中药制剂分析课件

绪论

中药制剂分析----以中医药理论为指导，运用现代分析理论和方法研究中药制剂质量的一门应用学科。第一节概述一、中药制剂分析的任务

物理

原药材

鉴别运用化学方法和手段中间体

检查

生物学

制剂

含量测定

微生物学

全面控制中药制剂的质量中药制剂分析的对象

制剂组方中起主要作用的有效成分、毒性成分、或其他影响疗效、质量的化学成分，对其做出定性鉴别、检查、定量等各方面的评价。

一）中药制剂分析的对象是复杂的混合物

1.中药制剂的原药材具有复杂性

①原药材的品种、规格、产地、药用部位、采收季节、加工方法等的影响。如：同名异物，同科不同种

②炮制方法的影响如：延胡索醋制；白术麸炒；草乌蒸制

二、中药制剂分析的特点

2.中药制剂化学成分的多样性、复杂性

1）由多味中药组成的复方制剂，化学成分极为复杂2)各种化学成分在中药中的含量相差悬殊。3）中药制剂由多种药材组成，所含化学成分相互作用如：黄连、黄柏与黄芩、甘草、金银花配伍3.制剂工艺及辅料的特殊性①制剂工艺各异---很多在单味中药鲜品中存在的化学成分，经过炮制或制备工艺中经加热处理后已不复存在，或在制备过程中因挥发、分解、成盐(沉淀)反应等增加了中药分析的困难。②中药制剂的剂型繁多，所用辅料多种多样，辅料的存在对分析有一定影响。故测定前样品必须经过预处理，排除各种辅料的干扰，必要时还须进行辅料的检查和测定。二）以中医药理论为指导评价中药制剂质量1。首先以中医药理论和用药原则为指导，进行组方分析，按功能主治分出君、臣、佐、使药味，找出主药。

2。选择合适的化学成分为检测指标，分析和评价中药制剂的质量三）中药制剂有效成分的非单一性全面、整体控制中药制剂的质量多指标、多成分的含量测定体系中药指纹图谱

三、影响中药制剂质量的因素(一)原料药材的品种、规格、产地、药用部位、采收季节、加工方法的影响

(二)炮制方法的影响

（三）制剂生产工艺的影响

(四)中药制剂的包装、贮藏、保管的影响

四.中药制剂质量控制的现状和发展趋势

一）国外药物分析发展趋势

基本的方法主要为：分离分析法、电化学法、光谱法和联用分析方法等。

各种色谱及其联用技术已成为占主导地位的常规分析方法，如HPLC、GC、HPTLC、HPCE、LC-MS联用等。

体内药物分析研究，趋向于采用在线的联用微透析分析技术，如on-lineMD-CE、on-lineMD—LC等.

手性药物作为化学药物的特殊群体，以HPLC和CE为主要拆分手段的手性药物分析方兴未艾，已成为全世界药物分析的研究热点。二）国内中药制剂分析现状与发展趋势1、国内中药制剂分析现状1）光谱法的应用A比色法如丹参素/丹参注射液阿魏酸/当归浸膏--定量

B紫外-可见分光光度法单波长法如蒽醌/何首乌，香豆素/祖师栗膏--定量双波长法靛蓝、靛玉红/喉痛消炎丸--定量三波长法小檗碱/三黄片--定量一阶导数光谱法绿原酸/感冒咳嗽冲剂麻黄碱/哮喘丸--定量二阶导数光谱法胆酸/清宫冲剂血竭/七厘散--定量三阶导数光谱法氢溴酸东莨菪碱/中麻2号注射液-定量

C荧光法丹参素/丹参注射液

D红外分光光度法

-体、-体/山道年；番木鳖碱、马钱子碱/马钱子

E质谱法

F核磁共振光谱法

2）色谱法的应用A纸色谱法已较少应用

B薄层色谱法应用广泛

C棒状薄层色谱法小檗碱/复方黄柏制剂人参皂甙/人参------定量胆酸和去氧胆酸/熊胆D气相色谱法挥发性成分定量冰片/复方丹参片/牛黄解毒丸/冠心苏合丸等厚朴酚、和厚朴酚/藿香正气水麻黄碱/葛根汤E高效液相色谱法应用广泛，以反相HPLC为主黄连素/半夏泻心汤红景天甙/红景天口服液;

甘草酸/千金升白冲剂3）电化学分析法的应用

A库仑法

B电位法药物电极测定法和电位溶出分析法

4）其他

A原子吸收光谱法和冷原子技术

B原子发射光谱

CX射线分析法

中药体系存在的突出问题具体表现在：(1)定量分析指标与其主要药效作用间缺乏相关性；(2)与化学药物相比，中药是一个由多成分、多因素构成的复杂体系，目前还没有建立起一套有效的中药复杂体系定量分析标准。

2。国内中药制剂分析发展趋势

(1)中药有效成分的筛选与确定

应用仿生学、基因组学等学科的理论和进展，发现新的药物靶标，从分子、基因、受体、组织和整体水平系统准确地确定中药复杂体系中的药效物质.

(2)中药有效成分的提取与分析

中药化学成分非常复杂，而且有效成分也具有相对性。为了高效率地提取中药有效成分，应用各种现代提取技术，如SFE、SWE、UAE等，可用于中药复杂体系中有效成分的提取，利用准确的仪器分析方法和计算机技术，通过因子分析方法对中药复杂体系进行定性定量评价；(3)中药药效物质与中医药理论相关性研究

利用现代分析方法研究中药复杂体系中药效物质与中医药理论的定量关系，并结合现代医学理论，阐明其作用机制，在此基础上对中药及其复方进行全面质量控制。

中药制剂分析程序一般可分取样、制备供试品、测定（包括定性鉴别、杂质检查、含量测定）和书写检验报告。第二节

中药制剂分析工作的基本程序一、取样1．科学性、真实性和代表性：取样原则是均匀、合理2．严格按规定的取样方法进行取样。一般应从每个包装的四角和中央五处取样，深度可达1/3

2/3处。取得的样品装入清洁、干燥、具磨口塞的容器或密封的塑料袋中，并注明品名、批号、数量、取样日期及取样人。3．抽取供试品的数量：各类中药制剂取样大致是至少够3次检验的用量。贵重药品可酌情取样。

取样方法1.固体样品取样方法：1）抽取样品法：2)圆锥四分法：适于样品量不大的粉末状、小块状及小颗粒状样品的取样2.液体样品取样方法分层取样取样量粉状制剂（散剂、颗粒剂）一般取样100g，可从包装的上、中、下三层及周围间隔相等部位取样若干，将所得样品混匀，按〝四分法〞从中取出所需供试量液体制剂（口服液、药酒、糖浆、酊剂等）一般取样200ml。同时须注意均匀取样。固体中成药（丸剂、片剂）成品取样一般为100g，压片后取样200片。丸剂一般取10丸。

胶囊剂称取不少于20个胶囊，倾出其中的药料，称定空胶囊的重量，由总重中减去，即为胶囊内药料的重量。依标示量及供试量称取部分药料供分析。一般取样量为100g。

注射液的取样，灌注、熔封，灭菌前后应经过两次分析。灌封前将注射液混合均匀，如液体取样原则取样，再按标示量及供试量分别取部分进行检验；经灭菌后的注射液须按原来的方法进行分析检验。已封好的安瓿，取样量一般为200支。

其它剂型的中成药，可根据具体情况随意抽取一定数量，作为随机抽样。

供试样品检验完毕，应保留一半数量作为留样观察。供试品制备的原则：最大限度地保留被测成分，除去干扰成分，并使被测成分达到分析方法检测限所需浓度中药制剂供试品溶液的制备一般分为提取、分离、净化等过程。二、

供试品的制备（一）提取方法1.溶剂提取法

萃取法：适用于液体制剂

冷浸法:6~10~20倍药重溶剂，称重，浸泡12~24~48小时，称重，等分取样或取总样测定。适宜遇热不稳定的有效成分；

回流提取法：不适于对热不稳定或具有挥发性的成分

连续回流法：样品置索氏提取器中，利用溶剂反复提取，提取效率高，溶剂少，遇热不稳定的有效成分不宜用此法；超声波提取法：样品置容器中，溶剂提取，效率高，一般样品30min内即可完成。2.水蒸气蒸馏法:适于挥发油、小分子物质3.超临界流体萃取法；脂溶性物质4.升华法1.液-液萃取法:溶剂直接萃取、离子对萃取操作繁，易乳化。2.色谱法（液-固萃取法）:常用净化剂有三氧化二铝、氧化镁、硅胶、活性炭、大孔树脂、离子交换树脂、硅藻土、键合相硅胶C18、C8等。

其中离子交换树脂、硅藻土、键合相硅胶C18、C8等目前有较多商品预处理柱，使用方便，操作简单，净化效率高（二）净化方法3.沉淀法：采用某些试剂沉淀杂质或沉淀待测成分。4.蒸馏法：利用待测成分或其分解产物具有挥发性的特点，采用蒸馏法、收集馏液进行含量测定，必须明确测定成分的结构才可用此法。

三、定性鉴别

1.性状鉴别中成药的形状、颜色、气味等，凡药典收载品，在药典中均有规定，可按要求进行检查。

2.显微鉴别含有中药原粉的中成药保留中药材的显微特征,可以通过这些特征，对中成药进行定性鉴别。

3.理化鉴别药典中常用的方法有：荧光法、显色法、沉淀法、微量升华法；纸色谱法、薄层色谱、液相色谱、气相色谱等。中药定性鉴别应选择其中主药（君药）、辅药（臣药）作为主要对象，其次应鉴别毒剧药及贵重药材。

四．检查中药制剂需要检查的项目大致可分为三类：1）污染型

中成药一般杂质检查项目有：异物、灰分、酸不溶性灰分、重金属、砷盐等；卫生学检查：微生物细菌检查；以及有的产品要求农药残留量的检测。2）特殊杂质型

原料药材掺假、有毒成分的限量检查。3）剂型的要求检查类型（制剂通则要求检查项目）

中成药一般质量要求的检查有：挥发油测定、水分测定（固体制剂）、乙醇含量测定、总固体、相对密度、pH值（酊剂、药酒）、装量差异（片重差异）、崩解度（片剂、胶囊剂）、熔点测定、旋光度测定等。

五．含量测定

中成药含量测定所采用的方法除经典的重量法、容量法(包括中和法、容量沉淀法、络合滴定法、氧化还原法及非水溶液滴定法等)外，还可采用电位法、库伦滴定法、比色法、可见-紫外分光光度法、红外分光光度法、液相色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法、双波长薄层扫描法等。

1.有效成分明确的中药制剂要进行有效成分的含量测定。2.大致明确有效成分，要求测定这些成分的总量。3.对有效成分已知但无理想的测定方法的中药制剂，可通过测定其中某些化学成分的含量间接控制有效成分的含量。4.对有效成分不明确的中药制剂可采用以下方法：选择可能的有效成分或主要成分（指示性成分）进行含量测定；测定药物的总固体量；选择在原料加工炮制时或制备、贮存过程中易损失、破坏的成分进行含量或限量测定。5.中药制剂中含有剧毒性成分则要测定其含量。6.贵重药材在制剂中投料量应加以测定。六.原始记录和检验报告原始记录检验报告第二章中药制剂定量分析方法

第一节可见-紫外光谱法

一、单一物质的定量

定量依据是Beer-Lambert定律，A=

lC。测定单一物质时，先测定物质的吸收光谱，然后选择最大吸收峰的波长

max进行定量分析。一个物质若有几个吸收峰时，可选择吸收峰较高，在此吸收峰处吸光度随波长变化较小，并且其它物质无吸收的波长作为定量条件。一般不选择光谱最左边的末端吸收峰作定量测定的波长。常用定量方法：

1.对照法C样=C标

A样/A标；C标

A样/（A标

C

样）=样品%，C样和C标分别为样品浓度和标准品浓度，C

样为样品标示浓度。

2.标准曲线法：从标准品吸光度-浓度曲线求得样品浓度。

二、

混合物的含量测定

一）

混合物中有a，b两种组分，若两者的最大吸收峰不重合，且在a的

1max处，b无吸收；在b的

2max处，a无吸收。可分别在

1max、

2max处用单一物质的定量方法从混合物中测定a、b的浓度。二）

混合物中有a，b两种组分，吸收光谱部分重叠，在a的

1处，b无吸收；在b的

2处，a有吸收。先在

2处测定总吸收Aa+b，再在

1处测定Aa

1；先从Aa

1直接求出a的浓度，根据a的浓度求出Aa

2。再从Aa+b减去Aa

2后求得Ab

2，就可求得b的浓度。

（三）双波长测定法中药制剂分析中常用的方法为等吸收波长法和系数率法。

1．等吸收波长法

1）基本原理根据左图选出两个波长

1与

2，其选择原则是干扰组分a在

1与

2处吸收度相等，即

Aa

1=Aa

2。而待测组分b在

1与

2处的差吸收度

A应比较大，再在

1与

2处测混合组分溶液的差吸度

A。设

1为参比波长，

2为测量波长，则等吸收波长法原理示意图

A=Aa+b

2-Aa+b

1

=（Aa

2+Ab

2）-（Aa

1+Ab

1）

=Ab

2-Ab

1=（

b

2-

b

1）CbL

2）应用举例喉痛消炎丸中靛蓝、靛玉红的测定

ⅰ）选择等吸收波长：用2～8

g/ml的靛蓝及靛玉红的氯仿溶液在分光光度计上扫描，并用同法扫描出空白样品溶液的吸收曲线。从左图可知靛蓝在540nm、634.4nm处有合适的等吸收波长；靛玉红却是在514．2nm和

566nm处有等吸收波长，而空白样品液在上述波长处的吸收曲线几乎成一条直线、不干扰测图2-1-3靛蓝、靛玉红的吸收曲线

(1)靛蓝(2)靛玉红(3)无青黛样品定，选取靛蓝的测定波长

s1＝566nm、参比波长

R1=514.2nm。可选靛玉红的测定波长

s2=540nm、参比波长

R2=634.4nm。

ⅱ)标准曲线：精密吸取靛蓝对照品溶液0.25、0.50、…、2.0ml；靛玉红对照品溶液0.20、0.40、…、1.40ml，分别放入10ml量瓶中，用氯仿稀释至刻度，分别在上述等吸收波长处测其差吸收度：

A1=A566nm-A514.2nm

；

A2=A540nm-A634.4nm；然后用

A对C作标准曲线；并求出其一元回归方程：

A1＝0.02241·C1(r1＝1.0000)

A2＝0.04060·C2+0.0055(r2＝1.0000)

ⅲ)含量测定：精称喉痛消炎丸细粉约0.2g于索氏提取器中，用氯仿提取至无蓝色，用氯仿定容于50ml量瓶中，再精密吸取5ml置10ml量瓶中，加氯仿至刻度即为样品溶液。将样品溶液在

s1与

R1，处测出

A样1值，用以上

A1式求出靛蓝的浓度及样品中靛蓝的含量。同样，在

s2与

R2处测出

A样2，用以上

A2式求出靛玉红的浓度及样品中靛玉红的含量。

2．联立方程法Aa+b1=Aa

1+Ab

1=a

1CaL+b

1CbLAa+b2=Aa

2+Ab

2=a

2CaL+b

2CbL

（四）三波长测定法此法要求在任一吸收曲线上，能找出满足下述条件的三个波长：即在干扰组分的吸收曲线上，与三个波长相应的点，能在一条直线上。

1．基本原理左图中

1、

2、

3为在任一吸收曲线上，任意选择的三个波长。A1、A2、A3为在三个波长处分别测出的吸收度。根据相似三角形的等比性质，可推导出下式，

ΔA=A2-（mA1+nA3）/（m+n）

={

2–（m

1+n

3）/（m+n）}CL

三波长分光光度法的原理说明ΔA与待测组分浓度C成正比。

2．应用举例二陈丸中陈皮甙的测定

1）总干扰组分的制备及其吸收光谱

ⅰ)除去陈皮甙后，陈皮其他组分提取液的制备：用溶剂(含0.1％氢氧化钠的75％乙醇液)提取陈皮粉，提取液经薄层分离，刮取除陈皮甙以外的所有斑点洗脱，得除陈皮甙以外陈皮其他组分提取液(I)。

ⅱ)二陈丸空白粉提取液的制备：按处方比例配制除陈皮以外的二陈丸空白粉，用上述溶剂提取，得二陈丸空白粉提取液(Ⅱ)。将(I)、(Ⅱ)按处方比例混合，得二陈丸总干扰成分液(Ⅲ)。分光光度计分别测定陈皮甙对照品和(Ⅲ)的吸收光谱。见左图。其他成分对陈皮甙的测定有干扰，用6批不同来源的原料按上法制备(Ⅲ)，并测其吸收光谱，结果谱形相似。可采用三波长法消除干扰。

2）选择三个测定波长作图法粗选，再计算精选在(Ⅲ)的

A=0处，即为精选的三个波长：λ1=318.0nm，λ2=286.0nm，λ3=275.0nm。

3）标准曲线配制不同浓度的陈皮甙对照品溶液，在选出的三个波长处，分别测定吸收度，并算出ΔA值，对ΔA值与浓度C进行直线回归，回归方程为：

ΔA=9.9059C–0.0024(r=0.9990)4）样品测定精密称取二陈丸细粉约0.1g，加100.0ml上述溶剂浸泡提取15小时，过滤，取续滤液2.0ml，用溶剂稀释至5.0ml，在选出的三波长处，分别测定吸收度，计算其ΔA值，再按回归方程算出陈皮甙含量。本法平均回收率：98.28％，RSD：2.12％。

（五）差示光谱法

1．基本原理差示光谱法的关键有二，其一，提供一个近似理想的参比溶液。其二，使待测组分发生特征光谱变化，而赋形剂或其他共有组分却不引起光谱变化，因而可消除它们的干扰。

设Ax、Ay分别代表两种不同介质中待测组分在测定波长处的吸收度，Az代表背景和干扰组分的吸收度，其不受测定介质改变的影响。根据吸收度加和性原理，则

ΔA=A样-A参=(Ax+Az)-(Ay+Az)=Ax-Ay

=(εx-εy)CL

差示光谱中的振幅，即最大吸收与最小吸收之差值，也可进行定量测定，这可提高本法的专属性。

2．应用举例差示光谱法测定含牛黄的中成药中胆红素的含量

1）测定原理胆红素具有高度共轭体系结构，在波长453nm处为最大吸收，在可见光照射下胆红素易氧化成蓝色产物，在453nm处吸收度显著降低。

2）选用日光下照射30分钟或在红外灯下照射4小时测ΔA值。

3）精密称取胆红素2mg于50ml棕色量瓶中，加入适量冷(10℃以下)的酸性氯仿(150ml氯仿中含0.05ml浓盐酸)，于冰水浴中超声振荡20分钟，稀释至刻度，制成储备液。准确吸取0，4、0．8、1，2、1.6、2.0ml储备液于10ml量瓶中，加冷酸性氯仿至刻度，测其光照前后在453nm处的吸收度。回归方程胆红素在酸性氯仿溶液中的吸收光谱为ΔA=0.0804C+0.00570(r=0.9995)。

a．光照前b．光照后除光照反应外，其余操作均需避光。

4）分别制得六应丸、六神丸、牛黄消炎丸的空白样品对照液，在453nm处测得各自光照前后的A值，计算ΔA。实验表明三种成药ΔA值为零或几乎为零。说明其他干扰组分在以上光照条件下不干扰胆红素的测定。

5）精密称取六应丸、六神丸各60mg，牛黄消炎丸120mg置10ml带塞的试管中，准确加入冷酸性氯仿10ml，冰水浴中振荡20分钟，过滤，弃去初滤液，测续滤液光照前后的A值，算出ΔA值。由回归方程算得样品的含量。

本法加样回收率：六应丸为98.8％，RSD=1.8％；六神丸为100.7％，RSD=2.2％；牛黄消炎丸为93.0％，RSD＝1.1％。

（六）导数光谱法

1．导数光谱及其特征通常的吸收光谱，其吸收度是波长的函数

A=C·E=C·ƒ（λ）。对波长求导，将其微分系数（dnA/dλn～λ）对波长扫描可得导数光谱图。特征：

(1)导数光谱的阶数愈高，峰形愈尖锐且数量亦增多。

(2)在零阶光谱的极大处，其相应的奇阶光谱通过零点。在零阶光谱的两拐点处，奇阶导数光谱为极大或极小。

(3)偶阶导数光谱的形状与零阶光谱类似，零阶光谱的峰值对应于偶阶导数光谱的极值，零阶光谱的拐点在偶阶导数光谱中通过零点。

(4)导数光谱谱带的极值数等于导数阶数加1。高斯曲线及其一至四阶导数曲线

导数分光光度的优点：a．能检出两个或两个以上的重叠吸收带；

b．能分辨在强吸收曲线“肩部”的弱吸收带；

c．能精密确定单一吸收峰位置；

d．能消除基线（背景）的影响；

e．能进行定量测定。

2．基本原理吸收光谱服从Beer定律：A＝ε·C·L

根据导数光谱的定义，对上式求导，则：

dA/dλ=（dε/dλ）·CL；d2A/dλ2=（d2ε/dλ2）·CL；

……dnA/dλn=（dnε/dλn）·CL；式中L为定值，给定物质在特定波长处的dε/dλ、d2ε/dλ2……dnε/dλn也是定值，因此，dA/dλ∝C，d2A/dλ2∝C……dnA/dλn∝C。

常用的定量参数的选择方法有：

1）峰-谷法测量相邻峰、谷之间的距离。左图中的h1·h2(振幅，用D表示)。

2）基线法取相邻二同向峰(正或倒)的公切线为基线，以中间的反向峰峰尖至基线的距离为测量值。左图中p1。

3）峰-零法测量峰值到零线间的垂直距离，左图中p2。

4）面积法根据一阶或二阶导数光谱面导数光谱的测量积，

进行定量测定。

3．共存组分干扰吸收的消除

1）一阶导数光谱法消除线性干扰吸收

A=ελCL+aλ+bdA/dλ=（dε/dλ）CL+a

说明线性干扰在一阶导数光谱中对定量参数D(振幅)没有影响，D只与待测组分浓度成正比。

D=(dA/dλ)峰

-(dA/dλ)谷

=[(dε/dλ)

峰-(dε/dλ)

谷]CL

2）高阶导数光谱法消除非线性干扰吸收及用于重叠峰的分离，定量

若干扰组分吸收对波长呈非线性，为一近似的二次吸收曲线，则总吸收度为

A=ελCL+eλ2+fλ+g

对其求一阶、二阶导数得：

dA/dλ=（dε/dλ）CL+eλ

+fd2A/dλ2=（d2ε/dλ2）CL+e

4.导数光谱法中的主要参数

1)微分阶数(n)n的选择主要由干扰组分吸收曲线的形状而定。n越大，分辨力愈强，但信噪比将降低。

2)波长间隔(Δλ)Δλ愈大，测量灵敏度增大，但分辨率降低，通常Δλ选1~2nm为好。

3)中间波长(λm)通常需选两个λm，即λm1、λm2

。其选择原则：待测组分的导数曲线在λm1、λm2处的形状易辨认，较特征；而干扰组分在此处的导数值相等或相近。

5.应用举例

1)肺露中丹皮酚含量的测定

(ⅰ)干扰丹皮酚测定情况的考察：按处方配比，分别取药材，加水适量，蒸馏提制成22味药材的模拟液，以水为空白，分别绘制紫外吸收光谱图。从图中看出，牡丹皮蒸提液紫外吸收很强，枇杷叶和芦根蒸提液紫外吸收较弱，干扰丹皮酚的测定，实验表明：丹皮酚在碱性溶液中的吸收光谱发生红移，Δλ=35±2nm。

1．牡丹皮2．枇杷叶3．芦根

(ⅱ)选择测定波长精取丹皮酚对照液2ml，枇杷叶和芦根蒸提液各10ml，分别于25ml量瓶中，加0.1mol/L氢氧化钠溶液至刻度，混匀。以0.1mol/L氢氧化钠溶液为空白，绘制吸收光谱（零阶）和一阶导数光谱，如下图。按中间波长选择原则，选330和370nm为中间波长，则测定波长为328nm和332nm，368nm和372nm。蒸提液在0.1mol／L氢氧化钠溶液中的光谱图一阶导数光谱图1．肺露2．丹皮酚3．枇杷叶4．芦根1．丹皮酚2．枇杷叶3．芦根

(ⅲ)标准曲线精密量取丹皮酚对照液(0.1mg/ml)0.5、1.0、……3.0ml，分别于25ml量瓶中，加0.1mol/L氢氧化钠溶液至刻度，混匀，以0.1mol/L氢氧化钠溶液为空白，在测定波长处测吸收度，计算一系列ΔA值。ΔA=(A328-A332)-(A368-A372)。标准曲线的回归方程为：

ΔA=-11.08C+0.0009（r=0.9997）

(ⅳ)样品测定取同一批号或不同批号样品，分别精密量取10ml于25ml量瓶中，加0.1mol/L氢氧化钠溶液至刻度，混匀，以0.1mol/L氢氧化钠溶液为空白，在测定波长处测其吸收度，算出ΔA，根据标准曲线的回归方程，计算样品中丹皮酚含量。本法平均回收率99.57％，RSD=0.82%。

2）清宫冲剂中胆酸的二阶导数光谱测定法

（ⅰ）干扰情况的考察胆酸对照液与样品的二阶导数光谱显示，在397nm，386nm波长处有相应的吸收峰和吸收谷。阴性样品二阶导数光谱呈近乎平直线条，见下左图。猪去氧胆酸的二阶导数光谱将360～420nm区间的吸收消除为二次无关吸收，不干扰样品中胆酸的含量测定如下中图。下右图表明，胆酸二阶导数光谱，其峰-谷振幅值D与浓度具有良好的线性关系，因此，可用397nm，386nm两波长的振幅D为定量参数，用峰-谷法进行测定。

样品，胆酸对照品溶胆酸、猪去氧胆酸二对照品溶液液二阶导数光谱阶导数光谱二阶导数光谱A．样品B.胆酸对照品C.阴性样品1．胆酸2．猪去氧胆酸

(ⅱ)测定条件零阶光谱扫描波长：190~550nm；二阶导数光谱扫描波长，360～420nm；Δλ=5nm。

(ⅲ)标准曲线精密称定胆酸对照品约30mg，置100ml量瓶中，加入60％醋酸稀释至刻度，分别精密吸取0.1、0.2…1.0ml于15ml具塞刻度试管中，加60％醋酸至1.0ml，加入稀硫酸14．0ml，摇匀，70℃水浴中放置20分钟，取出静置20分钟后，用1.0ml60％醋酸加14.0ml上述稀硫酸作空白，测二阶导数光谱。中间波长397nm，386nm，测出各峰-谷振幅值D，得回归方程：

D=57.3066C–0.1547(r=1．000)(ⅳ)样品测定精密称取约2.5g样品粉末加50ml氯仿回流提取4小时，常压回收氯仿至干，用60％醋酸溶解，定容于10ml量瓶中，精密吸取1.0ml样品液于15ml具塞刻度试管中，按标准曲线项下操作，测峰-谷振幅值D，按回归方程计算样品中胆酸含量。

本法平均回收率：102.9％，RSD＝0.6％。第二节 薄层色谱法

薄层色谱法(TLC)是一种微量的分离分析技术，具有设备简单，检出灵敏，测定快速，应用广泛等特点。薄层色谱定量的方法可分为二类，一类是薄层洗脱定量法，将被测化合物从薄层上洗脱下来，萃取后，再选择适当方法进行测定。另一类是在展开后的薄层上直接进行测定。

一、薄层洗脱定量

1．点样在薄层板的起始线上，将定量的样品液点成一条状，点样时应避免任何损失。在板的两边，点上对照品作为定位剂，如图A，然后，在选好的溶剂中层开，斑点要集中，不应有拖尾现象。

2．定位对本身有颜色的化合物可直接定位，对有荧光的化合物可在紫外光下观察定位，对多数无色化合物不可在薄层上直接喷显色剂定位，此时，应将待测组分的薄层部分用玻璃板悬空盖住后再喷，这样可利用两边的对照点显色定位。

3．捕集、洗脱和测定定位后，应捕集洗脱，若为软板，可将待测组分的带状区域用捕集器收集，如图(B)。若为硬板，可直接用捕集器收集，也可用刀片将样品区带的吸附剂定量地刮下，再用合适溶剂洗脱后，进行定量测定，如图(C)。

洗脱溶剂，一般应选极性较大，对待测化合物溶解度亦较大的溶剂，如乙醚、氯仿、丙酮、乙醇、甲醇等，在单一溶剂洗脱效果欠佳时，可采用混合溶剂。洗脱方法可采用渗滤法、多次浸出法、加热温浸法、索氏回流提取法等。对不易洗脱的化合物，也可不经洗脱，在吸附剂中加入适当的显色剂，使其定量反应，然后离心或过滤后再进行测定。

二、薄层上直接定量薄层上直接定量的方法有目测法、测面积法、仪器测量法。，目前，用薄层扫描仪扫描测定斑点中化合物含量的方法已成为薄层定量的主要方法，此法也可用于纸色谱、电泳凝胶及其他介质的色谱。

(一)测定原理与方法

1．吸收测定法

(1)Kubelka-Munk原理及方程：当强度为I0的单色光照射到厚度为X的薄层后，其情况如下图所示。

I0为入射光强度i（x）为x处的透射光强。j（x）为x处的反射光强。X为固定相厚度。

Kubelka-Munk指出，当强度为I0的单色光照射到厚度为X的薄层后，光的反射和透射符合下述微分方程：

-di/dX=-(S+K)i+Sjdj/dX=-(S+K)j+Si

S：单位厚度薄层固定相的散射系数；K为薄层色谱斑点或单位厚度薄层固定相的吸收系数；X为由载板表面算起的薄层厚度。

i与j的一般解为：

i=Asinh(bSx)+Bcosh(bSx)

j=(aA-bB)sinh(bSx)+(aB-bA)cosh(bSx)A，B常数，a=（S+K）/S，b=（a2-1）1/2

，Sinh=（ex-e-x）/2；Cos=（ex+e-x）/2，A/B=a/b。为讨论方便，一般计算边界的i和j，即薄层下表面的透射光和上表面的反射光。

X=0时，j=0，i=I0TX=X时，i=I0，j=I0R

则T=b/[asinh（bSX）+bcosh（bSX）]R=sinh（bSX）/[asinh（bSX）+bcosh（bSX）]SX称作散射参数，它与薄层厚度、散射系数有关。Merck硅胶板的SX=3，青岛硅胶板SX＝3，日本和光硅胶F板SX=7。SX数值大小直接影响薄层色谱斑点的吸光度-浓度曲线偏离Beer定律的程度。薄层色谱斑点中物质的含量包含于a及b两个参数中，已知a=（S+K）/S，b=（a2-1）1/2

，乘以X，则

a=（SX+KX）/SXb=[KX（2SX+KX）]1/2/SXKX为吸收参数，相当于薄层色谱单位面积中物质的含量（

g/cm2），即KX=C。

薄层色谱斑点的吸光度：理想的空白薄层板的K=0，但一般K0。为消除影响，通常以空白板为基准，测定相对透光率及相对反射率来计算薄层色谱斑点的吸光度。透射法A=-lg（T/T0）反射法A=-lg（R/R0）

-lgT/T0或-lgR/R0为仪器检测部分所获得的信号，它们和KX间的关系曲线相当于一般分光光度法中的A-C曲线，在溶液中，A-C曲线为一直线，而在薄层上，-lgT/T0或-lgR/R0和浓度间不呈线性关系，比较下图可以看出弯曲度随SX增加而增加。不同SX时，吸光度与KX间关系曲线

a．透射法测定-lgT/T0与KX间关系b．反射法测定-lgR/R0与KX间关系

目前对Kubelka-Munk曲线处理采用两类方法：曲线校直法和计算机回归法。岛津CS系列采用前者，CAMAG仪器采用后者。

1．校正前的标准曲线2．校正后的标准曲线

曲线校直法是一种简便的薄层色谱扫描定量校准方法，但比较粗糙，且有时难于知道薄层板的SX的准确值。

2．荧光测定法荧光测定法的定量依据为：F=φI0abCF为荧光强度；φ为荧光效率；I0为入射光强度；a为吸收系数；b为薄层厚度；c为样品浓度。F与C成正比，二者之间存在线性关系。荧光测定法与吸收测定法不同，其测量值与斑点形状无关。本身具有荧光或经过适当处理后可产生荧光的化合物均可用本法测量。荧光测定法选择性高，因激发光与荧光波长均能加以选择，可避免一些其他组分的干扰，其灵敏度比吸收法高100～1000倍，最低可测到10～50pg样品。

3．荧光淬灭法用紫外光照射荧光薄层板时，薄层板产生荧光(背景)，而在板上样品斑点处，因样品对紫外光有吸收，照到薄层斑点处的紫外光有所减弱，则产生的荧光也减弱，样品呈暗色斑点。测定时，由荧光减弱的程度测出样品中被测物含量。

(三)定量方法主要有外标法和内标法，前者更为常用。

1．外标法首先做待测组分的标准曲线，其纵坐标为各个斑点的峰面积积分值A，横坐标为相应各斑点的物质量(微克数)。此时做标准曲线有2个目的，其一确定该组分的线性范围。其二看标准曲线是否通过原点，若通过原点，分析样品时用外标一点法定量，若不通过原点，分析样品时用外标二点法定量。

(1)外标一点法：C＝FA

(2)外标二点法：C=F1A+F2

C1=F1A1+F2C2=F1A2+F2

解联立方程得：F1=（C1-C2）/（A1-A2）

F2＝0.5(C1+C2)–0.5F1(A1+A2)

2．内标法通常配2份不同浓度的含不同量内标物的对照品溶液，并在一定量样品溶液中加入已知质量的内标物，将这两种溶液分别点在薄层上，展开后，内标物与对照品分开，用同一波长扫描，测峰面积。用对照品与内标物的峰面积比为纵坐标，用二者的浓度比为横坐标作图，所得曲线即为标准曲线。内标一点法

C/CIS

＝A/AIS·FF＝C/CIS·AIS/A

内标二点法中标准曲线的方程式为：

C1/（CIS）1=F1·A1/（AIS）1+F2C2/（CIS）2=F2·A2/（AIS）2+F1解上述联立方程式得：

F1=[C1/（CIS）1-C2/（CIS）2]/[A1/（AIS）1-A2/（AIS）2]F2=0.5[C1/（CIS）1+C2/（CIS）2]–0.5F1·[A1/（AIS）1+A2/（AIS）2](四)影响薄层扫描定量的因素

1．吸附剂性能及薄层质量薄层厚薄要均匀，吸附剂粒度要均匀。粒度不均，影响散射系数。厚度增加，Rf值增大。厚度下降，展开后斑点扩散较严重。透射法测定时，厚度增加，峰面积值增加；反射法测定时，厚度增加，峰面积值减少。

2．点样操作与随行标准原点直径以1～3mm较合适，点样过多会使原点“超载”，展开剂出现“绕行”现象，引起斑点拖尾或重叠，使扫描峰形不对称或不能“基线分离”。定量点样时，尽可能在同一块薄层板上同时点上已知浓度的对照品，即随行标准，一同展开，定量，并由这些对照品的测定值计算样品含量。

3．展开条件将薄层板与展开槽进行预饱和，可得到重现的色谱图。

展开时温度变化应尽量小。展距要适宜，一般Rf值在0.2～0.8时最佳。展开用的溶剂必要时需经过预处理。第一节性状鉴别性状鉴别的内容：

颜色、形态、性状、气、味、其他二.各种剂型的性状描述

见教材p.14～15三.物理常数测定一、制片方法1．散剂、胶囊剂取粉末，直接加水或水合氯醛透化装片。2．片剂用刀片直接从药片断面刮取少量粉末或研碎后取少量样品透化装片。3．水丸、锭剂研成粉末后取少量直接透化装片4．蜜丸取蜜丸切碎，加水搅拌，洗涤后，置离心管中离心分离沉淀。如此反复处理以除去蜂蜜后透化装片

第二节显微鉴别若观察细胞内含物形状，应选用不同试剂制片淀粉粒水或甘油醋酸试液；糊粉粒甘油；水溶性内含物乙醇或水合氯醛试液(不加热)

固定标本片制片方法

取中成药粉末置离心管中，加乙醇浸过上面，玻棒搅拌5～10分钟后离心使粉末沉积，倾去稀醇液，再加无水乙醇二次，丙酮一次，丙酮、二甲苯等量混合液一次，如前操作，每次10～20分钟；最后加入纯二甲苯，略加搅拌，取处理后的样品微量置载玻片上，滴加中性树胶，加盖玻片封藏，贴标签。

二、观察要点

中成药粉末镜检时，首先要了解处方中的药味组成，明确其来源的药用植物的部位，才能根据该部位的显微特征来进行检出。

(一)根类木栓组织碎片，表面观多为多角形细胞，排列紧密。导管直径、节的长短、末梢壁的穿孔及增厚壁的纹理类型草酸钙结晶晶形、分泌组织、淀粉粒的形状、脐点层纹(二)根茎类与根类药材粉末特征相似。而淀粉粒有时较大，有鳞叶组织，退化的鳞叶表皮细胞大多狭长，细胞壁平直或波状弯曲。

(三)茎类1．茎类表皮细胞及垂周壁的形状，气孔的类型，毛茸的类型及形态导管的类型、直径、长短。管胞的形态；纤维的形状、直径、长短、有无晶纤维等。草酸钙结晶多为方晶及簇晶，单子叶植物偶见针晶。薄壁组织碎片、石细胞。

2．皮类纤维的直径、长短及形状，是否成束存在，细胞壁厚薄、木化与否，能否看到胞腔及壁孔等。石细胞的形状、细胞壁增厚情况。草酸钙结晶多为方晶及簇晶，砂晶及针晶较少。皮类药材粉末不应含有木质部组织，如导管、管胞等。

3．木类可见导管、管胞、木纤维、木射线及木薄壁细胞。细胞壁通常均木化。不应有木栓细胞及绿色组织等。

(四)花类1．苞片及花萼构造类同叶片，表面上可见到气孔及毛茸2．花冠上表皮细胞常呈乳头状或绒毛状突起而无气孔，下表皮细胞常不呈乳头状，细胞壁微波状弯曲。维管束组织细小。3．雄蕊1）花粉囊内壁细胞的壁不均匀地增厚，呈网状、螺旋状、环纹状及点状等；2）花粉粒具圆形、长圆形或多面形等多种形状。通常具内外两层壁，外壁多数具各种雕纹。4．雌蕊柱头的表皮细胞呈乳头状突起，或分化成绒毛状

(五)叶类1．表皮上下表皮细胞的形状、大小，角质层的形态，垂周壁的形状、厚度或增厚情况以及有无气孔、毛茸等。2．气孔气孔的形状、大小、型式，保卫细胞的形状及内含物，副卫细胞的数目、大小、形状。3．毛茸注意毛茸的种类。非腺毛：注意细胞的数目、形状、长短、大小、细胞壁的厚薄及表面形态等。多为单列性多细胞毛，少为单细胞毛。形状一般呈长圆锥形或线形；细胞壁一般较薄，外壁表面大都光滑。腺毛：注意头部的形状、大小、细胞的数目、排列情况以及柄部的长短、细胞数目及行列数目等。(六)果实类1．果皮细胞的形状、大小。2．外果皮上可能有非腺毛及腺毛，注意长短、形状。3．中果皮内的分泌组织油细胞，油室、油管、石细胞等

4．内果皮石细胞，大小、细胞壁的厚薄，如为镶嵌层，则应注意其排列形式。(七)种子类1．种皮表皮毛的形状、细胞壁的厚薄、是否木化、有无纹理；石细胞形状、大小、色泽散布及细胞壁的增厚情况。栅状细胞及油细胞。

2．外胚乳细胞大小、形状、壁厚、色泽、细胞内含物3．内胚乳细胞形状、厚度、内含物。

4．胚的子叶有无分泌组织及细胞的内含物。

三、应用实例

六味地黄丸的显微定性鉴别

[显微鉴别]取本品置显微镜下观察，(1)薄壁组织棕色至黑棕色，细胞多皱缩，内含棕色核状物。(熟地黄)(2)果皮表皮细胞橙黄色，表面观类多角形，垂周壁略连珠状增厚。(山茱萸)(3)淀粉粒三角状卵形或矩圆形，直径24—40um，脐点短缝状或人字状。(山药)3a草酸钙针晶束3b淀粉粒(4)草酸钙簇晶存在于无色薄壁细胞中，有时数个排列成行。(牡丹皮)(5)不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛溶化；菌丝无色，直径4-6um。(茯苓)(6)薄壁细胞类圆形，有椭圆形纹孔，集成纹孔群。(泽泻)一、一般化学反应法中药制剂一般选择有效成分、特征成分作为鉴别的对象。一般化学反应鉴别法多在试管中用湿法反应进行，制剂样品要先制成适宜的供试液。一般情形下用50％-70％乙醇回流提取制备供试液。

第三节中药制剂的一般理化鉴别法一般化学反应法用于中药制剂鉴别应注意：(1)慎重使用专属性不好的分析反应，如泡沫生成反应、三氯化铁显色反应等。(2)在分析前对样品进行分离、精制，除去干扰分析反应的物质，借此改善鉴别方法的专属性。(3)采用阴性对照和阳性对照的方式，对拟定的鉴别方法进行反复验证，防止出现假阳性。

取本品6片(去包衣)，研细，加乙醇10ml，温热10分钟，过滤，滤液作如下反应：(1)取滤液5ml，加镁粉少量与盐酸0.5ml，加热，即显红色（黄芩中有大量黄酮）(2)另取滤液4ml，加氢氧化钠试液，显红色，再加30％过氧化氢溶液，加热，红色不消失，加酸或酸性时，红色变为黄色。（大黄中含有羟基蒽醌）

实例1牛黄解毒片中大黄、黄芩的定性鉴别反应实例2牙痛一粒丸中蟾蜍、朱砂、雄黄的定性鉴别反应(1)取本品约0.1g，研细，加氯仿5ml，浸泡1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加醋酐少量使溶解，再滴加硫酸，初显蓝紫色，渐变为蓝绿色。（蟾蜍）(2)取本品约0.2g，研细，加水湿润后，加氯酸钾的硝酸饱和溶液2ml，振摇，放冷，离心，取上清液，加氯化钡试液0.5ml，摇匀，溶液呈白色浑浊，离心，弃去上层酸液，再加水2ml，振摇，沉淀不溶解。（雄黄）(3)取本品适量，研细，用盐酸湿润后，在光洁的铜片上摩擦，铜片表面即显银白色光泽，加热烘烤后，银白色消失（朱砂）

二、显微化学鉴别法

(一)取药材的切片、粉末或中成药粉末，置载玻片上，滴加各种试剂，加盖玻片，在显微镜下观察产生的结晶或沉淀，以及特殊的颜色等，作为鉴别的特征。

例：黄连粉末滴加稀盐酸，放置5分钟，可见小檗碱盐酸盐黄色结晶析出。

穿心莲用水湿润，切成横切片，滴加乙醇后加Kedde试液，叶肉组织显紫红色(穿心莲内酯成分的不饱和内酯环反应)。

丁香切片滴加30％氢氧化钠饱和溶液，略放置，可见油室内有针状丁香酚钠结晶析出。

肉桂粉末加氯仿2～3滴，略浸渍，速加2％盐酸苯肼1滴，可见黄色针状或杆状结晶(肉桂酸反应)。

(二)取药材粗粉加适当的溶剂浸提，将浸提液置载玻片上，滴加各种试剂，加盖玻片，在显微镜下观察反应。例：槟榔粉末0.5g，加水3～4ml及稀盐酸1滴，微热数分钟，过滤，取滤液1滴于载玻片上，加碘化铋钾试液1滴，即发生混浊，放置后可见石榴红球形或方形结晶(槟榔碱)。

曼陀罗叶少许，加氯仿提取，提取液蒸干，加发烟硝酸1滴，显黄色，加氢氧化钾1粒，显紫堇色(莨菪烷类成分Vitali反应)。

(三)取药材切片或粉末，滴加各种试剂，直接观察反应现象。例：钟乳石少许，加浓盐酸数滴，能产生大量气泡(碳酸盐分解产生CO2)。

番木鳖胚乳薄片，加1％钒酸铵-硫酸试液1滴，胚乳速显紫色(番木鳖碱)，另取切片加发烟硝酸1滴，即显橙红色(马钱子碱)。

大黄粉末少许，置白磁板上，加氢氧化钠液l滴，显深红色(蒽醌钠盐)。

三、升华法操作方法：取金属片安放在有圆孔(直径约2cm)的石棉板上，在金属片上放一小金属圈(内径约1.5cm，高约0.8cm)，对准石棉板上的圆孔，圈内放入预先研细成粉末的中药制剂一薄层，圈上覆盖载玻片，在石棉板下圆孔处用酒精灯缓缓加热，至粉末开始变焦，去火待冷，载玻片上有升华物凝集。将载玻片反转后，置显微镜下观察结晶形状、色泽，或取升华物加试液观察反应。实例牛黄解毒丸微量升华鉴别取本品进行微量升华，先得白色升华物后（冰片），继得黄色升华物（大黄中蒽醌）。将升华物分别置显微镜下观察：白色升华物呈不定形的无色片状结晶，加新制的1％香草醛硫酸溶液，渐显紫红色，黄色升华物呈黄色针状结晶或羽状结晶，遇碱显红色，遇酸变为黄色。

四、荧光法有些中药材中含有能产生荧光的化学成分，在可见光、紫外光照射下能发出荧光，或经试剂处理后发出荧光。含有这类药材的中药制剂可用荧光法进行鉴别。通常的操作方法是取制剂的提取液点在滤纸上或试纸上，置紫外光灯下(365nm)观察，有时则是加一定的试剂后再进行观察。

实例l元胡止痛片的荧光鉴别取本品适量，去糖衣，研细，取粉末1g，加0.25mol／L硫酸液10ml振摇片刻，滤过，取滤液数滴，点于滤纸上，阴干后置紫外光灯(365nm)下观察，显亮黄色荧光。

五、光谱法

(一)可见—紫外分光光度法

不同的药材所含的成分不同，在一定条件下吸收光谱的特征可用于鉴别药材。利用这一特点，可见-紫外分光光度法也可用于中药制剂的鉴别。

(二)红外光谱法

六、色谱法中药制剂可用色谱法鉴定，包括薄层色谱法、纸色谱法、气相色谱法和高效液相色谱法。(一)薄层色谱法使用本法鉴定中药制剂，通常是在同一块薄层板上点入样品和适宜的对照物，采用同一条件依法层析展开，经显色或用其他方法检出色谱斑点后，将样品与对照物所得的色谱图进行对比，作出鉴定。

1．样品应作适当的预处理对样品进行初步的分离精制常用的预处理方法有：升华法，蒸馏法，溶剂提取法，小型层析柱的柱色谱法、离子交换法等。

2．展开剂的选择选用能突出主要斑点，便于分析比较的展开剂，如果鉴别的对象相同，应首先试用已有的、较成熟的展开剂。如无现有展开剂，可先以无水乙醇-苯（1∶4）展开，如主要物质的Rf在0.8以上，改用苯-氯仿（1∶3），如主要物质的Rf在0.3以下，改用丙酮-甲醇（1∶1）。

3．对照品的选择中国药典(一部)作薄层鉴别用的对照物有对照品和对照药材两种。

TLC用作中药制剂鉴别的另一类对照物是阴阳对照溶液。

4．薄层色谱的扫描定性鉴别

TLC展开后，斑点的检识方法，有通用性的，如在紫外光灯下观察出现的荧光，或用碘蒸气、稀硫酸、磷钼酸显色等，这类方法专属性不强。另一类是专属性较好的显色剂，例如碘化铋钾试液，茚三酮试液和三氯化铝试液等，一般可依次说明斑点归属。还可用薄层扫描仪将薄层板上的斑点转换绘制成峰形色谱图，这种色谱图以斑点展开后移动的距离为横坐标，斑点对光辐射的吸收强度或发射荧光的强度为纵坐标的峰形曲线图谱。

应用实例1.大黄及含大黄的成药

1）供试液制备取各样品适量，加甲醇20ml浸渍1h，过滤，取滤液5ml，蒸干，加水10ml使溶解，再加HCl1ml，水浴加热30min，立即冷却，乙醚提取两次，20ml/次，合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿溶解成1ml。2）对照液制备取大黄对照药材0.1g．按供试液制备作为对照药材溶液；另取芦荟大黄素，大黄酸，大黄素，大黄素甲醚，大黄酚对照品，加甲醇制成1mg/ml的溶液，作为对照品溶液。3）薄层板硅胶H加0.3％CMC-Na溶液的自制板；厚度：300um4）点样分别点样4uL。

5）展开剂石油醚(30～60℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)放置后的上层溶液。

6）展开方式上行展开；展距：7cm。

7）显色置紫外光灯(365nm)下检视。

8）色谱识别紫外光灯(365nm)下，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同的五个橙黄色荧光主斑点。

9）备注在部分成药样品的色谱中，除大黄的五个蒽醌成分的斑点外，尚有其它荧光斑点，为处方中的其它成分。1234567891011121314151617

样品：1．芦荟大黄素；2．大黄酸；3．大黄素；4．大黄素甲醚；5．大黄酚；6．大黄(掌叶大黄)对照药材；7．大黄(唐古特大黄)对照药材；8．大黄流浸膏；9．小儿化毒散；10．槟榔四消丸；11．木香槟榔丸；12．枳实导滞丸；13．牛黄上清丸；14．清宁丸；15．一捻金；16．牛黄解毒片；17．牛黄解毒丸

2.黄连、黄柏及含黄连、黄柏的成药

1）供试液制备取各品种药粉适量，加甲醇5ml，置水浴回流15min，过滤，滤液浓缩至1ml。

2）对照液制备取盐酸香槟酒小檗碱，硫酸黄连碱，硫酸表小檗碱，非洲防己碱，药根碱，盐酸巴马汀对照品，加甲醇制成每0.5mg/ml的溶液，作为对照品溶液。

3）薄层板硅胶G自制板；厚度：500um

4）点样分别点样1-2ul

5）展开剂苯