甲基化检测在妇科肿瘤中的应用

来源的微创和无创样本中甲基化检测呈现出类似或优于传统方案和策略的可靠改变，与细胞生长、分化、凋亡及转化等生物学过程密切相关[1]。DNA甲基一、甲基化检测的方法学tDNA)、循环游离DNA(circulatingcellfreeDNA,cfDNA)、外泌体等物制性内切酶消化、基于甲基化抗体或甲基化CpG结合域亲和的富集方法等[2]。化基因组重亚硫酸盐甲基化测序(reducedrepresentationbisulfitesequencing,RRBS)、单分子实时测序技术(single-moleculesequencinginrea于DNA水解的高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法(liquidchromatograpimmunosorbentassay,ELISA)法、基于限制性内切酶及焦磷酸测序的(luminometricmethylationassay,LUMA)法等[3]。这些技术的进步使临床甲基9基因甲基化用于检测宫颈癌及癌前病变的曲线下面积(areaundercurve,AUC)为0.84[4],而PAX1基因诊断浸润癌可能优于目前的HPVDNA或细胞学检测[5]。甲基化产品WIDM-qCIN(DPP6、RALYL和GSX1这3种基因谱)诊断宫颈上皮内瘤变3级(cervicalintraepithelialneoplasiagrade3,CIN3)或更严重病变(CIN3+)的敏感度达78%,特异度>90%,在年龄≥30岁的人群中诊断敏感度上升至83%,诊断宫颈癌的敏感度达100%[6]。结合转录组产物的检出率>98%,包括罕见的组织类型和高危HPV阴性的宫颈癌[7]。这些甲基化诊断CIN3+敏感度和特异度分别为67.2%和89.6%,而HPV16/18检测诊断CIN3+的敏感度和特异度为68%和66.4%,二者联合诊断CIN3+的特异度可提高至96.1% 加权的筛查产品(命名为S5检测),在设定临界值为0.80时，检测CIN3和浸润癌的敏感度分别为91.18%和99.81%[10]。胞病理学[11]。HPV阳性女性3年累积发生CIN2+的风险为6.8%,而ZNF671/低至4.5%,二者均阴性3年累积发生CIN2+的风险为2.9%[12]。一项随访10年的队列研究提示HPV16+女性发生CIN3+的10年累积发病率约为25%,其中若HPV16的CpG5602、6650、7034、7461、31和37高甲基化及E6癌蛋白阳性，累积发病率风险危险比为8.9~11.5倍[13]。义为不能明确意义的非典型鳞状细胞(atypicalsquamouscellsinedsignificancIL更小，将导致更多的阴道镜转诊，对女性身心造成影响。对这一人群的精准甲基化检测预测CIN2+具备高特异度(99.3%)[14],弥补了HPV检测低特异此外，已有研究利用外周血cfDNA、尿液甲基化检测进行宫颈癌筛查的报道[17-18],其准确性不劣于细胞学方案。归或进展有预测价值，可用于指导临床管理。对未经治疗C颈脱落细胞FAM19A4/miR124-2基因甲基化状态，阴性者的2年内累积转归率达74.7%[19]。对治疗后的CIN2/3患者，分析宫颈脱落细胞中JAM3基因甲基化状态，预测治疗后结局为治愈或复发的敏感度和特异度分别为94.8%和93.7%[2值为0.833[22]。世界卫生组织推荐HIV人群筛查宫颈癌的年龄提前至25岁，筛查的频率也较普通人群更频繁[23]。甲基化也可用于HIV人群宫颈癌的检测、癌前病变进展及转归预测。在宫颈脱落细胞学中ASCL1、LHX8甲基化作为HIV女性检测CIN3+的AUC值为0.79~0.81[24]。HIV人群同时合并CIN2/3,治疗后若宫颈脱落细胞中ASCL1基因或LHX8基因甲基化阴性，4年内复发的风险<5%[25]。-2甲基化试验阴性几乎可排除CIN3的孕妇进展成恶性疾病的风险[26],这子宫内膜癌是全球女性第6位的高发癌症，目前甲基化方案[28],诊断子宫内膜癌的敏感度和特异度达87.0%~91%、86.0%~95.有出血症状的患者中诊断子宫内膜癌的敏感度和特异度分别达97%和76%,在绝经后阴道流血分组中采用阴拭子的诊断子宫内膜癌的敏感度和特异度分别达10品筛查子宫内膜癌，敏感度和特异度分别达87.5%和90.8%,联合经阴道超声可进一步改善筛查的敏感度[30]。这些甲基化筛诊子宫内膜癌的研究结果均优于具有相似的准确性。Sangtani等[31]采用卫生棉条采集细胞学样本进行HOXA测[33]。巢癌缺乏有用的诊断标志物，临床使用的血清生物标1.外周血cfDNA方案：Liang等[35]以1272个卵巢癌特异性差异甲基化块与卵巢癌的敏感度94.7%,特异度88.7%,在CA125检测阴性的患者中进一步识别卵巢癌患者的AUC=0.88,但识别I期卵巢癌敏感度稍降低至83%。Singh等9和HIC1基因甲基化状态，任一或二者诊断卵巢癌敏感度为88.9%,AUC为0.9,数等)比较的研究更少。此外，目前研究都局限于良仅能发现20%左右的卵巢癌。Chang等[37]采用宫颈刮片取样分析POUGI2基因高甲基化状态，其用于检测卵巢癌的敏感度和特异度分别为61%和62%~N1和TBX15基因甲基化组合似乎有更高诊断卵巢癌的效能，敏感度达81%,特异度达84%。转录组水平分子也有望作为甲基化标志物，如微小RNAmiR-145可能通过抑制甲基化事件上调抗肿瘤分子的表达[39],长链非编码RNA(LOC134466)在81%的高级别浆液性癌中呈现高甲基化状态[40]。这些方案为甲基化检尚待制备工艺和检测技术的进步。(3)目前还没有基于社区人群的甲基化检测，取代。(4)对甲基化结果以及肿瘤患者的随访、检测不足，随访时间短、研究erapy[J].Cell,2012,150(1):12-27.DOI:10.1016/j.cell.2012.06.013.ionandmethylomicanalyses[J].Methods,2021,[3]MartisovaA,HolcakovaJ,Izdtumors:functionsandmethodsofdetection[J].IntJMolSci,202[4]HeL,LuoX,Bucervicalexfoliatedcellsarehighl(pre)cancerinhrHPV-positivewoonofPAX1geneincervicalcancerscreening[J].IntJGynecolCanc2020,30(10):1488-1492.DOI:10.1136/ij[6]HerzogC,SundströmK,JonesA,etal.DNAmethylationdinvasivecervicalcancerwiththeWIDW-qCINtest[J].ClinEpigenetics,2022,14(1):150.DOI:10.1186/s13148-022-01353-0.[7]VinkFJ,MeijerC,Cliffordionininvasivldwidestudy[J].IntJCancer,2020,147(4)elf-testsforprimaryhumanpa[9]LIL.2022-RA-902-ESGOgestepafterhrHPVtestingtoimprovecolp[10]BanilaC,LorinczAT,Scibior-BentkowskaD,etal.Clinicalformanceofmethylationasabiomarkerforce [11]SaltaS,LoboJ,Magalhäeng:asystematicreviewandmeta-15(1):125.DOI:10.1186/s13148[12]ZhangL,ZhaoX,HuS,ettJCancer,2022,151(6):878-887.DOI:10.1002/ijc.34041.methylationcombinedwithE6oncoproteinincervicalcancerscreenin[14]OranratanaphanS,KobwitayaK,TermrungruanglertPacJCancerPrev,2020,21(2):473-477.DOI:10.31557/APJCP.2020.22022,151(7):993-1004.DOI:10.1002/ijc.34050.[16]VerhoefVM,BosgraafRP,vanKemenadeFJ,etal.Triagebymethylation-markertestingversuscytologyinwomenwhotestHPV-positivisedcontrollednon-inferioritytrial[J].LancetOn315-322.DOI:10.1016/S1470-2045(14)70019-1.andutilityofcell-fr03-1410.DOI:10.1038/s41416-022-01868-6.[18]vandenHelderrdetection[J].PapillomavirusRes,2020,9:100193.DOI:10.1016/j[19]KremerWW,DickS,Heidemah-gradecervicalintraepithelialneoplasiaisassociatedwithabsncol,2022,40(26):3037-3046.DOI:10.1200/JC0.21.02433.evalueofDNAmethylationincervnosis[J].ArchGynecolObstet,2018,298(3):589-596.DOI:10.1007/intraepithelialneoplasiaandcervicalcancerusingsingle-baseresolutionmethylomeandhydroxymethylome[J].ClinTranslMed,2021,11s,2021,49(5):3000605211018443.DOI:10.1177/0300060521101[23]WorldHealthOrganization.WHOguidmentofcervicalpre-cancerlsecondedition[EB/0L].[2021-07-07].https://www.who.978924003082[24]KremerWW,VanZummerenM,NoviantiPW,etal.DetectionofhithHIV[J].JIntAIDSSoc,2018,21(8):e25165.DOI:10.1002/jia2.251ngbyASCL1/LHX8methylationanalysisinwomenwithHIVtreateervicalintraepithelialneoplasiagrade2/3[J].AIDS,2022,36(7):953-961.DOI:10.1097/QAD.00000000000O3197.[26]HamplM,HesselinkAT,MeijerC,etaR124-2methylationperformanceinthemanagementofCIN3diagnosedpregnantwomen[J].IntJCancer,2022,151(9):1578-1585.DOI:10.1002/ijc.34153.fromcervicalscrapings[J].C[28]HuangRL,Sungcervicalscrapings[J].ClinCancerRes,2017,23(1):263-272[30]孔令华，肖晓萍，万茹，等.DNA甲基化检测在绝经后女性子宫内膜癌筛查中的应用价值[J].中华医学杂志，2023,103(12):907-912.DOI:10.3760/112137-20220929-02058.[31]SangtaniA,WangC,WeaverA,etal.Combiningcopyylationmarkers,andmutationsasapanelforendometrialctionviaintravaginaltamponcollec[32]vandenHelder[33]MaritschneggE,WangY,PechaN,etal.LavageoftheuterinecavityformoleculardetectionofMullerianduf-conceptstudy[J].JClinOncol,2015,33(36[34]WidschwendterM,ZikanM,WahlB,etal.ThepotentialofatingtumorDNAmethylationanalysisfortheeagementofovariancancer[J].GenomeMed,2017,9(1):116.DOI:10.1186/s13073-017-0500-7.[35]LiangL,Zhang