【幽门螺旋杆菌疫苗研发的探究进展综述8200字（论文）】

幽门螺旋杆菌疫苗研发的研究进展综述目录TOC\o"1-2"\h\u7671幽门螺旋杆菌疫苗研发的研究进展综述 1230961.H.pylori全菌疫苗 2221712．以Urease为抗原的疫苗 2281393以Flagellum为抗原的疫苗 3252763.1H.pyloriadhesinA（HpaA） 4295593.2FlagellinA（FlaA） 4218734以毒力因子为抗原的疫苗 435734.1Cytotoxin-associatedgeneA（CagA） 4144034.2Cytotoxin-associatedgeneW（CagW） 5123484.3Cytotoxin-associatedgeneL（CagL） 5195444.4Neutrophil-activatingprotein（NAP） 6291464.5HeatShockProtein（Hsp） 6168995Outermembraneproteins（OMPs） 7176435.1OuterinflammatoryproteinA(OipA) 74385.3Lipoproteins20（Lpp20） 8234836以Outermembranevesicle（OMV）为抗原的疫苗 8147647总结和展望 9[摘要]幽门螺杆菌（Helicobacterpylori，H.pylori）是引起胃溃疡、十二指肠溃疡、胃癌等消化道疾病的主要致病菌，已经被世界卫生组织（WorldHealthOrganization，WHO）列为Ⅰ类致癌因子。目前治疗H.pylori主要是应用抗生素，但随着H.pylori耐药性的增加，H.pylori疫苗可能成为克服H.pylori的最终解决办法。尿素酶、毒力因子、外膜蛋白和鞭毛等成分在H.pylori感染过程中发挥着重要的作用，也成为H.pylori疫苗开发中潜在的候选抗原，以这些抗原为基础设计的疫苗在动物模型上取得了阶段性研究成果。本文对H.pylori疫苗的研究现状进行综述，为本领域研究提供参考。[关键词]幽门螺杆菌；尿素酶；粘附因子；毒力因子；鞭毛；外膜蛋白；疫苗ResearchprogressofHelicobacterpylorivaccine全球有超过50%的人感染了幽门螺杆菌（Helicobacterpylori,H.pylori），在一些社会经济不发达的地区，感染率已超过总人数的一半ADDINNE.Ref.{3EDD8628-D001-4822-8878-5DEAFB0433DA}[1,2]。胃内局部PH值可达到0.9-1.8，但H.pylori依然可存活、定殖和繁殖。主要原因如下：H.pylori产生尿素酶（Urease），分解尿素产生氨气能够中和胃的酸性环境；H.pylori借助鞭毛在胃中自由游走逃避宿主的免疫攻击,或者阻碍了先天性免疫功能和适应性免疫应答ADDINNE.Ref.{1DD2C763-1358-4962-B3E6-70DE44E54EBB}[3,4]NE.Cms_Insert；另外，细胞毒素相关蛋白A(cytotoxin-associatedgeneA,CagA)、空泡毒素A(vacuolationassociatedgeneA,VacA)和γ-谷氨酰转肽酶（γ-glutamyltranspeptidase，GGT）还可以诱导树突状细胞发生免疫耐受,抑制T细胞的增殖和信号转导导致细胞凋亡，使H.pylori免受T细胞的攻击ADDINNE.Ref.{94BBC543-F01A-4386-B34C-DCA9B3662B3A}[5]。H.pylori感染导致人体胃消化不良，患萎缩性胃炎、肠化生、消化性溃疡，甚至胃癌等疾病ADDINNE.Ref.{A26EBA53-0044-44CB-8D7F-32EC9FC5AF14}[6,7]。除了胃内消化性疾病之外，H.pylori还会导致一些胃外疾病，比如神经疾病阿尔茨海默症ADDINNE.Ref.{8C45201D-84AD-4F8E-A865-C70256D941BF}[8]、肝胆疾病酒精性脂肪肝ADDINNE.Ref.{B21A0DD8-8B08-494B-99F0-1BCDB4B19394}[9]等。因此，根除H.pylori对于治疗胃部疾病和其他与H.pylori相关疾病十分重要。目前临床治疗中H.pylori抗生素耐药性不断提高，甲硝唑、克拉霉素的耐药性在亚洲高达99.5%、85.5%ADDINNE.Ref.{1AEB3BB1-F7F4-4396-82E2-1DFF71C917AA}[10,11]。另一方面，抗生素使用易发生恶心、呕吐、腹痛、腹泻等不良反应，因此寻找具有预防和治疗功能的H.pylori疫苗具有重要意义。疫苗是一种成本低效益高的方法。预防性疫苗可在儿童出生后的几年注射接种预防性疫苗，预防H.pylori感染。治疗性疫苗可以在任何时期接种，通过增强机体的免疫应答消除H.pylori，预防胃癌等疾病的发生。但至今尚无安全、有效、成熟的H.pylori疫苗上市。1.H.pylori全菌疫苗H.pylori全菌抗原可通过超声破碎或福尔马林灭活菌体获得。研究发现，用全菌疫苗免疫接种小鼠可以引起高效的局部黏膜反应，降低H.pylori在胃内的定殖。SuganyaADDINNE.Ref.{A9567C96-2A17-40B7-B9B6-24ACF410DC8D}[12]等人以标准菌株H.pylori-SS1和26695全菌疫苗作为抗原，磷酸铝（AlPO4）作为佐剂免疫小鼠，发现随着时间的延长，抗体显示出更高的滴度值。HolmgrenADDINNE.Ref.{CA8CA1CD-2CE5-454D-AC1B-E1D876EA0584}[13]等人用新开发的佐剂多重突变霍乱毒素（choleratoxin,CT）和福尔马林灭活的H.pylori全菌疫苗接种小鼠，发现小鼠胃内H.pylori定植数量减少，血清IgG和黏膜IgA升高，IFN-γ和IL-17显著升高。虽然全菌疫苗能显著引起黏膜免疫和体液免疫，但是其抗原成分复杂，容易导致免疫性疾病，限制了其大范围应用。2．以Urease为抗原的疫苗pylori的尿素酶（Urease）曾被认为是研究H.pylori疫苗的最佳抗原，因其氨基酸序列相对保守，广泛分布在H.pylori表面，还能分解胃内尿素产生二氧化碳和氨气，中和胃的酸性环境，有利于H.pylori定植。有研究者将尿素酶与H.pylori的其他抗原分子结合在一起制备成混合抗原免疫小鼠，发现免疫效率高于单个组分。ZhongADDINNE.Ref.{C831B1F4-B82E-4410-B09D-85F06BDE7112}[14]等人设计了一种多价疫苗，抗原包括UreA、UreB和中性粒细胞激活蛋白（neutrophil-activatingprotein,NAP），与佐剂大肠杆菌双突变不耐热毒素（doublemutantheat-labiletoxin,dmLT）混合后免疫小鼠，免疫组小鼠脾脏和肠系膜淋巴结CD4+IL-17+T细胞比例增加，血清IgG和黏膜IgA反应增强，H.pylori定植数量减少,且UreA-UreB-NAP预防效果更佳ADDINNE.Ref.{1C276C07-A00C-4D81-BED8-0A4D484B2E88}[15]。另一种H.pylori尿素酶疫苗是用细菌或者病毒作为载体，将其呈递给抗原提成细胞，诱导机体产生免疫应答。ZhouADDINNE.Ref.{5531AE07-D734-44D0-9738-E5A0093149CF}[16]等人以枯草芽孢杆菌为载体建立了H.pylori尿素酶疫苗，发现免疫小鼠粪便中IgA和血清IgG显著升高，H.pylori定植量减少，表明枯草芽孢杆菌表达的UreB具有免疫原性，诱导小鼠产生了黏膜免疫和体液免疫。随后，ZhouADDINNE.Ref.{468CD7AF-F117-47F1-8855-CD9C2B025E0D}[17]又将外壳蛋白CotC和佐剂霍乱毒素B亚单位（choleratoxinBsubunit，CTB）与UreB结合形成CotC-CTB-UreB疫苗，临床实验证实其显著降低了H.pylori在胃内定植的数量。口服尿素酶疫苗直接经肠粘膜接种具有免疫学和实用价值，但是也会受到胃蛋白酶和PH的影响降低其免疫原性。TanADDINNE.Ref.{5779FAF5-6CD0-4CAA-9298-994BCF3DC71A}[18]等人开发了一种耐酸性HP55/PLGA纳米颗粒保护H.pylori多价疫苗CTB-UE和新型嵌合鞭毛（chimericflagellum，CF）（以下称为CCF），包被HP55/PLGA的多表位疫苗诱导小鼠产生高水平的尿素酶抗体和记忆T细胞，43%的小鼠体内产生显著的Th1/Th17免疫应答。这些数据表明HP55/PLGA纳米颗粒不仅是一种有效的免疫调节剂，还能作为一种载体增强亚单位疫苗的效力。邹全明教授研发的H.pylori尿素酶疫苗在2015年公布了其III期临床实验结果，其免疫效率达到了71.8%，疫苗对H.pylori的持续保护可达3年，且并未观察到不良反应ADDINNE.Ref.{6AE3132B-178B-4551-BFD8-9BB62DD041B7}[19]。载体尿素酶疫苗虽然诱导宿主产生免疫应答，但是其产生的保护力较低；因此，选择哪种抗原和尿素酶组成多价疫苗将免疫效率达到最优仍需深入的研究。3以Flagellum为抗原的疫苗H.pylori的鞭毛主要由鞭毛基体、鞭毛钩、鞭毛丝和鞭毛鞘组成，主要结构蛋白包括FlaA、FlaB、FliD、FlgK和HpaA，在H.pylori的定植、炎症和免疫逃逸中起重大作用。3.1H.pyloriadhesinA（HpaA）HpaA是一种保护性抗原，编码H.pylori鞭毛鞘蛋白，参与H.pylori和人胃上皮细胞粘附过程ADDINNE.Ref.{4897718E-CAAC-47A0-87AA-09B180B17BFC}[20]。ZhangADDINNE.Ref.{5BAE4961-46A5-4806-99EF-2F7347729DAA}[21]等人构建了一株乳酸球菌表达HpaA和Omp22，在小鼠体内检测到IgG抗体水平上升，激发了小鼠体液免疫，这是在乳酸球菌中同时有效表达两种H.pylori抗原融合蛋白的首次报道。为了弄清楚乳酸球菌对HpaA的免疫作用，ZhangADDINNE.Ref.{18F09F8E-FACC-4769-8E33-D3248FEB019D}[22]等人又利用乳酸球菌单独表达HpaA蛋白免疫BALB/c小鼠，小鼠口服疫苗后血清IgG水平升高，说明HpaA有效地传递到免疫部位，激发体液免疫。TobiasADDINNE.Ref.{854C31BB-4F64-4580-96F0-5A866A2079CE}[23]等人研发了一种非毒性霍乱弧菌O1作为载体提呈HpaA抗原，新开发的非毒性霍乱弧菌O1能显著增强HpaA的表达，免疫小鼠产生的血清HpaA抗体应答显著高于同样表达HpaA灭活的H.pylori疫苗，这种载体还有望表达H.pylori其他抗原，具有成为H.pylori候选疫苗的潜力。GuoADDINNE.Ref.{89188B67-7E02-41C7-A359-BFE5881B749B}[24]等人将HpaA和尿素酶、NAP、Hsp60连接在一起构成多组分疫苗，不仅诱导小鼠产生了抗Hsp60、HpaA、NAP和尿素酶抗体，还降低其胃内H.pylori的数量，是一种有希望对抗H.pylori感染的候选疫苗。3.2FlagellinA（FlaA）FlaA是鞭毛结构中的主要蛋白，表达FlaA的H.pylori菌株具有较强的运动能力，诱导IL-8分泌，促进胃组织炎症ADDINNE.Ref.{388896AD-4ED0-489B-9D8B-31840E773B1B}[25]。ZareiADDINNE.Ref.{D6A93705-AEB4-4D9F-95FB-AE105F36FF26}[26]等人利用IEDB和IgPred软件鉴定出FlaA214-353的抗原部分制成疫苗免疫小鼠，在小鼠体内检测到了IgG1、IgG2a、IgA和IFN-γ、IL-5，另外重组FlaA蛋白具有抗原性和免疫原性，可以用于设计针对H.pylori的特异性诊断试剂盒和重组疫苗。以H.pylori的鞭毛为抗原的疫苗激活TLRs4、5的能力较差，因此我们重点是建设重组的鞭毛融合蛋白，将鞭毛融合蛋白和特定的抗原融合能强烈的激活TLR5受体并引起体液免疫应答和细胞免疫应答。4以毒力因子为抗原的疫苗4.1Cytotoxin-associatedgeneA（CagA）CagA是H.pylori的主要毒力因子之一，通过激活细胞外信号调节激酶(extracellularsignal-regulatedkinase,ERK)和干扰两种主要的抑癌蛋白P53(ASPP2)、RUNX3导致宿主细胞发生癌变，还能作为IL-8诱导剂，吸引中性粒细胞到达感染部位，加重胃炎症ADDINNE.Ref.{68F05B49-FD8B-4BCD-89E1-2E1CCBC52503}[27-29]。PaydarniaADDINNE.Ref.{AC6E02AC-F1C1-4F93-B7AE-7F3A6C9A17E1}[30]设计了一种CagA疫苗，与佐剂CpG结合混合免疫小鼠，发现CpG佐剂携带的rCagA在整个实验过程中保持了抗原性，而且诱导了强烈的Th1免疫应答，有望成为抗H.pylori感染的有效疫苗。PanADDINNE.Ref.{5DC3EA3D-B215-4E9A-8A11-9AD53BF523D0}[31]则是将CagA与Urease、HpaA串联在一起制成多表位疫苗HUUC,然后与佐剂CTB一起口服免疫BALB/c小鼠，接种后小鼠血清IgG、胃和肠粘膜sIgA在体外中和了尿素酶活性，有效降低了小鼠H.pylori感染率。MalfertheinerADDINNE.Ref.{35038CA8-9F67-47CF-A503-B4BB471D4129}[32]等人研究了一种重组的CagA-VacA-NAP疫苗，进行随机的I/II期临床试验，发现该疫苗并不能提供预防H.pylori感染的功能，表明该疫苗研究失败。虽然研究者表示失败的原因可能是选取研究对象不当，但尚没有定论。CagA基因并不在所有的菌株中表达，而且保守性较差，抗CagA抗体还与血管壁抗原发生交叉反应，增加动脉粥样硬化和中风等危险ADDINNE.Ref.{E311EFD3-3F47-4BFE-93DC-1F00F5DCF639}[33]，这些因素影响了CagA疫苗的应用。4.2Cytotoxin-associatedgeneW（CagW）CagW在Cag-T4SS中起着重要的作用，CagW缺失影响菌毛细胞毒素相关蛋白L（cytotoxin-associatedgeneL,CagL）、CagI和CagH的水平，而且CagW对于CagA穿过细菌膜屏障是必不可少的ADDINNE.Ref.{547BB999-5B1A-4283-AA74-C37D71C040F0}[34]。ChehelgerdiADDINNE.Ref.{04EFBBE0-3A7B-43B6-ADDA-056B7888F430}[35]等人以CagW为靶点设计了关于H.pylori的DNA疫苗，并将其包被在壳聚糖中。结果显示无论有无壳聚糖包被，CagWDNA疫苗均可诱导小鼠产生高滴度的血清抗体IgG，观察到更高水平IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-12，且脾脏中CD4+和CD8+T淋巴细胞的百分比增加。这些结果表明壳聚糖CagWDNA疫苗可在小鼠模型中诱导更高的粘膜和体液免疫反应，并具有抵抗H.pylori感染的保护作用

。此外，该实验还证明了壳聚糖能够增强DNA疫苗的稳定性，保护其免受脱氧核糖核酸酶的水解，可作为一种佐剂增强免疫应答，为进一步开发新型壳聚糖纳米颗粒疫苗提供了参考。4.3Cytotoxin-associatedgeneL（CagL）CagL参与CagA向宿主细胞内的转运，有研究发现抗CagL多克隆抗体可抑制CagA蛋白的易位，因此，CagL是一种适合于H.pylori疫苗接种的候选抗原ADDINNE.Ref.{729C67B4-AFDE-42AD-93D5-D7568D6E5712}[36,37]。MohammadADDINNE.Ref.{51C5EBB2-C5D5-4697-88AF-6EBEF52E3799}[38]等人设计了乳酸球菌为载体的CagL可食用疫苗，喂食小鼠后，小鼠体内产生了CagL抗体，检测到了细胞因子IL-17和IFN-γ；在小鼠粪便中检测到特异性IgA反应，这些数据表示重组乳酸球菌CagL疫苗可作为抗H.pylori感染的食用疫苗。GhasemiADDINNE.Ref.{C7B5AE26-2E9C-4335-B199-469C57B22FEE}[39]将CagL和鞭毛钩相关蛋白（FliD），VacA和UreB的部分抗原表位嵌合在一起，形成融合蛋白rFUVL，与三种不同的佐剂CpG寡核苷酸（CpG

motifs,CpGODN）、Addavax、CTB免疫小鼠，接种疫苗的小鼠检测到了特异性IgG2a、IgG1和胃IgA抗体，细菌负荷量减少了约三个数量级,特别是rFUVL与佐剂CpGODN结合时，能够引起复杂的Th1、Th2、Th17反应。但是本研究中细菌负荷的减少是由单一免疫反应介导的，还是由不同类型免疫反应的相互作用介导的尚不清楚；是否可以通过加入额外的H.pylori抗原来提高免疫力尚待研究。4.4Neutrophil-activatingprotein（NAP）H.pylori-NAP是由NapA基因编码的一种保守蛋白质，具有刺激嗜中性粒细胞产生活性氧（ROS）和粘附于内皮细胞的能力，还能诱导合成IL-8、MIP-1α等炎性因子加重胃粘膜的损伤ADDINNE.Ref.{590E3B57-418A-4DC9-8CB9-EA0551588FDE}[40]。PengADDINNE.Ref.{11BED18C-E068-44AF-9375-FA22414B6B96}[41]等人利用重组的乳酸球菌表达H.pylori的NapA基因，将NZ3900-NapA免疫BALB/c小鼠，不仅诱导小鼠产生了体液免疫应答，还促进其产生极化的Th17、Th1反应；小鼠胃中H.pylori载量降低。首次证明了NapA促进Th17和Th1细胞极化的能力，并提供了一株工程乳酸球菌，有望成为一种抗H.pylori口服疫苗候选株。GuoADDINNE.Ref.{942EBDD2-8429-4121-AB43-5420345850B3}[42]等人将NAP、UE、CagA和VacA连接到一起组成融合蛋白FVpE，在小鼠体内，ELISA检测到了高水平的抗Urease、CagA、VacA和NAP特异性抗体。当FVpE疫苗和佐剂多糖（polysaccharides，PA）口服免疫小鼠时，可以诱导更高水平的血清IgG和IgA抗体，小鼠脾脏淋巴细胞产生的IL-4，IFN-γ和IL-17水平升高，胃中的H.pylori菌落数量减少。但是，H.pylori-NAP疫苗存在潜在弊端，其与神经组织存在交叉模拟，可能与多发性硬化（MS）或者视神经脊髓炎（NMO）患者抗AQP-4抗体相关的神经损伤有关，限制其推广应用。4.5HeatShockProtein（Hsp）Hsp是一种极其保守的分子，位于H.pylori的表面，具有高度的免疫原性，参与粘附宿主细胞，还能聚集尿素酶、稳定膜蛋白，这种作用使Hsp成为潜在疫苗的候选成分之一,用于治疗癌症和诱导保护性免疫ADDINNE.Ref.{F902D24A-05D3-4103-B8F0-0A9136C3D74D}[43,44]。IankovADDINNE.Ref.{15EA0E19-BECA-4B98-8D6D-13D6EDE1FC19}[45]等人建立了重组的麻疹病毒(MeaslesVirus,MV)HspA疫苗，免疫小鼠，发现8/9小鼠产生了长期抗HspA抗体应答，而且对抗MV的保护性免疫记忆发育无任何负面影响。表明MV-HspA是一种有效的用于癌症治疗和对H.pylori的免疫预防的候选疫苗。LuoADDINNE.Ref.{725D5107-DA00-4B4D-AED9-73CBB18485B6}[46]用了一种耐酸的HP55/PLGA纳米粒子（NPs）将H.pylori三种抗原Hsp、NAP和脂蛋白20（Lipoproteins20，Lpp20）包裹起来和3种不同的佐剂LPS、CpG和CF制成口服疫苗免疫小鼠,不仅诱导小鼠产生抗原特异性抗体反应和Th1、Th17细胞反应，而且其胃内H.pylori的数量也显著减少。虽然重组的HspAMV病毒疫苗免疫原性较好，但是其安全性值的关注；Hsp亚单位疫苗免疫原性低，放大炎症信号的能力不够，佐剂LPS、CpG和CF有助于增强口服H.pylori疫苗的作用，但安全性有待提高，而且口服疫苗的精准机制也有待研究。5Outermembraneproteins（OMPs）H.pylori感染的第一步是粘附于胃粘膜上，其外膜蛋白OMPs被认为是细菌与上皮细胞结合的主要黏附因子。最具表征的外膜蛋白为血型抗原结合黏附素（bloodgroupantigen‐bindingadhesin,BabA/HopS）、SabA/HopP，外膜炎性蛋白A(OuterinflammatoryproteinA,OipA/HopH)、HopQ和HopZ，不仅在H.pylori定植、粘附、免疫逃避中起着重要的作用，还能联合其他毒力因子CagA和VacA促进促炎症细胞因子释放ADDINNE.Ref.{348E8B01-9268-4129-80C7-8712190BF3BF}[47]。因此建立针对OMPs的疫苗具有重要意义,其产生的针对OMPs的抗体能使H.pylori丧失定植在胃粘膜的能力。5.1OuterinflammatoryproteinA(OipA)OipA编码炎症蛋白，是H.pylori感染过程中一种较强的致病因子，能够粘附到胃粘膜上与受体发挥作用增加IL-8的分泌，引起中性粒细胞浸润，加重胃的炎症；还能诱导宿主细胞凋亡，因此建立oipA疫苗具有重要的意义ADDINNE.Ref.{343D10E4-8541-4CF2-B08B-4D1255AAE04C}[48,49]。MahboubiADDINNE.Ref.{9BF95C75-F518-46F6-9B0E-BF75FB52AFED}[50]建立了关于OipA的亚单位疫苗，然后和佐剂蜂胶一起免疫小鼠，3周后进行检测发现接种OipA疫苗的小鼠胃内H.pylori数量减少，胃炎症减弱，,表明OipA疫苗可作为一种适合口服H.pylori疫苗，但是蜂胶没有起到佐剂的作用。NezafatADDINNE.Ref.{260ACCFE-EB19-4186-B4F0-FA9B7B25351F}[51]通过免疫学信息方法设计OipA的疫苗。他筛选了两种假设的保护性抗原H.pylori0487107-170、206-275和H.pylori090676-117、297-333、393-426，和佐剂不耐热肠毒素IIcB（labileenterotoxinIIcB，LTIIcB）、软骨寡聚基质蛋白（

cartilageoligomericmatrixprotein

，COMP）、OipA保护抗原、C端M细胞配体肽组成OipA候选疫苗，通过计算分析得到该疫苗会引起粘膜免疫和Th1、Th2、Th17混合免疫反应，但是具体效果有待研究。5.2Bloodgroupantigen‐bindingadhesin（BabA）BabA是H.pylori首次被鉴定黏附分子，能选择性地粘附于胃上皮细胞岩藻糖基的Lewisb(Leb)ADDINNE.Ref.{0B38F5FF-6B34-4682-BD45-19F1490B582A}[52]。BabA与Leb的结合后又通过增加CagA的易位加重胃炎症反应ADDINNE.Ref.{50BB7482-DD6D-4975-BBF0-556E7C8E26B3}[53]。有研究证明重组BabA在H.pylori感染的受试者中具有刺激体液和细胞免疫应答的作用，因此也BabA也被认为是H.pylori疫苗候选者抗原之一ADDINNE.Ref.{C6E49F4C-8032-44F7-89E4-D48768386B53}[54]。XueADDINNE.Ref.{C30B2510-A577-4BE4-8122-ED5C5F73BEDF}[55]设计了一种关于BabA的多价DNA疫苗。BabA-CagA-VacA3种抗原结合在一起免疫小鼠。ELISA检测到小鼠血清IgG升高，特别是IgG2a；TNF-α、IL-4、IL-10水平升高，但IL-2水平降低，表明BabA-VacA-CagADNA疫苗诱导小鼠产生了Th1、Th2的混合免疫应答。对DNA疫苗免疫的小鼠淋巴细胞进行检测发现CD3+、CD4+、CD8+T细胞亚群比例均升高，体外诱导的CD3+T细胞可抑制人胃癌细胞的生长，体内注射CD3+T细胞可抑制胃癌异种移植物的生长，H.pylori疫苗活化的CD3+T细胞对晚期胃癌具有潜在的治疗价值。5.3Lipoproteins20（Lpp20）Lpp20是H.pylori的一种高度保守的外膜脂蛋白,早期研究证明将抗Lpp20抗体输入感染H.pylori小鼠体内可以减少细菌定植,而且Lpp20的CD4+T细胞表位(Lpp2058-72、Lpp2083-97）可以刺激小鼠产生Th1型细胞因子。LiADDINNE.Ref.{2D46E157-C7F5-4519-A6B3-80ED1FA44AF8}[56]等人利用RANKPEP、MOE和DNAstar软件对CTB和LPP203个理论表位（Lpp2058-72、Lpp2083-97、Lpp20108-119）最佳组合在一起进行分析，构建CTB-Lpp20融合表位疫苗腹腔免疫小鼠，结果显示CTB-Lpp20诱导小鼠产生更多的IFN-γ和IL-17，还产生了特异性的IgG和IgA。SunADDINNE.Ref.{86D48EDB-0960-4DA3-B1DD-A1527454D1DF}[57]等人则是构建了一株携带H.pyloriLpp20基因的乳酸杆菌，动物实验表明，经口接种该工程菌能显著提高BALB/c小鼠血清Lpp20特异性IgG抗体水平。然而H.pylori菌株的OMPs高度易变限制了针对这些成分中任何一种的疫苗有效性。因此，寻找不易发生遗传变化的OMPs或将OMPs与CagA、VacA等抗原重组以获得更高的免疫保护率是OMPs作为免疫抗原的研究方向。6以Outermembranevesicle（OMV）为抗原的疫苗OMV是所有革兰性阴性细菌的正常生长过程中脱落形成的，参与细菌的发病机制、细菌细胞通讯和生物膜形成，而且具有高度的致炎性，携带一系列细菌蛋白和免疫原性表位，所以也被投入到新型疫苗的开发中ADDINNE.Ref.{A714FEB8-2EDB-4ADC-B69D-4A1F327D9E55}[58,59]。LiuADDINNE.Ref.{CA0071D7-9714-45AF-ADC6-BD668D8B6E0A}[60]等人从H.pylori7.13分离出OMV作为免疫原灌胃免疫小鼠，数据表明OMVs口服免疫小鼠可以引起强烈的体液免疫应答和黏膜免疫反应，而且主要诱导的是偏Th2免疫应答，能够显著降低H.pylori定植。这些数据证明OMVs作为新的候选抗原在疫苗设计中对控制H.pylori感染具有重要价值。目前对于H.pyloriOMV疫苗的研究比较少，OMV在细菌中的发病机制还未得到充分研究，成功研发H.pyloriOMV疫苗还有很长的一段路要走。7总结和展望预防及根除H.pylori对降低胃炎、胃癌发病率和减轻公共卫生资源负担有着重大意义。分析表明，以抗原分子为靶点的重组疫苗逐渐替代全菌疫苗。我们对近五年研究的疫苗进行总结，虽然这些疫苗在小鼠模型中获得了良好的免疫保护性和安全性，但仅有少数疫苗进入临床试验，目前也没有疫苗上市。主要原因可能是以下几点：(1)佐剂的安全性有待提高；（2）H.pylori的致病机制和逃避宿主免疫攻击的机制并未完全说明；（3）未找到抗原最佳组合，递送系统还存在一定的问题；（4）虽然在小鼠模型上取得令人满意的效果，但转化到临床试验结果却不尽如人意。未来H.pylori研发将尽可能以解决上述存在的问题为主要方向，开发高效而副作用小或者没有副作用的幽门螺杆菌预防性或治疗性疫苗仍然任重而道远。NE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertNE.Cms_InsertADDINNE.Bib参考文献[1]HirukawaS,SagaraH,KanetoS,etal.CharacterizationofmorphologicalconversionofHelicobacterpyloriunderanaerobicconditions[J].MicrobiolImmunol.2018,62(4):221-228.[2]ChristopheB,AnthonyA.EpidemiologyofHelicobacterpyloriinfection[J].Helicobacter.2017,22.[3]GuH.RoleofFlagellainthePathogenesisofHelicobacterpylori[J].CurrMicrobiol.2017,74(7):863-869.[4]KimJH,NamgungB,JeonYJ,etal.Helicobacterpyloriflagellin:TLR5evasionandfusion-basedconversionintoaTLR5agonist[J].BiochemBiophysResCommun.2018,505(3):872-878.[5]RicciV,GiannouliM,RomanoM,etal.Helicobacterpylorigamma-glutamyltranspeptidaseanditspathogenicrole[J].WorldJGastroenterol.2014,20(3):630-638.[6]YeoSH,YangCH.[PepticUlcerDiseaseAssociatedwithHelicobacterpyloriInfection][J].KoreanJGastroenterol.2016,67(6):289-299.[7]SunaN,EtikD,OcalS,etal.Theeffectofhelicobacterpylorieradicationonatrophicgastritisandintestinalmetaplasia:aretrospectivesinglecenterresearch[J].ActaGastroenterolBelg.2020,83(3):381-384.[8]ZendehdelA,RohamM.RoleofHelicobacterpyloriinfectioninthemanifestationofoldage-relateddiseases[J].MolGenetGenomicMed.2020,8(4):e1157.[9]TangDM,KumarS.TheAssociationBetweenHelicobacterpyloriInfectionandNonalcoholicFattyLiverDisease[J].CurrGastroenterolRep.2017,19(2):5.[10]O'ConnorA,LiouJM,GisbertJP,etal.Review:TreatmentofHelicobacterpyloriInfection2019[J].Helicobacter.2019,24Suppl1:e12640.[11]HuY,ZhangM,LuB,etal.HelicobacterpyloriandAntibioticResistance,AContinuingandIntractableProblem[J].Helicobacter.2016,21(5):349-363.[12]SuganyaK,PremKA,SekarB,etal.ProtectionofmiceagainstgastriccolonizationofHelicobacterpyloribytherapeuticimmunizationwithsystemicwholecellinactivatedvaccines[J].Biologicals.2017,45:39-46.[13]HolmgrenJ,NordqvistS,BlomquistM,etal.PreclinicalimmunogenicityandprotectiveefficacyofanoralHelicobacterpyloriinactivatedwholecellvaccineandmultiplemutantcholeratoxin:Anovelandnon-toxicmucosaladjuvant[J].Vaccine.2018,36(41):6223-6230.[14]ZhongY,ChenJ,LiuY,etal.OralimmunizationofBALB/cmicewithrecombinantHelicobacterpyloriantigensanddoublemutantheat-labiletoxin(dmLT)inducesprophylacticprotectiveimmunityagainstH.pyloriinfection[J].MicrobPathog.2020,145:104229.[15]ChenJ,ZhongY,LiuY,etal.Parenteralimmunizationwithacyclicguanosinemonophosphate-adenosinemonophosphate(cGAMP)adjuvantedHelicobacterpylorivaccineinducesprotectiveimmunityagainstH.pyloriinfectioninmice[J].HumVaccinImmunother.2020,16(11):2849-2854.[16]ZhouZ,GongS,LiXM,etal.ExpressionofHelicobacterpyloriureaseBonthesurfaceofBacillussubtilisspores[J].JMedMicrobiol.2015,64(Pt1):104-110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