鸡胚接种技术实验

鸡胚接种技术

Steadyandcontractedbusinesssummary2018实验三、实验材料：96孔V型微量反应板、微量振荡器、病毒材料、红细胞悬液、生理盐水、微量吸液器、注射器、抗凝剂、离心机、恒温箱等。四、方法与步骤：㈠制备鸡红细胞悬液：⒈用注射器抽取抗凝剂。2.用上述注射器，采用无菌法抽取健康的未免疫鸡的静脉血，与抗凝剂等量。3.混匀，加生理盐水适量，洗涤离心，共离心三次（第一、二次2000转/分5分钟、第三次3000转/分8分钟）洗去血清及白细胞。⒋所余的纯红细胞，用生理盐水稀释100倍，即成1%的鸡红细胞悬液。（二）按下表顺序加样弃去.025试管号123……..10对照对照生理盐水0.0250.0250.025……..0.0250.0250.025病毒0.0250.0250.025……..0.0250.0250.0红细胞0.0250.0250.025……..0.0250.00.025病毒稀释倍数21

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（三）置于振荡器上振荡1分钟。（四）37℃恒温箱20分钟观察结果。（五）判定结果：（＋）凝集反应者，凝集的红细胞呈薄膜状，均匀的复满孔底，有的似有红细胞沉积于中央。（－）红细胞全部沉于孔底中央，周围无散在的红细胞。6）观察结果：一层红细胞均匀地铺于孔壁上者为++++。基本同上，但边缘不整齐，铺的面积稍小些者为+++。红细胞形成一个环状，四周有小凝集块者为++。红细胞形成一个小团，但边缘不光滑，四周有小凝块者为+。如用鸡红细胞于孔底形成一个小团，边缘光滑有立体感，将板倾斜片刻，就可见红细胞滑动像人的眼泪样为-。如用豚鼠或人红细胞形成一个小圆圈，边缘光滑无任何小凝集者为-。“±”即为可疑，计算时以“-”（阴性）处理。HaemagglutinationDilution248163264128256512prozonetitre1024Novirus病毒的红细胞凝集抑制试验（HI）

一、概念病毒引起的血凝现象能被相应的抗血凝素抗体所抑制，称血凝抑制。利用血凝素特异性抗体与病毒表面相应的HA相互作用，使病毒血凝现象抑制的试验称血凝抑制试验。血凝原理血凝抑制原理⒈血清学试验：体外的抗原抗体反应叫血清学试验。⒉HI试验：病毒的红细胞凝集现象，可以被特异性免疫血清所抑制，称HI试验。⒊抗体效价：出现红细胞凝集抑制现象的血清的最大稀释倍数叫抗体效价。二、动物体内抗体存在情况⒈病畜体内，因受病毒抗原刺激，产生大量相应抗体，故体内抗体效价较高。⒉健康动物，免疫接种后，因受疫苗（抗原）刺激，而发生免疫应答反应，体内抗体效价较高。三、实验材料：微量血凝反应板、振荡器、微量移液器、生理盐水、病毒（4个血凝单位）、红细胞悬液、恒温箱、被检血清等。试管号123……..10对照对照血清稀释倍数21

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生理盐水0.0250.0250.025……..0.0250.0250.025血清0.0250.0250.025……..0.0250.025病毒0.0250.0250.025……..0.0250.025振荡1分钟，37℃温箱10分钟红细胞悬液0.0250.0250.0250.025……..0.0250.025振荡1分钟，37℃温箱15—20分钟四、方法与步骤：血凝抑制试验结果判定测定孔RBC沉于孔底中心，呈纽扣状。(+)

凝集（-）血清对照孔：RBC沉于孔底，无自凝病毒对照孔：凝集RBC对照孔：无自凝血凝抑制试验效价：呈完全血凝抑制使的最高血清稀释度。（五）判定结果：⒈诊断疫病⑴抗体效价大于25或效价值参差不齐，并伴有相应病症者为阳性。⑵抗体效价为24为可疑。⑶抗体效