实验三消毒灭菌和药敏试验

关于实验三消毒灭菌和药敏试验第一部分消毒灭菌1.掌握常用的消毒与灭菌技术2.熟悉紫外线杀菌试验的原理3.了解细菌L型的诱导和菌落类型第2页,共22页，2024年2月25日，星期天擦拭法高压蒸汽灭菌法常用消毒灭菌的方法物理法

化学法浸泡法熏蒸法喷雾法热力消毒法生物净化法辐射消毒法燃烧法烤箱法煮沸法干热法湿热法日光曝晒法紫外线灯照射法电子灭菌灯法电离辐射法第3页,共22页，2024年2月25日，星期天种类方法效果用途干热焚烧用焚烧炉燃烧灭菌废弃污物、尸体烧灼火焰烧灼灭菌接种环，试管口干烤干烤箱，热空气160~170ºC×2h电磁波热效应灭菌灭菌玻璃器皿等耐高温的物品医疗器械湿热煮沸法100ºC×5~10分钟，沸水消毒(芽胞杀不死）饮水和食具高压蒸气灭菌法高压蒸气灭菌器103.4Kpa(15磅/吋2/1.05Kg/cm2)121.3ºC×15~20分钟灭菌（芽胞杀死）耐高温、耐湿物品（基础培养基、生理盐水、手术辅料等）红外线第4页,共22页，2024年2月25日，星期天高压蒸汽灭菌法的使用：p58加水→装锅→加盖→排气→灭菌→起锅第5页,共22页，2024年2月25日，星期天第6页,共22页，2024年2月25日，星期天高压蒸汽灭菌锅使用步骤及注意事项：①先将筒内注水，然后把要灭菌的物品装入内筒，再把盖拧紧，打开排气阀门，开始加热。②水沸腾后，排气阀门开始排出气体，待筒内气体全部排出后，关闭排气阀门。（见书表2-6）③筒内压力维持103.4kPa，121℃，15~30min，即可达到灭菌的目的。④关闭热源，自然放凉，待压力表指针下降到零时，方可开盖取物。第7页,共22页，2024年2月25日，星期天

：260~266nm（最佳杀菌波长）杀菌原理：使DNA上相邻的T碱基通过共价键结合成二聚体，干扰DNA复制与转录，导致细菌死亡。特点：穿透力弱，对皮肤、眼有损伤。适用范围：适用于空气和物体表面消毒。紫外线（ultravioletray，UV）第8页,共22页，2024年2月25日，星期天滤过除菌法杀菌机理：含有微细小孔<0.22μm,只允许液体或气体及孔径<0.22μm的颗粒通过，细菌不能滤过。不能除病毒、支原体适用范围：血清、毒素、输液、生物制品、抗生素以及空气等的除菌。第9页,共22页，2024年2月25日，星期天第二部分药敏试验1.掌握药敏试验的原理、步骤、结果及意义第10页,共22页，2024年2月25日，星期天第11页,共22页，2024年2月25日，星期天常用抗菌药物敏感性试验纸片扩散法（Kirby-Bauertest）稀释法（dilutiontest）E试验法（Etest）联合药物敏感试验特殊耐药菌及耐药酶的表型检测耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）的检测β-内酰胺酶、超广谱β-内酰胺酶检测等第12页,共22页，2024年2月25日，星期天1、纸片扩散法（K-B法）原理：含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断向纸片周围区域扩散，形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌生长被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度第13页,共22页，2024年2月25日，星期天方法：菌液制备：挑取孵育16-24h的血平板上数个菌落置于生理盐水管中，校正浓度至0.5麦氏标准；涂布接种：无菌棉拭蘸取菌液，在试管壁旋转挤去多余菌液后在MH琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60º，最后沿平板内缘涂抹1周；贴含药纸片：平板在室温下干燥3-5min，用无菌镊子将含药纸片紧贴于琼脂表面，各纸片中心相距应大于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm；孵育：35ºC16-18h，量取抑菌圈直径。第14页,共22页，2024年2月25日，星期天注意事项1纸片应分布均匀，中心距离不小于24mm。2含菌平板必须避免过浓或过稀。3纸片贴完后应在15min内将平板反过来，置于37度温箱中。4纸片一旦接触培养基就不应再挪动位置。5要注意无菌操作。第15页,共22页，2024年2月25日，星期天结果：抑菌圈大肠杆菌金葡菌

庆大霉素青霉素环丙沙星（直径mm）结论：？？？第16页,共22页，2024年2月25日，星期天结果判读：用刻度尺量取抑菌圈直径，根据CLSI（ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute）标准判读结果；报告：细菌对该抗生素是敏感（susceptible，S）；耐药（resistant，R）；还是中介（intermediate，I）。第17页,共22页，2024年2月25日，星期天18六、如何理解MIC值及药敏结果？

每种药物均提供定性和定量两种结果。定性：敏感（S）表示该药物对该细菌有抑制或杀灭作用。使用常规剂量可以达到有效的治疗效果。

中介（中度敏感，I）表示细菌对该药物治疗的敏感性低于敏感菌株，必须加大剂量以达到更高的血药浓度才能在特定的生理部位获得有效的临床效力；对于使用剂量有严格限制的药物则必须重复测试以确定敏感还是耐药。

耐药（R）表示药物常规剂量所达到的药物浓度不能抑制或杀死细菌，即使加大剂量也不能达到治疗效果或者超过了人体的正常耐受水平。定量：MIC（最低抑菌浓度）表示在体外达到抑制细菌生长所需要的最低的药物浓度。临床治疗要求的血药浓度一般为MIC值（μg/ml）的4-8倍。对于不同部位的不同药物，其浓度可能更高或更低。应具体情况具体分析，不可一概而论。

第18页,共22页，2024年2月25日，星期天19长期使用抗生素的病人应该怎样做药敏试验？

对于ICU病房的病人，可能每天都要做细菌学检查。因为这些病人多数免疫力较差，容易受条件致病菌的侵犯，而且反复发作。此外病原菌常呈多重耐药性其感染有以下几个特点；

1.长期使用抗生素的病人，不同时期（即使在很短的时间内）感染的病原菌种类可能不同，耐药性因此也不相同。

2、同一株细菌，在长时间用药时，仅需要3-4天就可以从对某种药物敏感发展为耐药。

3.长期使用抗生素容易诱发细菌产生L型变异。常规培养阴性时，进行L型细菌培养能够提高检出率。第19页,共22页，2024年2月25日，星期天形成条件：生物学特性：与医学关系：细胞壁中肽聚糖结构受理化或生物因素的直接破坏或合成抑制而形成。形态多形性；染色革兰阴性；培养高渗培养基；