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生化工程实验课程编号用专业：生物技术学时数：48学分数：1.5一、实验目的与要求：《生化工程实验》是生物技术专业必修课。本课程主要阐述如何从生物材料（动物、植物、微生物等）获取纯净、完整而有活力的生物大分子，以供对其结构与功能进行深入研究，从而揭示各种生命现象的本质。通过本课程的学习，使学生掌握如何从生物细胞分离纯化得到相关的生物大分子。不仅要使学生掌握一系列分离纯化技术而且要掌握纯度鉴定技术。主要介绍各专项技术的原理，同时也介绍操作要点及技巧，为学生从事分子水平的生物产品纯化研究奠定良好基础。本课程设计思路是以蚯蚓为材料，提取、纯化纤溶酶，最终得到电泳纯级的纯品，并对其纯度、性质进行鉴定，展开各项实验，将各个实验组织为一个完整的技术体系；使同学们都感到他们正在进行一项科研课题，更能激发同学们的学习兴趣，使学生在掌握操作技能的同时，更培养他们的科研思路和创新意识。二、实验项目与提要：序号实验项目必做选做时数内容提要实验类型每套仪器人数1生物大分子的抽提与沉淀技术必做31．采用机械法将蚯蚓进行破碎。2．选择适宜的缓冲液提取粗酶液3．盐的选择4．盐浓度的确定5．盐析6．沉淀蛋白的收集综合性22必做31．透析法（1）对透析袋进行选择和处理。（2）将蛋白质沉淀装入透析袋中。（3）在水或缓冲液中进行透析。注意更换外液2．凝胶层析法（1）选择并处理凝胶。（2）装住（3）点样（4）层析（5）收集样品、处理样品综合性23离子交换层析必做61、离子交换剂选择和处理2、装柱与平衡3、样品的处理与上样4、洗脱5、样品的收集和处理综合性24必做61、选择并处理凝胶。2、装住3、点样4、洗脱5、收集样品、处理样品综合性25聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)必做61、配制连续或不连续凝胶管或凝胶板2、点样3、电泳4、染色及测活5、鉴定和制备综合性46SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（测定纤溶酶的分子量）必做61、配制连续或不连续凝胶管或凝胶板2、点样3、电泳4、染色5、鉴定综合性47等电聚焦(IEF)必做61、制备PH梯度凝胶（PH=3—7）2、准备电极缓冲液3、加样4、聚焦5、样品组分的检测综合性48WesternBlotting必做121.
配制不连续凝胶2.
电泳3.
转膜4.
一抗孵育5.
二抗孵育6.
显影综合性4三、成绩考核方法1.平时成绩：占总学分10%（包括出勤、课堂提问、讨论情况等）。2.实验成绩：占总学分60%（包括出勤、实验报告等）。3.考试成绩：占总学分30%4.综合考核成绩：100%四、教材及主要参考书：教材：《现代生物技术概论》，何忠效等，北京师范大学出版社，北京，1999。主要参考书：[1]《酶学研究技术》，张树政等，科学出版社，北京，1987。[2]《色谱法》，林卓坤，科学出版社，北京，1984。[3]
《电泳》（第二版），何忠效，张树政，科学出版社，北京，1999。[4]《现代
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