中药制剂中各类化学成分分析专家讲座

第六章中药制剂中各类化学成份分析

中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第1页

§1生物碱类成份分析概述理化性质物理性状（存在形态，升华性，挥发性，光学活性）碱性溶解性沉淀反应沉淀剂：碘化物复盐、重金属盐、大分子酸显色反应+酸性染料（磺酸肽类）→有色配合物紫外光谱特征游离—易溶于CHCl3，Et2O，EtOH等有机溶剂生物碱盐—水溶性增强中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第2页生物碱类成份分离溶剂萃取柱层析（氧化铝、硅藻土、离子交换柱）定性判别沉淀反应、显色反应多肽、蛋白质、鞣质等→假阳性反应麻黄碱、秋水仙碱等→假阴性反应马钱子散中生物碱成份判别取马钱子散1g，加浓氨试液数滴及氯仿10ml，浸泡数小时，滤过，取滤液1ml蒸干，残渣加稀盐酸1ml使溶解，加碘化铋钾试液1~2滴，即生成黄棕色沉淀。

中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第3页定性判别薄层色谱判别吸附剂：氧化铝、硅胶展开剂：氯仿、苯等显色剂：改良碘化铋钾试剂，碘蒸气等气相色谱麻黄碱、苦参碱、颠茄类生物碱含量测定液相色谱中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第4页含量测定总生物碱含量测定

化学分析法

分光光度法

直接测定

离子对萃取比色法酸性染料比色法

BH十十In－→（BH十In－）→BH十·In－

苦味酸盐比色法

雷氏盐比色法

异羟肟酸铁比色法（含有酯键结构生物碱）中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第5页含量测定单体生物碱含量测定

薄层色谱法

高效液相色谱法

液—液分配色谱法（以反相为主，如ODS或C18）改进流动相（硅醇基抑制剂、低浓度离子对试剂、季铵盐试剂、电解质缓冲液）固定相改进（封尾技术）液—固吸附色谱法离子交换色谱法（阳离子交换树脂）检测器气相色谱法中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第6页

§2黄酮类成份分析概述理化性质物理性状（存在形态，颜色，挥发性，光学活性）溶解性酸碱性酸性：与酚羟基数目和位置相关7,4‘-二羟基>7-或4‘-羟基>普通酚>5-羟基碱性游离甙元—易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚等黄酮甙—易溶于水、甲醇、乙醇中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第7页理化性质显色反应还原反应（盐酸镁粉反应）金属盐类试剂配合反应（铝、铅、锆、镁盐）紫外光谱特征I带(300-400nm)→B环桂皮酰基II带(240-285nm)→A环苯甲酰基中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第8页黄酮类成份分离溶剂萃取柱层析（聚酰胺柱）沉淀法定性判别显色反应盐酸-镁粉反应金属盐类配合反应中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第9页定性判别薄层色谱判别硅胶--分离弱极性黄酮

展开系统：甲苯-甲酸乙酯-甲酸，氯仿-甲醇

聚酰胺--分离含游离酚羟基黄酮及其苷展开系统：醋酸，醋酸乙酯-甲酸-水等纤维素--分离多糖苷混合物展开系统：正丁醇-乙酸-水，甲酸，乙酸中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第10页含量测定总黄酮含量测定

紫外分光光度法比色法高效液相色谱法正相色谱硅胶固定相—没有羟基或乙酰化黄酮类成份反相色谱（C18或C8）流动相：甲醇-水-乙酸（磷酸缓冲液），乙腈-水检测器中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第11页银杏叶提取物总黄酮醇苷含量测定[含量测定]色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-0.4%磷酸溶液（50：50）为流动相；检测波长为360nm。理论板数按槲皮素峰计算应不低于2500，山柰素酚峰与异鼠李素峰分离度应大于1.5。

对照品溶液制备（略）

供试品溶液制备

取本品10片，除去包衣，精密称定，研细，取约相当于总黄酮醇苷19.2mg粉末，精密称定，精密加入甲醇20ml，称定重量，超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置100ml锥形瓶中，加甲醇10ml、25%盐酸溶液5ml，摇匀，置水浴中加热回流30分钟，快速冷却至室温，转移至50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取滤液，即得。

测定法

分别精密吸收对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，分别计算槲皮素、山奈素和异鼠李素含量，按下式换算成总黄酮苷含量。总黄酮醇苷含量=（槲皮素含量+山奈素含量+异鼠李素含量）×2.51

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§3三萜皂甙类成份分析概述理化性质物理性状（存在形态，表面活性，吸湿性）溶解性紫外光谱特征大多无显著紫外吸收或仅在200nm附近有末端吸收

皂甙元—能溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿等皂甙—可溶于水，易溶于热水、含水稀醇等甘草酸人参皂甙(A型)中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第13页理化性质显色反应醋酐-浓硫酸反应五氯化锑反应三铝醋酸反应冰醋酸-乙酰氯反应氯仿-硫酸反应金属盐类反应+铅、钡、铜盐→沉淀酸性皂甙+硫酸铵/醋酸铅/中性盐→沉淀中性皂甙+碱式醋酸铅/氢氧化钡/碱性盐→沉淀中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第14页三萜皂甙类成份分离溶剂萃取柱层析（大孔树脂柱）沉淀法定性判别泡沫反应显色反应中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第15页定性判别薄层色谱判别吸附剂：硅胶、氧化铝、硅藻土展开剂：三萜皂甙—氯仿-甲醇-水、正丁醇-醋酸乙酯-水等极性较大体系三萜皂甙元--以苯、氯仿、己烷等为主要组分显色剂三氯醋酸、50%及10%硫酸乙醇液、磷钼酸、浓硫酸-醋酸酐、碘蒸气等中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第16页含量测定总皂甙含量测定

重量法比色法显色剂：香草醛-硫酸，香草醛-高氯酸，酸酐-硫酸等等三萜皂甙类单体成份含量测定薄层色谱法高效液相色谱甘草酸、远志皂甙→紫外检测器其它→蒸发光散射检测器（ELSD）中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第17页概述理化性质物理性状（存在形态，升华性，光不稳定性）溶解性酸碱性酚羟基→酸性游离—溶于乙醇、苯、乙醚、氯仿等醌甙—可溶于热水，易溶于甲醇、乙醇丹参醌IIA大黄素中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第18页

§4醌类成份分析理化性质显色反应羟基蒽醌+碱→橙，红，紫红，蓝+Pb2+/Mg2+→配合物+对亚硝基二甲基苯胺→紫，绿，蓝，灰中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第19页定性判别显色反应升华法薄层判别吸附剂：硅胶展开剂：多含甲醇或水混合溶剂系统→分离甙和甙元不含甲醇或水混合溶剂系统→分离甙元显色：碱性试剂，醋酸镁甲醇液、氨熏中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第20页含量测定游离蒽醌测定弱极性溶剂提取后，加碱比色结合蒽醌测定极性溶剂提取，水解测甙元先酸水解后，非极性溶剂提取甙元后测定醌类单体成份含量测定薄层色谱法高效液相色谱中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第21页牛黄解毒片中游离蒽醌和总蒽醌测定—混合碱液比色法对照品溶液测定：以1，8-二羟基蒽醌为对照品，精密称取10mg于100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度（100µg/mL）。取1mL对照品液于10mL量瓶中，在水浴上蒸干，加5%氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱溶解并稀释至刻度，放置1小时，以5%氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱液为空白，在510nm波优点测定。样品测定：⑴游离蒽醌测定：取牛黄解毒片10片，刮去糖衣，精密称定重量，研细。称取一片重，置于具塞三角瓶中，精密加入氯仿100mL，称重，水浴上回流4小时，取下，加塞，放冷，称重，用氯仿补充至原重量，滤过，吸收滤液50mL于分液漏斗中，用蒸馏水20mL洗涤数次，至水层无色，弃去水液。氯仿层用5%氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱液振摇萃取数次，直至混合碱液无色，合并碱液，用20mL氯仿洗涤数次，至氯仿层无色，弃去氯仿层。将混合碱液在水浴上加热数分钟至氯仿挥尽，冷却，移入100mL量瓶中，并稀释至刻度，放置1小时，以5%氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱液为空白，在510nm处测定，计算游离蒽醌含量（相当于1，8-二羟基蒽醌含量）。中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第22页牛黄解毒片中游离蒽醌和总蒽醌测定—混合碱液比色法⑵总蒽醌测定：精密称取游离蒽醌项下牛黄解毒片粉一片置于150mL烧瓶中，加2.5mol/L硫酸30mL直火回流4小时，放冷，加入氯仿20mL，水浴回流0.5小时，放冷，吸出氯仿液，再加氯仿，重复操作至氯仿无色为止。合并氯仿层液，用蒸馏水洗涤数次，至水层无色，弃去水液。氯仿液用5%氢氧化钠-2%氢氧化铵混合碱液振摇萃取数次，至碱液无色，合并，用20mL氯仿洗涤数次，至氯仿层无色，弃去氯仿液。将碱液置水浴上加热至氯仿挥尽，冷却，移入50mL量瓶中，用混合碱液稀释至刻度，放置1小时，以5%氢氧化钠-2%氢氧化铵液为空白，在510nm处测定，计算游离蒽醌含量（相当于1，8-二羟基蒽醌含量）。

⑶结合蒽醌计算：每片含结合蒽醌量=每片含总蒽醌量—每片含游离蒽醌量。

中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第23页复方丹参片中丹参酮ⅡA含量测定—高效液相色谱法色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水（73：27）为流动相；检测波长为270nm。对照品溶液制备：精密称取丹参酮ⅡA对照品10mg，置50mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL，置25mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每1mL中含丹参酮ⅡA40µg）供试品溶液制备：取本品10片，糖衣片除去糖衣，精密称定，研细，取1g，精密称定，精密加入甲醇25mL，称定重量，超声处理15分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法：分别精密吸收对照品溶液与供试品溶液各10µL，注入液相色谱仪，测定，即得。中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第24页

§5挥发性成份分析概述理化性质物理性状（气味，比重，折光性）溶解性：易溶于有机溶剂显色反应酚类+三氯化铁→蓝，蓝紫，绿羰基+苯肼、羟胺→结晶体醛类+硝酸银胺→银镜内酯类+亚硝酰铁氰化钠+NaOH→红色并逐步消失奧类+浓硫酸→蓝，紫柠檬烯薄荷醇桂皮醛中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第25页

§5挥发性成份分析定性判别化学反应氧化反应(高锰酸钾，铬酸）香草醛硫酸反应薄层色谱吸附剂：硅胶、氧化铝展开剂：石油醚，正己烷，（加少许乙酸乙脂或苯）显色剂气相色谱法GC-MS或GC-FTIR中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第26页§5挥发性成份分析含量测定总挥发油含量测定

挥发油测定器蒸馏法单一成份含量测定气相色谱薄层色谱法高效液相色谱GC-MS或GC-FTIR联用技术中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第27页

§4其它类型成份分析香豆素类显色反应异羟肟酸铁反应与酚羟基反应FeCl3Gibbs试剂（2,6-二氯苯醌氯亚胺）反应→蓝色重氮试剂化反应中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第28页

§4其它类型成份分析香豆素类定性判别化学反应法荧光法薄层色谱法七宝美髯颗粒中补骨脂素、异补骨脂素判别取本品10g，研细，加醋酸乙酯20ml、盐酸0.5ml，超声处理20分钟，滤过，滤液挥干，残渣加醋酸乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液。薄层条件：硅胶G薄层板，展开剂正已烷—醋酸乙酯（4:1），显色剂为10%氢氧化钾甲醇溶液，紫外光灯365nm下检视。中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第29页

§4其它类型成份分析香豆素类含量测定分光光度法荧光光度法薄层色谱法高效液相色谱法气相色谱法中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第30页

§4其它类型成份分析有机酸概述理化性质 物理性状（存在形态，溶解性，挥发性）提取分离有机溶剂提取法离子交换法水蒸气蒸馏法

中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第31页

§4其它类型成份分析有机酸定性判别吸附色谱分配色谱含量测定酸碱滴定法→总有机酸分光光度法高效液相色谱法薄层色谱法其它方法中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第32页

§4其它类型成份分析环烯醚萜类概述—特殊单萜理化性质物理性状（存在形态，多苦味，稳定性）溶解性：易溶于水、甲醇，可溶于乙醇、丙酮、正丁醇薄层定性判别吸附剂：硅胶、聚酰胺显色剂：硫酸乙醇，茴香醛试液，香草醛硫酸试液，对二甲氨基苯甲醛硫酸试液龙胆苦甙中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第33页

§4其它类型成份分析环烯醚萜类含量测定高效液相色谱法薄层扫描法荧光分光光度法分光光度法复方栀子冲剂中栀子甙含量测定精密称取本品3g，置索氏提取器内，加甲醇回流提取6小时，回收甲醇至干，加水10ml溶解，用水饱和正丁醇提取，提取液蒸干，以甲醇溶解，经过已处理好活性炭-中性氧化铝柱，用甲醇100ml洗脱，搜集洗脱液，蒸干，残渣用2ml甲醇溶解，作为供试品溶液。薄层条件：硅胶GF254薄层板，展开剂氯仿—甲醇—25%氨水（4:1:0.1），检测波长247nm，参比波长370nm。中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第34页

§4其它类型成份分析单萜及二萜类含芍药甙中药制剂分析薄层色谱高效液相色谱含穿心莲内酯中药制剂分析薄层色谱回滴法比色法—总内酯薄层扫描或高效液相色谱法—单体成份穿心莲内酯中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第35页

§4其它类型成份分析多糖（polysaccharides）概述理化性质物理性状（存在形式，还原性）溶解性：溶于水，低浓度酸碱，盐溶液，不溶于醇、醚、丙酮提取分离水提醇沉※预防水解，注意消除酶、酸、碱等影响中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第36页

§4其它类型成份分析多糖（polysaccharides）提取分离金属盐沉淀法季胺氢氧化物沉淀柱色谱法（活性炭+等量硅藻土）凝胶色谱法（葡聚糖凝胶sephadex，琼脂糖凝胶sepharose，聚丙烯酰胺凝胶Bio-gelP）制备型区域电泳中药制剂中各类化学成分分析专家讲座第37页§4其它类型成份分析多糖（polysaccharides）定性判别