热点17 生物技术实践-2022年高考生物【热点·重点·难点】（新高考专用）（解析版）

热点17生物技术实践

命题趋势

随着时代在不断进步，人们对于生活品质的追求就越来越高，本章节生物技术实践就与生活密切相关,

高考对于这一章节的考查也越来越重视，并且这一章节也偏向于实验操作，有助于培养学生的逻辑思维，

本章节对于知识点的考查会考微生物的分离和培养以及酶的应用，意在考查考生的识记能力和理解所学知

识要点，把握知识间内在联系，形成知识网络结构的能力；能运用所学知识，准确判断问题的能力，属于

考纲识记和理解层次的考查。同时掌握果酒和果醋的制作、腐乳的制作，了解这些发制作过程所选的菌种

类型和代谢类型，识记实验的原理、过程和注意事项，进而利用所学知识结合题干要求分析答题，也是学

生要意识到的。

满分技巧

对于这一章节的考查会主要以解答题为主，要求学生必须熟记知识点，以下是常见细节知识点的考查：

1、单个细菌在平板上会形成菌落，通常可根据菌落的形状、大小、颜色、隆起程度等特征来初步区分不同

种类的微生物。在分离酵母菌时，可在选择培养基中添加青霉素等抗生素来抑制细菌的生长，可从细菌和

酵母菌的混合液中分离酵母菌。

2、微生物常见的接种的方法：（1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，

在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能

形成单个菌落，不可用于菌落计数。（2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在

培养皿表面，经培养后可形成单个菌落，可用于菌落计数。

3、腐乳的制作利用的微生物主要是毛霉，多种微生物参与了豆腐的发酵，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，

其中起主要作用的是毛霉，毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；

脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸，这些小分子物质有利于人体的消化和吸收。

4、泡菜制作的实验原理：（1）乳酸菌在无氧条件下，将糖分解为乳酸.（2）利用乳酸菌制作泡菜的过程中

会引起亚硝酸盐的含量的变化。温度过高，食盐用量不足10%、腌制时间过短，容易造成细菌大量繁殖，

亚硝酸盐含量增加。一般在腌制10天后，亚硝酸盐的含量开始下降。

5、固定化细胞的相关知识点，制作过程中的注意事项：（I）酵母细胞的活化。（2）配制氯化钙溶液：要用

蒸储水配制。（3）配制海藻酸钠溶液：小火、间断加热、定容，如果加热太快，海藻酸钠会发生焦糊。（4）

海藻酸钠溶液与酶母细胞混合：冷却后再混合，注意混合均匀，不要进入气泡。（5）制备固定化酵母细胞：

高度适宜，并匀速滴入。

（1）相对于固定化酶，固定化细胞固定了一系列酶，是多酶系统。

（2）海藻酸钠是固定化酵母细胞常用的包埋材料，其使用的方法是③包埋法。

（3）①缺水状态下，微生物处于休眠状态，在制备固定化酵母细胞过程中先要活化酵母菌，让处于休眠状

态的微生物重新恢复正常状态。酵母细胞活化时体积会增大，因此，活化前应选择足够大的容器。

②配制海藻酸钠溶液是影响实验成败的关键步骤。

③海藻酸钠溶化过程中，要注意用小火或间断加热，不断搅拌，防止海藻酸钠焦糊。

④海藻酸钠浓度要适宜，海藻酸钠浓度过低会导致凝胶珠所包埋的酵母细胞数目较少，海藻酸钠浓度偏高

会导致凝胶珠不是圆形或椭圆形，导致制作失败。

热点话题

葡萄酒、泡菜、癌症、微生物、培养基、无菌操作

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限时检测

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一、非选择题

1.（2021.黑龙江.哈九中高三期末）回答与泡菜腌制和亚硝酸盐测定有关的问题：

⑴制作泡菜时，为缩短发酵周期，腌制前可加入一些雪"陈泡菜汁”，这相当于加入了一些经过

的发酵菌种；还可以采取用热水短时间浸泡蔬菜的手段，此项措施能缩短发酵时间的原因是

（2）泡菜腌制过程中，会产生有机酸、醇类和亚硝酸盐，其中醇类是由假丝酵母进行呼

吸产生的。腌制过程需要控制时间、温度和食盐的用量。食盐过量会导致“咸而不酸”，原因是

（3）家庭制作泡菜过程并没有实行严格的无菌操作就能成功，请解释原因？o

（4）亚硝酸盐对人体有害，而它在泡菜的腌制过程中有先增后减的变化规律，所以需要测定其含量来确定

泡菜的可食用时间，通常应用光电比色法进行亚硝酸盐的定量。泡菜样品处理环节加硫酸锌是为了

；氢氧化钠用来；样品测定时加60%乙酸创设了显色反应所需

要的酸性环境；样品及亚硝酸盐标准溶液加显色剂后需要25min,使用相同光程

的比色杯在550nm光波条件下测OD值。

【答案】

(1)扩大培养破坏膜的选择透性，使细胞中营养物质外流供发酵菌种快速繁殖所用

(2)无氧盐浓度过高使发酵菌种大量失水死亡，产有机酸减少

(3)乳酸菌在短时间内大量繁殖，积累乳酸等代谢产物，抑制了大量不耐酸的杂菌生长

(4)沉淀样品中的蛋白质调节pH暗处静置

【分析】

泡菜的制作及亚硝酸盐含量的测定原理：(1)泡菜的制作原理：泡菜的制作离不开乳酸菌。在无氧条件下，

乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸。(2)测定亚硝酸盐含量的原理：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺

酸发生重氮化反应后，与N-1-蔡基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料。将显色反应后的样品与已知浓度

的标准液进行目测对比，可以大致估算出亚硝酸盐的含量。

(1)

制作泡菜时加入一些“陈泡菜水''是为了提供乳酸菌菌种，这相当于加入了一些经过扩大培养的发酵菌种；热

水可破坏膜的选择透性，使细胞中营养物质外流，供发酵菌种快速繁殖，所以还可以采取用热水短时间浸

泡蔬菜的手段以缩短发酵时间。

(2)

酵母菌无氧呼吸可产生酒精，所以醇类是由假丝酵母进行厌氧呼吸产生的。腌制过程中食盐过量会导致“咸

而不酸”，原因是盐浓度过高使发酵菌种大量失水死亡，产有机酸减少。

(3)

由于乳酸菌在短时间内大量繁殖，积累乳酸等代谢产物，抑制了大量不耐酸的杂菌生长，所以家庭制作泡

菜过程并不需要实行严格的无菌操作就能成功。

(4)

亚硝酸盐含量的测定过程中，泡菜样品处理环节加硫酸锌是为了沉淀样品中的蛋白质；氢氧化钠用来调节

pH；样品及亚硝酸盐标准溶液加显色剂后需要暗处静置/避光放置25min,以排除光照对实验结果的影响，

并使用相同光程的比色杯在550nm光波条件下测OD值。

2.(2021•黑龙江・哈尔滨市第一中学校高三期末)科技是第一生产力，随着生物技术的快速发展，给社会带

来较大经济效益的同时，也备受社会的广泛关注。请回答下列问题：

(1)酒精发酵通常利用含葡萄糖、淀粉或纤维素等的农林产品为原料，在进行酒精发酵时，纤维素酶的添

加可以提高并使酒的品质有所提升；酿制果酒过程中，常因封口不严，导致酒中带有明显

的酸味，使果酒变酸的微生物主要是O

(2)膳食中的亚硝酸盐一般不会危害人体健康。制作泡菜需要测定亚硝酸盐的含量，方法是

其原理是在盐酸酸化的条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N-1-蔡基乙二胺盐酸盐结

合形成将显色反应后的样品与已知浓度的标准显色液目测比较，可以大致估算出泡菜中亚

硝酸盐的含量。

(3)泡菜制作利用的主要微生物是制作泡菜如若方法不当，很容易造成泡菜变质，甚至

发霉变味，可能的原因有(至少写出三条)。

(4)腐乳制作过程中，加盐和加酒所发挥的作用相同的是o

【答案】

(1)原料的利用率醋酸杆菌(醋酸菌)

(2)比色法玫瑰红色染料

(3)乳酸菌泡菜坛密封不严、工具不卫生、食盐用量过低、温度过高、腌制时间过短(任意三条)

(4)抑制微生物的生长，避免豆腐块腐烂变质

【分析】

制作泡菜所用微生物是乳酸菌，其代谢类型是异养厌氧型。在无氧条件下，将糖分解为乳酸。分裂方式是

二分裂。制作泡菜的过程中会产生亚硝酸盐，亚硝酸盐为白色粉末，易溶于水，在食品生产中用作食品添

加剂。膳食中的亚硝酸盐一般不会危害人体健康，亚硝酸盐被吸收后随尿液排出体外，但在适宜pH、温度

和一定微生物作用下形成致癌物质亚硝胺。亚硝酸盐含量发酵时间一般在腌制10天后亚硝酸盐含量开始降

低，故在10天之后食用最好测定亚硝酸盐含量的方法是：比色法，原理是在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与

对基苯磺酸发生，重氮化反应后，与N-1-蔡基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料，与已知浓度的标准显

色液目测比较，估算泡菜中亚硝酸盐的含量。

(1)纤维素酶可将纤维素分解成葡萄糖，提高葡萄糖的含量，这样就能有更多的酒精产生，从而提高原料

的利用率，并使酒的品质有所提升。

使果酒变酸的微生物主要是醋酸杆菌(醋酸菌)。

(2)测定亚硝酸盐含量用的是比色法，其原理是在盐酸酸化的条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮

化反应后，与N-1-蔡基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料，将显色反应后的样品与已知浓度的标准液目

测比较，可以大致估算出泡菜中亚硝酸盐的含量。

(3)

泡菜制作利用的微生物主要是乳酸菌，除此之外还有酵母菌等微生物。泡菜坛密封不严、工具不卫生、食

盐用量过低、温度过高、腌制时间过短等都可能造成泡菜变质，甚至发霉变味。

（4）

腐乳制作过程中，加盐和加酒都能抑制微生物的生长，从而避免豆腐块腐烂变质。

3.（2021.湖南师大附中高二阶段练习）果酒、果醋、腐乳、泡菜是人们非常喜爱的发酵食品，请回答下列

相关问题：

（1）与醋酸菌相比，酵母菌细胞结构的主要特点是O

（2）果汁发酵后是否产生酒精，可以用来检验，在酸性条件下，该物质与酒精反应呈现

________色。

（3）某同学在通过发酵制作果酒时，发现在制作原料中添加一定量的糖，可以提高酒精度，原因是

（4）传统发酵技术以葡萄为原料制作葡萄酒时，可以不添加酵母菌，原因是.

（5）如图为腐乳的生产工艺流程：

现代科学研究发现a过程有多种微生物参与，其中起主要作用的是o经过发酵后的腐乳

味道鲜美，易于消化吸收，原因是O

（6）家庭制作泡菜时无须刻意灭菌，原因是；与变酸果酒表面的菌膜、泡

菜坛内的白膜形成，相关的微生物分别是O

【答案】

（1）具有成形的细胞核

（2）重铭酸钾灰绿

（3）糖类是主要的能源物质，可以为酵母菌的生长、繁殖提供能源物质，还可以作为酒精发酵的原料

（4）葡萄皮上附着有野生的酵母菌

（5）毛霉毛霉将豆腐中的蛋白质分解成小分子肽和氨基酸，将脂肪水解成为甘油和脂肪酸

（6）乳酸菌发酵产生的乳酸可以抑制其他微生物的生长醋酸菌、产膜酵母

【分析】

1、酵母菌既能进行有氧呼吸，也能进行无氧呼吸，无氧呼吸的产物是酒精和二氧化碳，其中酒精可以利用

重铭酸钾来检验，二氧化碳可以利用溟麝香草酚蓝水溶液检验。

2、腐乳的制作利用的微生物主要是毛霉，多种微生物参与了豆腐的发酵，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，

其中起主要作用的是毛霉，毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；

脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸，这些小分子物质有利于人体的消化和吸收。

3、泡菜制作的实验原理：(1)乳酸菌在无氧条件下，将糖分解为乳酸.(2)利用乳酸菌制作泡菜的过程中

会引起亚硝酸盐的含量的变化。温度过高，食盐用量不足10%、腌制时间过短，容易造成细菌大量繁殖，

亚硝酸盐含量增加。一般在腌制10天后，亚硝酸盐的含量开始下降。

(1)

醋酸菌是原核生物，酵母菌是真核生物，真核生物与原核生物相比，结构上主要的特点是具有成形的细胞

核。

(2)

酒精的鉴定可用重铝酸钾溶液，在酸性条件下，酒精能与重铝酸钾溶液反应呈现灰绿色。

(3)

糖类是主要的能源物质，可以为酵母菌的生长、繁殖提供能源物质，还可以作为酒精发酵的原料，因此在

制作原料中添加一定量的糖，发酵产生的酒精更多，可以提高酒精度。

(4)

葡萄皮上附着有野生型酵母菌，因此传统发酵技术以葡萄为原料制作葡萄酒时，可以不添加酵母菌。

(5)

腐乳制作需要多种微生物，其中起主要作用的是毛霉,毛霉含有蛋白酶、脂肪酶等，能将豆腐中的蛋白质

分解成小分子肽和氨基酸，将脂肪水解成为甘油和脂肪酸，这些小分子物质有利于人体的消化和吸收，因

此味道鲜美，易于消化吸收。

(6)

家庭制作泡菜并无刻意的灭菌环节，原因是在发酵过程中，乳酸菌产生的乳酸可以抑制其他微生物的生长。

在氧气充足的条件下，醋酸菌能将乙醇转化成醋酸，因此变酸果酒表面的菌膜主要与醋酸菌有关；泡菜制

作的原理是乳酸菌发酵，在泡菜制作过程中，泡菜发酵液的营养丰富，其表面往往含有适量的氧气，适合

酵母菌生长繁殖，产膜酵母生长繁殖会在泡菜坛液面的形成一层白膜。

4.(2021.吉林.东北师大附中高三阶段练习)大熊猫是我国特有的珍稀野生动物，每只成年大熊猫每日进食

竹子量可达12~38kg。大熊猫可利用竹子中8%的纤维素和27%的半纤维素。研究人员从大熊猫粪便和土壤

中筛选纤维素分解菌。回答下列问题：

(1)纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即。为筛选纤维素分解菌，将

大熊猫新鲜粪便样品稀释液接种至以纤维素为唯一碳源的固体培养基上。

(2)常用的刚果红染色法有两种，一种是先培养微生物，再加入刚果红。另一种是在___________时就加

入刚果红。等培养基上长出菌落后，周围出现的菌落即为纤维素分解菌。这种培养基从功能上

属于培养基。为确定得到了就是纤维素分解菌，还需要进行的实验。

（3）测定大熊猫新鲜粪便中纤维素分解闲活菌数的实验思路：将大熊猫新鲜粪便样液先进行一系列的

涂布到若干个平板上，对菌落数在__________的平板进行计数，则可根据公式推测大熊猫

新鲜粪便中纤维素分解菌活菌数。

（4）为高效降解农业秸秆废弃物，研究人员利用从土壤中筛选获得的3株纤维素分解菌，在37℃条件下进

行玉米秸秆降解实验，结果如表所示。在该条件下纤维素酶活力最高的是菌株理由是

菌株秸秆总重（g）秸秆残重（g）秸秆失重（％）纤维素降解率（％）

A2.001.5124.5016.14

B2.001.5323.5014.92

C2.001.4229.0023.32

【答案】

（1）Ci酶、G酶和葡萄糖昔酶

（2）倒平板透明圈鉴别发酵产纤维素酶

（3）梯度稀释30~300

（4）C接种C菌株后秸秆残重低，失重多，纤维素降解率最大

【分析】

I、纤维素酶是一类复合酶，包括C1酶、CX酶和B葡萄糖昔酶；在筛选纤维素分解的过程中，常用刚果红

染色法，通过观察培养基中是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。

2、分析图表可知：在相同条件下，C组纤维素降解率最高，秸秆失重最多，说明其被分解的最多，即C组

纤维素分解菌纤维素酶的活力最高。

（1）

纤维素是一种复合酶，由Cl酶、Cx酶和葡萄糖昔酶组成。

（2）

常用的刚果红染色法有两种，一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，另一种是在倒平板时就

加入刚果红，等培养基上长出菌落后，纤维素被纤维素酶分解，菌落周围将会出现明显的透明圈；这种培

养基从功能上属于这种培养基从功能上属于鉴别培养基；为确定得到了就是纤维素分解菌，还需要进行发

酵产纤维素酶的实验。

（3）

测定大熊猫新鲜粪便中纤维素分解菌活菌数可采用稀释涂布平板法：将大熊猫新鲜粪便样液先进行一系列

的梯度稀释，涂布到若十个平板上，对菌落数在30~300的平板进行计数，则可根据公式推测大熊猫新鲜

粪便中纤维素分解菌活菌数。

（4）

分析图表可知：在相同条件下，C组纤维素降解率最高，秸秆失重最多，说明其被分解的最多，即C组纤

维素分解菌纤维素酶的活力最高。

5.（2021.黑龙江.哈尔滨德强学校高三期中）在20世纪50年代，酶已被大规模应用于各个生产领域，到了

70年代人们又发明了固定化酶与固定化细胞的技术。

（1）在实际生产中，与固定化酶技术相比，固定化细胞固定的是O

（2）制备固定化酵母细胞，常用的包埋材料是，使用了图中方法[]（填出号码与名称）。

（3）下面是制备固定化酵母细胞的实验步骤，请回答：

酵母细胞的活化-配制CaC12溶液一配制海藻酸钠溶液-海藻酸钠溶液与酵母细胞混合一固定化酵母细胞

①在__________状态下，微生物处于休眠状态。活化就是让处于休眠状态的微生物重新恢复______状态。

活化前应选择足够大的容器，因为酵母细胞活化时O

②影响实验成败的关键步骤是O

③海藻酸钠溶化过程的注意事项是。

④如果海藻酸钠浓度过低，形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞数目。如果形成的凝胶珠不是圆形或椭

圆形，说明O

【答案】

（1）多酶系统（或一系列酶、多种酶）

（2）海藻酸钠③包埋法

（3）缺水正常（生活）体积会增大（增多）配制海藻酸钠溶液小火或间断加热，不

断搅拌较少海藻酸钠浓度偏高，制作失败

【分析】

固定化细胞的相关知识点，制作过程中的注意事项：（1）酵母细胞的活化。（2）配制氯化钙溶液：要用蒸

储水配制。（3）配制海藻酸钠溶液：小火、间断加热、定容，如果加热太快，海藻酸钠会发生焦糊。（4）

海藻酸钠溶液与酶母细胞混合：冷却后再混合，注意混合均匀，不要进入气泡。（5）制备固定化酵母细胞：

高度适宜，并匀速滴入。

（1）

相对于固定化酶，固定化细胞固定了一系列酶，是多酶系统。

（2）

海藻酸钠是固定化酵母细胞常用的包埋材料，其使用的方法是③包埋法。

（3）

①缺水状态下，微生物处于休眠状态，在制备固定化酵母细胞过程中先要活化酵母菌，让处于休眠状态的

微生物重新恢复正常状态。酵母细胞活化时体积会增大，因此，活化前应选择足够大的容器。

②配制海藻酸钠溶液是影响实验成败的关键步骤。

③海藻酸钠溶化过程中，要注意用小火或间断加热，不断搅拌，防止海藻酸钠焦糊。

④海藻酸钠浓度要适宜，海藻酸钠浓度过低会导致凝胶珠所包埋的酵母细胞数目较少，海藻酸钠浓度偏高

会导致凝胶珠不是圆形或椭圆形，导致制作失败。

6.（2021・四川.邻水实验学校高三阶段练习）葡萄酒生产过程中会产生大量的酿酒残渣（皮渣）。目前这些

皮渣主要用作饲料或肥料，同时研究者也采取多种措施拓展其利用价值。回答下列问题：

（1）皮渣中含有较多的天然食用色素花色音，可用萃取法提取。萃取前将原料干燥、粉碎的目的分别是

萃取效率主要取决于萃取剂的O

（2）为了解皮渣中微生物的数量，取10g皮渣加入90mL无菌水，混匀、静置后取上清液，用稀释涂布

平板法将0.1mL稀释液接种于培养基上。IO4倍稀释对应的三个平板中菌落数量分别为78、91和95,则

每克皮渣中微生物数量为个。

（3）皮渣堆积会积累醋酸菌，可从中筛选优良菌株。制备醋酸菌初筛平板时，需要将培养基的pH调至

性，灭菌后须在未凝固的培养基中加入无菌碳酸钙粉末、充分混匀后倒平板，加入碳酸钙的

目的是o培养筛选得到的醋酸菌时，在缺少糖源的液体培养基中可加入乙醇作为O

（4）皮渣堆积过程中也会积累某些兼性厌氧型乳酸菌。初筛醋酸菌时，乳酸菌有可能混入其中，且两者菌

落形态相似。请设计一个简单实验，区分筛选平板上的醋酸菌和乳酸菌。（简要写出实验步骤和预期结果）

【答案】

（1）利于萃取剂溶解花色甘、使原料与萃取剂充分接触性质和使用量

（2）8.8x106

（3）中性或偏碱使培养基不透明，从而使醋酸菌菌落周围出现透明圈碳源

（4）实验步骤：将平板置于无氧环境下继续培养，观察菌落形态和透明圈大小

预期结果：若菌落继续生长，且透明圈增大，则为兼性厌氧型的乳酸菌菌落，若菌落不能继续生长，透明

圈不再扩大，则为醋酸菌菌落

【分析】

1、萃取的效率主要取决于萃取剂的性质和使用量，同时还受到原料颗粒的大小、紧密程度、含水量、萃取

的温度和时间等条件的影响。一般来说，原料颗粒小，萃取温度高，时间长，需要提取的物质就能够充分

溶解，萃取效果就好。

2、醋酸菌的代谢类型是需氧型，乳酸菌是兼性厌氧型。

（1）

天然食用色素花色甘，可用萃取法提取，萃取剂与水应不混溶，萃取前将原料干燥，有利于萃取剂溶解花

色甘，提高溶解率；粉碎的目的是使原料与萃取剂充分接触；萃取效率主要取决于萃取剂的性质和使用量。

（2）

三个平板中菌落的平均数量为（78+91+95）+3=88,因为是将0」mL稀释液接种于培养基上并且进行10,

倍稀释，则每克皮渣中微生物数量为88^0.1x104=8.8x10%

（3）

醋酸菌是细菌，制备醋酸菌初筛平板时，需要将培养基的pH调至中性或偏碱性，灭菌后须在未凝固的培养

基中加入无菌碳酸钙粉末、充分混匀后倒平板，加入碳酸钙的目的是使培养基不透明，醋酸菌产生的醋酸

会分解碳酸钙，产生透明圈，从而筛选出醋酸菌。在缺少糖源的培养基中，醋酸菌会以乙醇为碳源，先把

乙醇氧化为乙醛，再把乙醛氧化为乙酸。

（4）

醋酸菌为好氧菌，乳酸菌是兼性厌氧型，两者菌落形态相似，且二者产生的代谢产物均可使碳酸钙分解，

区分筛选平板上的醋酸菌和乳酸菌，可将平板置于无氧环境下继续培养，观察菌落形态和透明圈大小。若

菌落继续生长，且透明圈增大，则为兼性厌氧型的乳酸菌菌落，若菌落不能继续生长，透明圈不再扩大，

则为醋酸菌菌落。

7.（2021.河南平顶山实验中学）I.基础知识填空

（1）对于需要长期保存的菌种，采用的方法是一般是放在______℃的冷冻箱中保存。

（2）制作腐乳起主要作用的微生物是o腐乳味道鲜美的主要原因是微生物产生的将豆

腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸，其中的氨基酸与钠盐作用形成氨基酸钠。用盐腌制时，注意控

制盐的用量。盐的浓度太低，不足以易变质；盐量过高，会影响腐乳的口味。

（3）在用血球计数板（2mmx2mm方格）对某一稀释50倍样品进行计数时，发现在一个方格内（培养液厚度为

0.1mm）酵母菌平均数为16,据此估算10mL培养液中有酵母菌______个。

H.下图是提取胡萝卜素的实验流程示意图，请据图回答下面问题：

胡萝卜-①-②一萃取一③一④一胡萝卜素

（1）上图中，①②③④依次代表的是O

（2）天然区胡萝卜素价格不菲，因此原料利用时萃取的效率至关重要。萃取的效率主要取决于o

【答案】甘油管藏-20毛霉蛋白酶抑制微生物生长2x107粉碎、干燥、过滤、浓

缩萃取剂的性质和使用量

【分析】

腐乳制作实验原理：（1）参与豆腐发酵的微生物有青霉、酵母、曲霉、毛霉等多种，其中起主要作用的是

毛霉。（2）毛霉是一种丝状真菌，常见于土壤、水果、蔬菜、谷物上，具有发达的白色菌丝。（3）毛酶等

微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可将脂肪分解成甘油和脂肪

酸。萃取胡萝卜素的萃取剂应具有的特点：具有较高的沸点，能够充分溶解胡萝卜素，并且不与水混溶。

胡萝卜价廉易得，B?胡萝卜素含量也较高，常用作提取0胡萝卜素的原料。萃取的效率主要取决于萃取剂

的性质和使用量，同时也受到原料颗粒的大小、紧密程度、含水量、萃取的温度和时间等条件的影响。

【详解】

I.（1）菌种保藏的目的是保持菌种的纯净，以免被杂菌污染，对于需要长期保存的菌种，采用的方法是甘

油管藏，一般是放在-2（TC的冷冻箱中保存。

（2）在腐乳制作过程中，多种微生物参与了豆腐的发酵，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，其中起主要作用

的是毛霉。乳味道鲜美的主要原因是毛霉等微生物产生的蛋白酶能将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和

氨基酸。其中的氨基酸与钠盐作用形成氨基酸钠；用盐腌制时，要注意控制盐的用量，盐的浓度过低，不

足以抑制微生物生长，可能导致豆腐腐败变质；盐的浓度过高会影响腐乳的口味。

（3）根据题意可知，每个小方格中的酵母菌数量为16个，根据酵母菌种群密度计算公式：酵母菌种群密

度=每个小方格中的酵母菌数量9小方格的容积（2mmx2mmxO.lmmxlO-3）=16+（4X104）=4xl04,因此10mL

培养液中酵母菌的个数=4x104x10x50=2x107个。

II.（1）胡萝卜素的化学性质稳定，不溶于水，微溶于乙醇，易溶于石油酸等脂溶性有机溶剂，可以采用萃

取法提取.提取流程为：胡萝卜-粉碎-干燥-萃取-过滤-浓缩-胡萝卜素。因此图中①②③④依次代表的是粉

碎、干燥、过滤、浓缩。

（2）天然B-胡萝卜素价格不菲，因此原料利用时萃取的效率至关重要，萃取的效率主要取决于萃取剂的性

质和使用量。同时也受到原料颗粒的大小、紧密程度、含水量、萃取的温度和时间等条件的影响。

8.（2021.天津.紫云中学）生活饮用水的微生物安全性曰常检测是很重要的。现要对饮用水中大肠杆菌进行

计数，并进行纯化培养。请回答下列问题：

（1）培养大肠杆菌所用的LB培养基一般用法灭菌。检验大肠杆菌的含量时，将水样用

进行一系列的梯度稀释。

（2）用移液器取稀释后的水样0.1mL滴到培养基表面，用灭菌后的（用具）涂布到LB固体培养基

上，待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板置于37℃恒温培养箱进行培养1—2d。

（3）菌落计数：上述操作中采取的细菌计数方法是o通常选用一定稀稀释范围的样品液进行

培养，选取菌落数为的平板进行计数。同一稀释度下至少对3个平板重复计数，然后求出

（4）下图表示培养和纯化大肠杆菌的部分操作步骤，下列相关叙述正确的是.

①②③④

A.步骤①倒平板操作时，倒好后应立即将其倒过来放置

B.步骤②接种环火焰上灼烧后迅速蘸取菌液后划线

C.步骤③多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后出现单个菌落

D.步骤④恒温培养箱培养后可用来对大肠杆菌进行计数

【答案】高压蒸汽灭菌无菌水涂布器倒置稀释涂布平板法30-300平均值C

【分析】

1、稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养

基的表面，在适宜条件下培养，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从

而能在培养基表面形成单个的菌落。能够测定样品中活菌数的方法是：稀释涂布平板法。

2、由图可知，①是倒平板，②是用接种环蘸取菌液，③是进行平板划线，④是培养。

【详解】

（1）培养基一般采用高压蒸汽灭菌法灭菌。检验大肠杆菌的含量时，防止杂菌污染，通常将水样用无菌水

进行一系列的梯度稀释。

（2）用移液器取稀释后的水样0.1mL滴到培养基表面，用灭菌后的涂布器（用具）涂布到LB固体培养

基上，待涂布的菌液被培养基吸收后，为了防止冷凝水污染培养基，因此需要将培养基倒置于恒温培养箱,

在37℃恒温培养箱进行培养1—2d。

（3）菌落计数：上述操作中采取的细菌计数方法是稀释涂布平板法。通常选用一定稀释范围的样品液进行

培养，为了保证结果准确，一般选择菌落数在30—300的平板进行计数。设置重复组，增强实验的说服力

与准确性，同一稀释度下至少对3个平板重复计数，然后求出菌落数的平均值，并根据所对应的稀释度计

算出样品中细菌的数量。

（4）A、倒完平板后立即盖上培养皿，冷却后将平板倒过来放置，防止冷凝水污染培养基，A错误；

B、步骤②接种环火焰上灼烧后，待冷却后才可以蘸取菌液后平板划线，防止高温杀死菌种，B错误；

C、步骤③多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后出现单个菌落，C正确；

D、步骤④培养箱培养后可用来对大肠杆菌进行分离得到纯种，平板划线法不能对微生物进行计数，D错误。

9.（2021•四川省内江市第六中学）木质纤维素类生物质是地球上最丰富的可再生资源，既可以转化为能源

燃料，也能通过生物方法获得各种可再生的生物基材料。研究人员拟从大熊猫粪便中筛选纤维素分解菌。

回答下列问题：

（1）常规微生物实验中，下表中物品及其灭菌方法错误的是（填序号）。配制的培养基必须进行

灭菌处理，目的。

序号①②④

物品培养基接种环培养皿涂布器

灭菌方法干热灭菌灼烧灭菌灼烧灭菌高压蒸汽灭菌

（2）为筛选纤维素分解菌，研究人员将大熊猫的新鲜粪便样品接种在以纤维素为唯一碳源的固体培养基上

进行培养，该培养基从功能上分类属于培养基。单个细菌在平板上会形成菌落，通常可根据

（至少答出2点）来初步区分不同种类的微生物。如在培养基中加入可从大

熊猫的新鲜粪便混合液中分离酵母菌。

（3）用平板培养纤维素分解菌时，一般需要将平板（填“倒置”或“正置”）。若要测定大熊猫粪便

中纤维素分解菌的数量，请写出主要实验步骤：0

【答案】

（1）①③④杀死培养基中的微生物（微生物和芽抱、抱子），防止杂菌的干扰

（2）选择菌落的形状、大小、颜色（或隆起程度）等特征青霉素

（3）倒置取大熊猫粪便并加入一定量的无菌水稀释，涂布到选择培养基上，培养后选择菌落数为

3（）s3OO的平板统计、计数（建议这里大熊猫粪便的量要限制，或者可以答取一定量的大熊猫粪便。）

【分析】

培养基一般使用高压蒸汽灭菌法灭菌，培养皿使用干热灭菌法灭菌，涂布器使用灼烧灭菌法灭菌。

培养基分类：1、按照培养基的成分来分培养基按其所含成分，可分为合成培养基、天然培养基。2、按照

培养基的物理状态分培养基按其物理状态可分为固体培养基、液体培养基和半固体培养基三类。3、按照

培养基用途分培养基按其特殊用途可分为加富培养基、选择性培养基和鉴别培养基。

（1）

培养基一般使用高压蒸汽灭菌法灭菌，培养皿使用干热灭菌法灭菌，涂布器使用灼烧灭菌法灭菌，即①③④

错误。配制的培养基必须进行灭菌处理，目的是杀死培养基中的微生物（微生物和芽胞、泡子），防止杂菌

的干扰。

（2）

由于是筛选纤维素分解菌，所以应将将大熊猫的新鲜粪便样品接种在以纤维素为唯一碳源的固体培养基上

进行培养，根据培养基的分类分析该培养基应为选择培养基。单个细菌在平板上会形成菌落，通常可根据

菌落的形状、大小、颜色、隆起程度等特征来初步区分不同种类的微生物。在分离酵母菌时，可在选择培

养基中添加青霉素等抗生素来抑制细菌的生长，可从细菌和酵母菌的混合液中分离酵母菌。

（3）

测定大熊猫粪便中纤维素分解菌的数量时，取大熊猫粪便并加入一定量的无菌水稀释，涂布到选择培养基

上（至少3个），培养一段时间后（倒置培养），选择菌落数为30~300的平板统计，再根据公式计算数量。

10.（2021•黑龙江・哈尔滨市第六中学校）检验饮用水的细菌、病毒的含量是有效监控部分疾病发生的必要

措施。请回答下列与检验饮用水中大肠杆菌有关的问题：

（1）检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的水样用

分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行培养，记录菌落数量，这种方法称为o下图所示的四种

菌落分布图中，图___________不是由该方法得到的，而是利用方法得到的。与微生物培养明

显不同的是，用于组织培养的培养基中还需要加入O

（2）有三种材料或用具需要清毒或灭菌：①培养细菌用的培养基与培养皿；②玻棒、试管、烧瓶和吸管；

③实验操作者的双手。其中需要消毒的是,需要灭菌的是。

（3）以下微生物发酵生产特定产物时，所利用主要微生物的细胞结构与大肠杆菌相同的是

A.制作果酒B.由果酒制作果醋C.制作泡菜D.制作腐乳

【答案】涂布器稀释涂布平板法D平板划线法植物激素（或生长素和细胞分裂素）③

①②B,C

【分析】

1、微生物常见的接种的方法：（1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，

在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能

形成单个菌落，不可用于菌落计数。（2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在

培养皿表面，经培养后可形成单个菌落，可用于菌落计数。

2、消毒是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽抱和抱子），灭

菌则是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽泡和胞子。

【详解】

（1）将水样进行一系列的梯度稀释，用涂布器将不同稀释度的水样分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行

培养，记录菌落数量的方法称为稀释涂布平板法。如图所示的四种菌落分布图可知，图ABC是稀释涂布平

板法得到，而图D是利用平板划线法方法得到的。与微生物培养明显不同的是，用于组织培养的培养基中

还需要加入植物激素，加入植物激素的目的是诱导根、芽的分化。

（2）消毒是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物，适用于③实验操作者的

双手，灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所用的微生物，适用于①培养细菌用的培养基与培养皿、

②玻棒、试管、烧瓶和吸管。

（3）大肠杆菌是原核生物，故选项中利用主要微生物的细胞结构与大肠杆菌相同的也应是原核生物。

A、制作果酒用到的微生物是酵母菌是真核生物，A错误；

BC、制作果醋和制作泡菜分别用的微生物是醋酸菌和乳酸菌，二者都是原核生物，BC正确；

D、制作腐乳用到的微生物是霉菌，属于真核生物，D错误。

故选BCO

11.（2021.黑龙江大庆育才实验）酱油作为生活中常用的调味剂，距今已经有几千年的历史。酱油的风味受

到多种因素的影响，其中发酵过程中微生物的生物化学反应对各类风味活性物质的生成具有重要作用。对

酱油发酵过程的研究表明发酵前期曲霉占主导地位，后期则以酵母菌群为主。现有一实验小组想从酱油的

酱渣中筛选细菌并确定其种类，实验步骤如下：

①取2.5g酱渣到无菌采样袋中，加入22.5mL无菌水震荡15min,在此基础上，进一步稀释至IO?、

10\10\105、106倍。

②取稀释106倍后的菌悬液0.1mL,涂布到牛肉膏蛋白陈培养基上，一组在37C下培养48h,另一组在

培养基表面覆盖液体石蜡并在相同条件下培养。

③待长出菌落后选取典型菌落进行划线分离和纯化镜检，并进行保藏。请回答下列问题：

（1）本实验步骤①②中培养并分离酱油中的细菌采用的接种方法为。

（2）在步骤②中，另一组培养基表面覆盖液体石蜡是为了。培养48h再观察的原因是防止因培

养时间不足而导致O

（3）待长出菌落后，可以通过观察菌落的（答出两点即可）等方面的特征来进行细菌的区分和

鉴定。结果表明在酱油中能检出的细菌有芽胞杆菌、葡萄球菌、四联球菌等，其中芽胞杆菌能够产生蛋白

酶，将蛋白质分解为为酱油增加独特的口感。葡萄球菌可以产生有机酸，降低酱油pH,在

发酵后期主要为的后续生长与发酵提供适宜的环境。

（4）为了临时保藏分离出来的菌种，我们可以将它接种到培养基上，但是此方法保存的时间不

长，菌种容易。

【答案】稀释涂布平板法隔绝空气，筛选厌氧菌遗漏菌落数目大小、形状、颜色、隆起程度

小分子肽和氨基酸酵母菌固体斜面被污染或者产生变异

【分析】

1、接种微生物的方式常见有：平板划线法、稀释涂布平板法等，目的是防止杂菌的污染，保证培养物的纯

度。

2、蛋白质是由氨基酸脱水缩合聚合而成的生物大分子，蛋白质可分解为小分子多肽和氨基酸。

【详解】

（1）本实验步骤①②是为了稀释菌落后进行培养，采用的是稀释涂布平板法。

（2）培养基表面覆盖液体石蜡可隔绝空气，制造无氧环境，利于厌氧菌生长。培养时间应略长，才可保证

所有菌落均长成，才不会遗漏菌落数目。

（3）每种菌落的大小、形状、颜色、隆起程度等特征是不一样，可根据以上特征判断菌落种类。蛋白酶可

将蛋白质分解为小分子肽和氨基酸。对酱油发酵过程的研究表明发酵前期曲霉占主导地位，后期则以酵母

菌群为主。葡萄球菌可以产生有机酸，降低酱油pH,在发酵后期主要为酵母菌的后续生长与发酵提供适

宜的环境。

（4）固体斜面培养基可用于保存菌种，但是保存时间不可过长，因为菌种容易被污染或产生变异。

12.（2021•广东茂名实验中学）鉴江是粤西沿海最大的河流，沿河两岸的居民生活用水基本来源于鉴江。但

若生活污水未经