HBsAb检测必须同时结合乙型肝炎其他血清标志物及病人的临床表现进行综合判定。12.5由于机体免疫应答的差异性，对接种乙肝疫苗后、急性乙肝复原期的不同模式转换期可能不显现HBsAb。12.6关于其他体液标本和血库库存血的检测结果只能作为参考。12.7关于反复冻融的血标本或含有颗粒性物质的血标本应离心后再进行检测。12.8肝素治疗病人的血标本可能由于部分凝固而存在潜在的纤维蛋白丝，因此可能产生错误的结果。13.安全防护13.1对任何一份标本（包括质控品、标准品及检测试剂等）都应视其为具有传染性，操作人员在工作时应戴乳胶手套、穿工作服。13.2一旦发生标本容器划破手或躯体、液体溅进眼睛等粘膜