实验五 植物组织总糖和还原糖含量的测定

*1实(Shi)验五植物组织总糖和还原糖含量的测定（3,5-二硝基水杨酸法）

第一页，共十二页。2（1）掌握还原糖和总糖测定的基本原理；（2）学(Xue)习用3,5-二硝基水杨酸法测定还原糖的方法。一、实验目的第二页，共十二页。二、实验(Yan)原理

还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定。还原糖的测定是糖定量测定的基本方法，其基本原理是用比色法对还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量。第三页，共十二页。二、实验(Yan)原理在碱性条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸（DNS）共热，3,5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其他产物。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的吸光值，查对标准曲线并计算，就可以分别求出样品中还原糖和总糖的含量。NaOH黄色棕红色加热第四页，共十二页。5三、仪器和(He)试剂1、仪器：电子天平、恒温水浴锅、分光光度计（722型）。2、试剂：2mg/mL葡萄糖标准液、蒸馏水、3,5-二硝基水杨酸、6mol/L盐酸、碘-碘化钾、6mol/L氢氧化钠第五页，共十二页。6四、实验步(Bu)骤1、葡萄糖标准曲线的绘制取6支试管，按表加入试剂。以葡萄糖含量（mg/mL）为横坐标，光吸收值（OD540）为纵坐标，绘制标准曲线。第六页，共十二页。7四(Si)、实验步骤2、样品中还原糖的提取（1）称取5g烟草叶片放入研钵中，加入5mL蒸馏水研磨成匀浆液。将匀浆液全部转移至锥形瓶里。（2）再用10mL蒸馏水冲洗研钵，并将冲洗液全部转移至锥形瓶里。（3）往锥形瓶里加入20mL蒸馏水，摇匀，于50℃保温20min，不时搅拌。（4）用漏斗过滤，将滤液全部收集到烧杯中，最终用50mL容量瓶加蒸馏水定容至50mL，即为还原糖提取液。第七页，共十二页。8四、实验(Yan)步骤3、样品中总糖的提取（1）称取0.5g烟草叶片放入研钵中，加入5mL蒸馏水研磨成匀浆液。将匀浆液全部转移至锥形瓶里。（2）再用10mL蒸馏水冲洗研钵，并将冲洗液全部转移至锥形瓶里。（3）往锥形瓶里加入10mL6mol/L盐酸，摇匀，于沸水浴中加热30min，不时搅拌。（4）取出1-2滴置于白瓷板上，加1滴碘-碘化钾溶液检测水解是否完全。如水解完全，则不呈现蓝色。第八页，共十二页。9四(Si)、实验步骤3、样品中总糖的提取（5）水解完毕后，用漏斗过滤，将滤液全部收集到烧杯中。冷却至室温后加入6mL6mol/L氢氧化钠溶液。（6）最终用100mL容量瓶加蒸馏水定容至100mL，即为总糖提取液。第九页，共十二页。10四、实(Shi)验步骤4、样品中含糖量的测定取5支试管，按表加入试剂。第十页，共十二页。11五、实验(Yan)结果与分析

按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量。

式中，C为还原糖和总糖提取液的浓度，mg/mL；V为还原糖和总糖提取液总体积，mL；m为样品质量，g。第十一页，共十二页。内容(Rong)总结1。电子天平、恒温水浴锅、分光光度计（722型）。（2）再用10mL蒸馏水冲洗研钵，并将冲洗液全部转移至锥形瓶里。（4）取出1-2滴置